Окраска по способу Ожешко и Нейссера. Назначение. основная краска, протрава, обесцвечивающий фактор, дополнительная краска, механизм. Основные этапы. Механизм.

Окраска по Циль-Нильсону. Назначение, основная краска, протрава, обесцвечивающий фактор, дополнительная краска, механизм.

Окраска по методу Грама. Назначение, основная краска, протрава, обесцвечивающий фактор, дополнительная краска, механизм.

Метод Грама введен в 1884 году датским микробиологом Гансом ХристианомГрамом и является важным таксономическим признаком.

К грамположительным бактериям относятся те, у которых комплекс, образуемый генцианвиолетом и йодом, удерживается при обработке спиртом.

Грамотрицательными называют те бактерии, которые не обладают свойством удерживать комплекс и обесцвечиваются при обработке спиртом.

Способность или неспособность клеток удерживать комплекс генцианвеолета с йодом связывают с различным составом и структурой клеточной стенки бактерий.

Методика окраски.

1.На фиксированный мазок накладывают фильтровальную бумагу, пропитанную генцианвиолетом и наносят каплю воды на 2 минуты. Генцианвиолет основная краска.

2. Бумагу сбрасывают и, не промывая водой, наливают раствор Люголя на 1 минуту. Раствор Люголя протрава: усиливает действие основной краски у грамположительных бактерий.

3. Препарат обесцвечивают 3-5 каплями спирта в течение ЗОсекунд до прекращения отхождения фиолетовых струек краски. Спирт обесцвечивающий фактор.

4. Промывают водой.

5. Докрашивают водным фуксином Пфейффера в течение 1-2 минут. Водный фуксин дополнительная краска. Грамположитель-ные бактерии (кокки) сине-фиолетового цвета, грамотрицательные (палочковидные формы) розового цвета.

6. Промывают водой, высушивают фильтровальной бумагой и микроскопируют под иммерсией.

Метод используется для окраски спор и кислотоустойчивых бактерий (микобактерии туберкулеза). Кислотоустойчивость связана с наличием в клеточной стенке мяколовых кислот. Метод Циль-Нильсена основан на использовании концентрированных красителей прогревания.

Методика окраски:

1. На фиксированный мазок накладывают белую фильтровальную бумагу и наливают карболовый фуксин Циля. Препарат 2-3 раза подогревают в в пламени до появления паров.	Карболовый фуксин-основная краска; прогревание-протрава.
2. Препарат промывают водой, бумагу сбрасывают.
3. Препарат обесцвечивают в 5% растворе серной кислоты.	Серная кислота-обесцвечивающий фактор.
4. Промывают водой
5. Докрашивают синькой Леффлера 3-5 минут	Синька Леффлера — дополнительная краска
6. Промывают водой, высушивают, смотрят под иммерсией	Кислотоустойчивые бактерии и споры рубиново- красного цвета, а остальная микрофлора — синего цвета

Методика окраски по Ожешко.Этот метод служит для выявления у бактерий спор. Споры имеют вид круглых или овальной формы образований, находящихся в теле микробной клетки. Различают три вида расположения спор по отношению к длинной оси палочки: центральное – спора находится в центре тела микроба, субтерминальное – спора расположена ближе к одному из ее концов, терминальное – спора располагается на конце палочки.

1. На высушенный нефиксированный мазок наливают 0,5% раствор хлористоводородной кислоты и подогревают 1-2мин над пламенем горелки до закипания.

2. Остывший препарат промывают водой, высушивают и фиксируют над пламенем спиртовки.

3. Затем на мазок наносят раствор фуксина Циля и нагревают над пламенем спиртовки до отхождения паров.

4. После того как препарат остынет, обесцвечивают его 5% раствором серной кислоты, промывают водой и докрашивают метиленовым синим в течении 3-5 мин, затем промывают водой и подсушивают. Споры, окрашенные фуксином имеют красный цвет, тело микробной клетки – синий цвет.

Зерна волютина, находящиеся в клетках возбудителей дифтерии, выявляют, применяя окраску по Нейссеру. Этот сложный метод окраски включает несколько этапов: окраску фиксированного на пламени горелки препарата уксуснокислым синим (1—2 мин), затем добавление на мазок нескольких капель раствора Люголя на 1 мин и промывание водой. Препарат докрашивают раствором хризоидина или везувина в течение 2—3 мин, промывают водой, высушивают и микроскопируют. Зерна волютина окрашиваются в синий цвет, микробные клетки —в светло-коричневый.

15. Актиномицеты. Таксономия. Особенности строения. Общие признаки с бактериями и грибами. Патогенные представители, вызываемые заболевания.

Актиномицеты-возбудители актиномикоза. Актиномикоз-хроническое гранулематозное гнойное поражение различных систем и органов с характерной инфильтрацией тканей, абсцессами и свищами, плотными зернами в гное.

Возбудитель относится к роду Actinomyces, занимает промежуточное положение между бактериями и грибами. Наиболее частыми возбудителями актиномикоза-A.israelii; A.albus, A.bovis, A.propionica.

Строение: имеют ветвящийся мицелий. Нити мицелия прямые или волокнистые, L=50-600мкм и d=0,2-2 мкм. Мицелий ветвистый, ветви развиваются из небольшой почки, которая постепенно вытягивается в палочку, затем в короткую нить с боковыми ответвлениями.

В тканях пораженного органа актиномицеты образуют зерна. Актиномицеты вместо ядра имеют нуклеоид.

Актиномицеты относятся к прокариотам, т.е. к организмам, не обладающим оформленным ядром и внутриклеточными мембранными структурами. По последним воззрениям, актиномицеты - это бактерии, способные к образованию длинных септированных или несептированных нитей (т.е. нитчатые бактерии). По классификации Берджи, актиномицеты относятся к бактериям, а не к дрожжеподобным грибам или плесневым грибам.По таксономии, актиномицеты относят к порядку Actinomycetales. Представляют собой нитевидные ветвистые клетки длиной 100-600 мкм и толщиной 0,2-1,2 мкм. Актиномицеты размножаются: 1)спорами; 2)поперечным делением; 3)почкованием. Не имеют капсулы, жгутиков, ворсинок. Грам +. Ультраструктура актиномицетов принципиально не отличается от бактерий, однако в составе пептидогликана клеточной стенки некоторых актиномицетов обнаружены арабиноза и галактоза, отсутствующие у бактерий.Подавляющее большинство актиномицетов - это свободноживущие сапрофиты. Многие сапрофиты, средой обитания которых является почва, образуют антибиотики - широко применяющиеся в медицинской практике. Например, стрептомицин, тетрациклин.

16. Спирохеты. Таксономия. Особенности строения. Общие признаки с бактериями и простейшими. Патогенные представители. Вызываемые заболевания.

Порядок: Spirochaetalis

Семейства: Spirochaetacaea, Leptospiraceae

Роды: Borrelia, Brachyspira, Cristispira, Leptonema, Serpulina, Spirochaeta, Leptospira.

Для человека патогены только Боррелии, трепонемы.

Спирохеты-спиралевидной формы, подвижные бактерии размером 0,1-3,0*5-250 мкм, одноклеточные. Все спирохеты грам «-».

Центральной структурой клетки является протоплазматический цилиндр, в котором содержаться цитоплазма, нуклеоид, рибосомы 70S и различные комплексы ферментов. Протоплазматические цилиндр окружен комплексом цитоплазматическая мембрана+ клеточная стенка, содержащая пептидогликан. Вокруг спиралевидного цитоплазматического цилиндра располагается периплазматический жгутик. Общее количество жгутиков варьируется от 2 до 100 и более.

Дата добавления: 2017-02-01