Требования, предъявляемые к средам

ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ.

Питательная среда — вещество или смесь веществ, применяемая для культивирования макро- и микроорганизмов. Существует множество стандартных биологических питательных сред.

· быть питательными, то есть содержать в легко усвояемом виде все вещества, необходимые для удовлетворения пищевых и энергетических потребностей. При культивировании ряда микроорганизмов в среды вносят факторы роста — витамины, некоторые аминокислоты, которые клетка не может синтезировать.

· иметь оптимальную концентрацию водородных ионов — pH, так как только при оптимальной реакции среды, влияющей на проницаемость оболочки, микроорганизмы могут усваивать питательные вещества.

Для большинства патогенных бактерий оптимальна слабощелочная среда (pH 7,2-7,4). Исключение составляют холерный вибрион — его оптимум находится в щелочной зоне (pH 8,5-9,0) и возбудитель туберкулёза, нуждающийся в слабокислой реакции (pH 6,2-6,8).

Чтобы во время роста микроорганизмов кислые или щелочные продукты их жизнедеятельности не изменили pH, среды́ должны обладать буферностью, то есть содержать вещества, нейтрализующие продукты обмена.

· быть изотоничными для микробной клетки; то есть осмотическое давление в среде должно быть таким же, как внутри клетки. Для большинства микроорганизмов оптимальная среда, соответствующая 0,5 % раствору натрия хлорида.

· быть стерильными, так как посторонние микробы препятствуют росту изучаемого микроба, определению его свойств и изменяют свойства среды.

· плотные среды́ должны быть влажными и иметь оптимальную для микроорганизмов консистенцию.

· обладать определённым окислительно — восстановительным потенциалом, то есть соотношением веществ, отдающих и принимающих электроны, выражаемым индексом RH₂. Например, анаэробы размножаются при RH₂, не выше 5, ааэробы — при RH₂ не ниже 10.

· быть по возможности унифицированным, то есть содержать постоянное количество отдельных ингредиентов.

Желательно, чтобы среды́ были прозрачными — удобнее следить за ростом культур, легче заметить загрязнение среды посторонними микроорганизмами.

Классификация

· По исходным компонентам:

· натуральные среды — готовят из продуктов животного и растительного происхождения(мясо, костная и рыбная мука, кормовые дрожжи, сгустки крови и др.)

· синтетические среды — готовят из определённых химически чистых органических и неорганических соединений, взятых в точно указанных концентрациях и растворённых в дважды дистиллированной воде.

· По консистенции(степени плотности):

· жидкие

· полужидкие

· плотные

Плотные и полужидкие среды готовят из жидких, к которым прибавляют агар-агар или желатин. Кроме того, в качестве плотных сред применяют свёрнутую сыворотку крови, свёрнутые яйца, картофель, среды с силикагелем. Некоторые микроорганизмы используют желатин как питательное вещество — при их росте среда разжижается.

· По составу:

· простые: мясопептонный бульон(МПБ), мясопептонный агар(МПА),, питательный желатин,

· сложные — готовят прибавляя к простым средам кровь, сыворотку, углеводы и другие вещества.

· По назначению:

· основные — служат для культивирования большинства патогенных микробов. МПБ, МПА, бульон и агар Хоттингера, пептонная вода.

· специальные — служат для выделения и выращивания микроорганизмов, не растущих на простых средах.

· элективные(избирательные) — служат для выделения определённого вида микробов, росту которых они благоприятствуют, задерживая или подавляя рост сопутствующих микроорганизмов. Среды становятся элективными при добавлении к ним определённых антибиотиков, солей, изменения pH.Жидкие элективные среды называют средами накопления.

· дифференциально-диагностические — позволяют отличить один вид микробов от другого по ферментативной активности.

· консервирующие — предназначены для первичного посева и транспортировки исследуемого материала.

4. СПОСОБЫ СОЗДАНИЯ АНАЭРОБНЫХ УСЛОВИЙ:

Анаэробные бактерии можно культивировать только на специальных бескислородных питательных средах с низким окислительно-восстановительным потенциалом. Для контролем за насыщением этих сред кислородом используют специальные радокс-индикаторы. Для сохренения низкого ОВП среды должны быть агаризованы. Для культивирования оглигатно-анаэробных бактерий среды должны быть свежеприготовленными (не позднее 2 часов). Для успешного выращивания требуется внесение большого количества посевного материала. Это связано с тем, что в больших количествах анаэроб способны быстрее понижать ОВП среды. Среды должны очень богаты питательными субстратами и витаминами, факторами роста, т.к. анаэробный типа дыхания менее продуктивный, чем аэробный.
Методы создания анаэробных условий

· Физичесикие методы. Для удаления растворенного в питательных средах кислорода используют их регенерацию путем кипячения в течение 15-20 минут на водяной бане с последующим быстрым охлаждением до 50 градусов. После посева поверхность среды заливают парафином или вазелиновым маслом. Так же, возможен посев в столбик плотной или полужидкой среды на глубину 10-12см. кислород с воздуха диффундирует на 1,5-2см, а в глубине создаются благоприятные условия.

Применение анаэростатов и анаэробных боксов.

· Химические методы. Для поглощения кислорода из замкнутого простанства можно использовать гидросульфит натрия. Для связывания кислорода в 1л объема используют 100мл свежеприготовленного 20% Na2S2O4 и 16мл 50% КОН.

Для связывания остатков кислорода используют вещества-редуценты, к которым относится тиогликоевая кислота или тиогликолат натрия, аскорбиновая кислота, различные сахара, цистин и цистеин, муравьинокислый натрий и т.д.

· 3.Биологические методы Совместнео выращиевание анаэробов и аэробов (метод Фортнера). При нем на одну половину чашку засевают исследуемы материал, а на другую – культуру аэробного или факультативно-анаэробного микроба, способного энергично поглощать кислород.

Помещение в среду кусочков печени, почек, мозга. При это тканевые клетки активно поглощают и адсорбируют кислород, а в среде создаются анаэробные условия.

Дата добавления: 2015-07-13