Материалы и методы. Проведение исследования

Практическое исследование анализа крови разными методами

Исследования проводились в период с 20.04.2015 по 15.05.2015 года на базе МБЛПУ «ГКБ№1», клинической лаборатории.

Материалом исследования служили образцы венозной крови пациентов, в количестве 20 штук, взятых утром натощак из локтевой вены.

Для автоматического исследования гематологических параметров крови служил гематологический анализатор «Drew 3» (Великобритания/США), для дифференцировки 18 параметров крови, который относится к 3-х дифференциальному автоматическому анализатору нового поколения, работающий на кондуктометрическом принципе измерения частиц (форменных элементов крови). Последние, проходя через апертуру камеры подсчета, выдают определенный электрический сигнал. Количество регистрируемых сигналов соответствует количеству форменных элементов крови, вызвавших эти сигналы. Высота амплитуды сигналов соответствует размеру форменных элементов крови.

Контроль качества работы анализатора проводился контрольной кровью с известными показателями параметров крови. Данные результатов, полученные с анализатора, после проведения анализа с контрольной кровью соответствовали действительному содержанию элементов крови в контрольном материале.

На гематологическом анализаторе «Drew 3» проводился анализ следующих показателей крови:

* WBC – количество лейкоцитов крови (х 10^9 /л);

-LYM# – лимфоциты (х 10^9 /л);

-MID# – средние клетки (моноциты, эозинофилы и базофилы) (х 10^9 /л);

- дифференциация лейкоцитов на GRA# – нейтрофилы (х 10^9 /л);

- LYM% - процентное содержание лимфоцитов;

- MID% - процентное содержание эозинофилов, базофилов, моноцитов;

- GRA% - процентное содержание нейтрофилов;

* RBC – количество эритроцитов (х 10^12 /л);

* HGB – концентрация гемоглобина (г/дл или г/л);

* HCT – гематокрит;

* MCV – средний объем эритроцита;

* MCH– среднее содержание гемоглобина в эритроците (пг);

* MCHC– средняя концентрация гемоглобина в эритроците (г/дл);

* RDW– показатель гетерогенности эритроцитов по объему, характеризует степень анизоцитоза;

* PLT- количество тромбоцитов (х 10^9 /л);

* MPV – средний объем тромбоцитов;

* Pct – тромбокрит;

* PDW- распределение тромбоцитов.

Далее нами было произведено подсчет количество лейкоцитов, тромбоцитов и лейкоформулы ручными методами.

Все морфологические исследования проводились на микроскопе МС-50.

Было осуществлено подсчет лейкоцитов под микроскопом после лизирования эритроцитов в 100 больших квадратах счетной сетки и пересчитанных на 1 л крови, исходя из объема квадратов и разведения крови. Подсчет лейкоцитов должен быть произведен в течение 2-4 ч после взятия крови.

Реактивы: 3-5% раствор уксусной кислоты, подкрашенный несколькими каплямираствора метиленового синего (для окраски ядер лейкоцитов). Раствор голубого цвета, длительно годен к употреблению.

Ход определения: в пробирку с 0,4 мл уксусной кислоты набирают 20мкл крови (разведение 1:20). Выдувают кровь из пипетки на дно пробирки, затем тщательно перемешивают, повторно ее набирая и выдувая. Заполненную камеру оставляют в горизонтальном положении на 1 мин (для оседания лейкоцитов). Лейкоциты подсчитывают в 100 больших квадратах с малым увеличением (окуляр 10х, объектив 8х). Для большей точности счет лейкоцитов проводят по всей сетке в больших квадратах (неразделенных на малые квадраты и полосы), начиная с левого верхнего угла сетки. Для лучшего контрастирования затемняют поле зрения, опуская конденсор и закрывая диафрагму.

Расчет числа лейкоцитов проводят по формуле:

Х= = а*50,

где Х — число лейкоцитов в 1 мкл крови,

а - число лейкоцитов в 100 большихквадратах,

20 — разведение крови,

100- число подсчитанных квадратов,

250—объем одного большого квадрата 1/250.

Далее провели подсчет количества тромбоцитов в мазках крови (по методу Фонио).

Принцип: метод основан на подсчете числа тромбоцитов в окрашенных мазках крови на 1000 эритроцитов с расчетом на 1 л крови, исходя из содержания в этом объеме количества эритроцитов.

Реактивы: применяют 5% раствор цитрата натрия.

Ход определения: реактив набирают в капилляр Панченкова до метки “75 и вносятв пробирку, затем добавляют кровь, взятую тем же капилляром, до метки “0”.

Содержимое пробирки перемешивают и готовят тонкие мазки. Фиксируют и окрашивают по Романовскому-Гимзе в течение 30-45 мин. Высохшие мазки микроскопируют с иммерсионным объективом, подсчитывая количество тромбоцитовв тонких местах препарата (эритроциты должны быть расположены разрозненно).

Подсчет провели следующим образом: в каждом поле зрения микроскопа считали число эритроцитов и тромбоцитов, передвигая мазок до тех пор, пока не будут просчитаны 1000 эритроцитов.

Расчет: количество тромбоцитов на 1000 эритроцитов составляет А. Зная число эритроцитов в 1 л крови, подсчитывают количество тромбоцитов в 1 л крови.

Например: А=60, 60х5=300х10 г/л.

Далее нами был произведен подсчет лейкоцитарной формулы.

Подсчет лейкоцитарной формулы производят в окрашенных мазках венозной крови. Считать нужно не менее 200 клеток, исключение составляют выраженные лейкопении - снижение количества лейкоцитов в крови, а затем выводят процентное соотношение отдельных видов лейкоцитов.

Приготовление мазков крови для подсчета лейкоцитарной формулы.

На край предметного стекла наносят каплю крови. Мазок делают особенным шлифовальным стеклом, поставив его под углом в 45° к предметному стеклу впереди капли. Подведя стекло к этой капле, ждут, пока кровь расплывется вдоль его ребра, затем быстрым легким движением проводят шлифовальное стекло вперед, не отрывая от предметного раньше, чем иссякнет вся капля.

Окраску препаратов проводили следующим образом:

· Высушенный мазок в течении 3-х минут фиксируем в растворе Мая—Грюнвальда;

· Промываем под проточенной водой;

· Докрашиваем в течении 3-х минут свежеприготовленным водным раствором краски Романовского (1:9).

Дата добавления: 2015-07-13