Спектрофотометрические

Колориметрические

Денситометрические

Денситометры измеряют оптическую плотность среды:

D = –lg(Ф_пр/Ф₀),

где Ф₀ и Ф_пр – падающие на среду и прошедшие через нее потоки.

Оптическая плотность определяется свойством вещества поглощать или рассеивать излучение. Например, в случае образования окрашенного соединения в результате ферментативной реакции.

Примером использования денситометрического ИП в сочетании с БХП антиген–антитело–фермент является фотометр для иммуноферментного анализа ELISA. Это БСС, измеряющая малые значения ослабления проходящего потока. Обычно из спектра мощного источника излучения (галогенной лампы) с помощью светофильтра выделяется необходимый диапазон длин волн. Поток, прошедший через светофильтр, распределяется с помощью световодов по восьми каналам измерительных фотометров. На выходе световодов линзы формируют тонкий вертикальный луч, проходящий через лунки планшета на фотоприемники. Измеренная оптическая плотность ячеек планшета зависит от наличия антител в тестируемой пробе крови.

Колориметры – приборы, измеряющие концентрацию C оптически однородного вещества по оптической плотности D окрашенного раствора.

Для этого в среду с БХП добавляют химическое вещество, которое, соединяясь с субстратом или продуктом БХП, образует равномерно окрашенный раствор. Его оптическая плотность, согласно закону Бэра:

D = C e b,

где e – коэффициент экстинкции (удельного пропускания) окрашенного раствора (постоянная величина), b – толщина слоя раствора.

ИП этого типа применяют в БСС для оценки переработки углерода, в котором в качестве БХП используются ферменты аэробных бактерий, перерабатывающие соединения углерода с выделением продукта СО₂. Индикатор на основе раствора Ba(OH)₂ образует с продуктом БХП цветной раствор соли.

В БСС для оценки активности биологического окисления аналогичный ИП используется с другим БХП на основе фермента сукцинатдегидроген азы, выделенного из митохондрий разрушенных и гомогенизированных клеток печени. Фермент катализирует реакцию преобразования субстрата (янтарной кислоты) в продукт (фумаровую кислоту). Индикатор на основе хлорфенольного соединения образует с субстратом цветную растворимую соль, оптическая плотность которой уменьшается по мере разложения субстрата.

Спектрофометры состоят из: источника излучения с широким диапазоном длин волн; монохроматора с призмой, разлагающей излучение в спектр, из которого выделяется необходимый участок с помощью регулируемой щели; фотоприемника, измеряющего прошедший через щель поток в диапазоне длин волн lD.

Спектрофотометры позволяют обнаружить вещество по спектру поглощения, а также идентифицировать штаммы бактерий по различию их спектров поглощения в инфракрасной области длин волн, или нуклеиновые кислоты по спектру поглощения в ультрафиолетовом диапазоне.

Эти ИП применяют в БСС для оценки воздействия загрязнений воды на фотосинтез. В этом случае используется БХП на основе фотосинтезирующего пигмента (хлорофилла-а), выделенного из тканей растений. С помощью ИП измеряют спектр поглощения пигментом видимого света.

ИП могут также применяться в БСС для оценки метаболизма с БХП на основе ферментов, когда различны спектры поглощения субстрата и продукта ферментативной реакции.

Дата добавления: 2014-01-04