Методы обнаружения бактериофагов

Понятие об умеренных бактериофагах. Лизогения и фаговая конверсия.

Бактериофаг-агент, растворяющий бактерии

Умеренные бактериофаги - вызывают латентную инфекцию и ассоциацию генома вируса с бактериальной хромосомой. Умеренные фаги, в отличие от вирулентности, не вызывают гибели бактериальных клеток и при взаимодействии с ней переходят в неинфекционную форму фага, называемую профагом. Профаг — геном фага, ассоциированный с бактериальной хромосомой.

Лизогения.-это взаимодействие может происходить по интегративному типу. Отражает потенциальную способность лизогенных бактерий к лизису при освобождении профага из состава бактериального генома и перехода в вирулентный фаг, способный репродуцироваться.

Фаговая конверсия- изменение фенотипа бактериальной клетки (антигенной характеристики, токсинообразования, чувствительности к другим фагам и т. п.), обусловленное включением в ее хромосому генома умеренного фага.

Метод Аппельмана: метод определения литической активности фага на жидких питательных средах путем установления его максимального разведения, вызывающего полный лизис бульонной культуры чувствительных бактерий.

Метод Грация метод титрования фага, заключающийся в определении количества активных фаговых частиц в 1 мл субстрата путем внесения образца в полужидкий агар (0,7%), содержащий чувствительную к фагу культуру, с последующим наслоением смеси на плотный агар (1,5%) в чашке Петри, термостатированием и подсчетом количества негативных колоний.

Фаготипирование - способ определения принадлежности выделенной и идентифицированной до вида культуры к тому или иному фаговару. Используют 2 подхода. Сущность первого состоит в установлении свойств, полученных из лизогенной культуры фагов (литического спектра, антигенной специфичности и др.). Сущность второго, более распространенного, подхода базируется на выявлении спектра чувствительности выделенной культуры к набору стандартных типовых фагов. Если фаговар культуры соответствует типовому фагу, наступает лизис культуры, проявляющийся в отсутствии роста, в то время как на месте нанесения др. фагов наблюдается сплошной рост микробов. Для Ф. необходимы молодая (4 - 6-часовая) культура исследуемого штамма, идентифицированного до вида или подвида; набор стандартных типовых фагов в критических тест-разведениях (в максимальном разведении фага, вызывающем сплошной лизис гомологичной культуры); чашки Петри со стандартной свежеприготовленной и хорошо высушенной средой.

Дата добавления: 2014-01-04