Характеристика микробных культур, испытуемых на чувствительность а антибиотикам

Определение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам методом бумажных дисков

План занятия:

1. Характеристика микробных культур, испытуемых на чувствительность к антибиотикам.

2. Характеристика питательных сред, применяемых для определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам диск-диффузионным методом.

3. Методика постановки диск-диффузионного опыта.

За время занятия студент должен знать:

1. Классификацию антибиотиков

2. Активность антибиотиков, бактериальный спектр действия

3. Подготовку испытуемой культуры к опыту

4. Приготовление питательной среды

5. Методику постановки определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам диск-диффузионным методом

6. Учет опыта

За время занятия студент должен уметь выполнить

1. Приготовить смыв исследуемой культуры, отстандартизировать его по оптическому стандарту мутности.

2. Приготовить питательную среду Мюллера-Хинтона и АГВ

3. Выполнить посев культуры «широким газоном»

4. Уложить диски с антибиотиками с помощью картриджей или пинцетом

5. Провести учет опыта

Содержание материала:

Испытывают чистую, суточную (18-24 часа) культуру, выросшую на жидкой или плотной питательной среде, которую стандартизируют по оптическому стандарту мутности. Бульонную культуру стандартизируют сразу, а с культуры, выросшей на плотной среде предварительно готовят смыв, т. е. с поверхности среды стерильным физ. раствором.

Бактериальный стандарт мутности представляет собой взвесь мельчайших частиц стекла пирекс и предназначен для определения концентрации микробных тел в 1 мл исследуемой взвеси. Состоит из четырех запаянных пробирок-эталонов, содержащих жидкость с различной степенью мутности. В качестве единицы мутности условно приняты взвесь с концентрацией 100 млн. микробных тел в 1мл. На этикетке каждой пробирки-эталона имеются числовые обозначения: 5, 9, 10, 11. Они определяют, какому количеству единиц мутности соответствует данный эталон.

Эталон 5 — 5 единиц мутности, соответствует 500 млн. микробных тел в 1 мл.

Эталон 9 — 9 единиц мутности, соответствует 900 млн. микробных тел в 1 мл.

Эталон 10 — 10 единиц мутности, соответствует 1 млрд. микробных тел в 1 мл.

Эталон 11 — 11 единиц мутности, соответствует 1,1 млрд. микробных тел в 1 мл.

В пробирках-эталонах вместо микробных клеток содержатся частицы скелета пирека по размеру соответствующие величине бактерий.

К эталону мутности прилагаются две пустые пробирки, соответствующие пробиркам-эталонам. В пустые пробирки вносят исследуемую культуру и сравнивают степень ее мутности с нужным эталоном. Если культура более мутная, то к ней добавляют стерильный физ. раствор, пока степени мутности культуры и стандарта по мутности не совпадут.

Мутность исследуемой культуры должна совпасть со стандартом мутности №10, т. е. 1 млрд. микробных тел в 1 мл.

Дата добавления: 2013-12-13