Выросших на МПА колоний и порядок их подсчета

- колонии Ps.aeruginosa (выросло 16 колоний

- колонии E.coli (выросло 4 колонии)

-

10 - это величина на которую умножают количество,

находящихся в 1 мл микробов, при засеве на чашку

с агаром 0,1 мл патологического материала.

Таким образом, выросло:

Рs.aeruginosa - 16. 10 = 160 КОЕ/мл (1,6. 10²)

E.coli - 4. 10 = 40 КОЕ/мл (0,4. 10¹)

2. Расчет производится по формуле А = х. 10. у, если перед посевом материал измельчали в ступке (растирали), готовили взвесь материала в физиологическом растворе и производили разведение материала (мокрота, фекалии, секционный или операционный материал).

При этом: А - это КОЕ/г

х - это количество выросших колоний

10 - это величина, на которую умножают количество,

находящихся в 1 г материала микробов, при засеве

на чашку с агаром 0,1 мл патологического

материала

у - это степень разведения патологического материала

Например: От больного с хроническим бронхитом получено 20 мл вязкой мокроты, содержащей гнойные комочки. Мокрота гомогенизирована в ступке с 1 мл физ. раствора, произведено разведение гомогенизированной мокроты от 10^-1 до 10^-7 в физиологическом растворе. Из разведения 10^-5 произведен высев по 0,1 мл на чашки с МПА, шоколадным агаром и средой Сабуро. Через 24 часа термостатитрования при 37^о на МПА роста колоний не обнаружено, на шоколадном агаре отмечен обильный рост сероватых, крупных, полупрозрачных, нежных, сочных колоний, легко снимающихся петлей. От выросших колоний исходил характерный "мышиный" запах (или запах закисшей посудной тряпки). В мазке с окраской по Граму были видны мелкие, короткие, грамотрицательные палочки. При окраске по Гинс-Бурри выявлены хорошо выраженные капсулы.

Предположительно диагностирован высев H.influenzae (гемофильная палочка).

Через 3 суток на среде Сабуро выросли крупные, белые, непрозрачные колонии с молочнокислым запахом. В мазке, окрашенном по Граму, обнаружены грамположительные, крупные, овальные клетки, часть из которых имела дочерние

образования.

Предположительно на среде Сабуро были зарегистрированы грибы кандида. Подсчет на шоколадной среде выявил 50 колоний H.influenzae; на среде Сабуро 4 колонии грибов Candida.

Таким образом, степень обсемененности мокроты составила:

H.influenzae - 50. 10. 10⁵ = 5. 10⁷ КОЕ/мл

Candida. - 4. 10. 10⁵ = 4. 10⁶ КОЕ/мл

Вопросы для самоподготовки:

По базисным знаниям:

1. Из каких этапов состоит приготовление мазка?

2. Рецепт окраски мазка по Граму

3. Назовите грамотрицательные микробы - возбудители ГВЗ

4. Назовите грамположительные микробы - возбудители ГВЗ

5. Из каких этапов состоит бактериологический метод исследования?

6. Назовите патологический материал, который берут для клинических микробиологических исследований

По теме занятия:

1. Какие исследования проводят в 1 день бактериологического анализа?

2. Назовите рецепт окраски мазка из мокроты по Цилю-Нильсену

3. Какие способы применяются для первичного посева патологического материала на питательные среды?

4. Каков порядок подсчета степени обсемененности патологического материала микробом-возбудителем?

5. Примените формулу подсчета микробной обсемененности материала, взятого от больного для количественного бактериологического исследования.

6. Какие исследования проводят на 2 день бактериологического анализа?

7. Что такое колония микроба? Какие признаки у колоний разных видов микробов Вы знаете?

8. От чего зависит успех выделения из исследуемого материала чистой культуры микроба - возбудителя ГВЗ?

Самостоятельная работа студентов:

Материальное обеспечение занятия:

На столе у студентов должны быть (по числу студентов):

- Микроскопы

- Иммерсионное масло, фильтровальная бумага, марлевые салфетки

- Карандаш по стеклу, предметные стекла

- Спиртовки, спички

- Бактериологические петли

- Питательные среды:

Кровяной агар в косячках

МПА в косячках

Кровяной агар в чашках

- Пипетки (1,0) с грушей

- Шпатели

- Банки с дез. раствором для обеззараживания пипеток и мазков

- Пинцеты в стакане с дез. раствором и тампоном

- Наборы красок для метода Грама, Гинс-Бурри

Наглядные пособия:

- Таблицы

- Схемы для количественного посева исследуемого материала

- Чашки Эндо с посевом мочи (E.coli)

- Чашки МПА с посевом мочи (Ps.aeruginosa, S.aureus)

- Кровяной агар в чашках с посевом гноя (S.aureus, E.coli)

- Кровяной агар в чашках с посевом гноя (S.pyogenes, S.viridans)

- Агар Сабуро с посевом мокроты (Candida, Klebsiella)

- Агар Никкерсена с посевом мокроты (Candida Spp.)

- Шоколадный агар с посевом мокроты (H.influenzae)

- Мазки с основными микробами-возбудителями ГВЗ (окраска по Граму, Гинс-Бурри)

Практическая работа студентов:

1. Вынуть из термостата посевы, сделанные на предыдущем занятии (посевы мочи, мокроты, СМЖ, гноя, крови, операционного материала)

- тщательно изучить характер, выросших колоний (см. аннотацию настоящих методических указаний), описать в тетради;

- пересеять колонии, "подозрительные" на Ps.aeruginosa, E.coli, Proteus, Klebsiella, Staphylococcus на косячки с МПА;

- пересеять колонии, "подозрительные" на Streptococcus, на кровяной агар, на H.influenzae - на шоколадный агар, подозрительные на Candida - на агар Сабуро.

- пересеять 0,1 мл сахарного бульона, засеянного кровью на предыдущем занятии, на чашку с кровяным агаром

- все свежезасеянные чашки и косяки поставить в термостат на сутки при температуре 37^оС.

2. Сделать из "подозрительных" колоний мазки, окрасить по Граму (Klebsiella, H.influenzae - по Бурри), изучить под микроскопом, зарисовать.

3. Изучить степень обсемененности микробом-возбудителем мокроты и операционного материала, засеянных для количественных исследований. Для этого подсчитать число, выросших на чашках колоний и использовать для подсчета КОЕ/мл (г) формулы: А = х. 10 и А = х. 10. у (см. аннотацию методических указаний)

4. Чистые культуры микробов, выделенные из зева, носа, кожи студентов, проверить на чистоту и засеять на биохимический ряд для идентификации стафилококка (маннит аэробно и анаэробно), кишечной палочки (глюкоза, лактоза, цитрат Симмонса, сероводород, индол). Посевы термостатируют сутки при 37^оС.

5. Отработанные посевы и мазки загрузить в дез. раствор для обеззараживания. Убрать стол.

6. Составить 2 ситуационные задачи с ответами на тему данного занятия. Защитить свои задачи, сдать текст преподавателю.

7. Оформить дома к следующему занятию рефераты на тему "Морфология, культуральные и биохимические свойства микробов - возбудителей ГВЗ". Описать и изобразить морфологию, культуральные свойства, биохимические признаки. Назвать питательные среды для культивирования следующих пар УПМ:

- S.aureus + E.coli

- Ps.aeruginosa + Proteus

- Klebsiella + S.pneumoniae

- H.influenzae + Candida

- S.pyogenes + S.viridans

- E.coli + Candida

Указать из какого патологического материала чаще всего

выделяются эти УПМ. Сдать рефераты преподавателю.

Контроль качества работы студентов по:

- Правильности использования техники безопасности лабораторных исследований;

- правильности отбора колоний, подозрительных на S.aureus, S.pyogenes, E.coli, Ps.aeruginosa, Klebsiella, Candida;

- четкости использования формул для вычисления КОЕ/мл,г для установления степени обсемененности возбудителем патологического материала;

- правильности определения чистоты культур стафилококка и кишечной палочки, выделенных из зева, носа, кожи студентов;

- корректности составленных условий ситуационных задач и правильности их решения.

Заключительный контроль уровня знаний:

1. назовите УПМ, которые могут быть выделены из мокроты, мочи, крови, СМЖ, гноя при ГВЗ человека

2. Порядок исследования в 1-ый день проведения бактериологического анализа патологического материала, взятого от больного ГВЗ

3. Порядок исследования во 2-ой день проведения бактериологического анализа патологического материала, взятого от больного ГВЗ

4. Отличие количественного бактериологического метода исследования от качественного

5. Формулы для подсчета обсемененности микробом-возбудителем патологического материала, взятого от больного ГВЗ

Литература:

1. Справочник. Лабораторные методы исследования в клинике (под ред. В.В.Меньшикова). - Москва. - Медицина. - 1987. - 365 с.

2. Черкес Ф.К., Богоявленская Л.Б., Бельская Н.А. // Микробиология. - Москва. - Медицина. - 1987. - с. 512

3. Покровский В.И., Поздеев О.К. // Медицинская микробиология. - М.М., - 1998. - 1184 с.

4. Борисов Л.Б. // Медицинская микробиология, вирусология, иммунология. - Москва. - 2000

5. Toni Hart, paul Shers || Atlas Roche de Microbiologie. - Paris. - 1997/ - 314 c,

Дата добавления: 2014-01-04