Алгоритм постановки реакции

Реакция торможения гемагглютинации

Алгоритм постановки РГА

Реакцию ставят в лунках полистероловых планшет или в пробирках

1. Исследуемый материал на наличие вируса развести физ. раствором начиная от 1:10 до 1:1280 (разводим в пробирках).

2. Каждого разведения по 0,5 мл перенести в лунки планшет.

3. К каждой лунке добавить по 0,5 мл 1-2% взвесь эритроцитов.

Контроль:

1. Контроль эритроцитов — 0,5 мл эритроцитов + 0,5 мл физ. раствора.

Учет результатов начинаем с контроля:

1. При положительной реакции на дне лунок (пробирок) выпадает осадок эритроцитов в виде «зонтика»: рыхлый, с рваными краями.

2. При отрицательной реакции эритроциты образуют плотный осадок с ровными краями - «пуговка». Такой же осадок должен быть в контроле.

Титром вируса является максимальное разведение материала, в котором проходит агглютинация.

Используется для определения вида вируса в исследуемом материале. Компоненты:

1. Иммунная видовая противовирусная сыворотка.

2. Материал, исследуемый на наличие вируса

3. 1-2% взвесь эритроцитов

4. Физ. раствор.

Иммунная видовая противовирусная сыворотка нейтрализует вирус, имеющийся в материале, в том случае, если они родственны. Нейтрализованный вирус не способен выделять вещества, склеивающие эритроциты и агглютинация их не происходит. По примененной видовой сыворотке устанавливаем вид вируса в материале. Реакция высоко специфична.

1. Видовую противовирусную сыворотку развести от 1:10 до 1:2560

2. По 0,25 мл каждого разведения сыворотки внести в лунки планшета

3. В каждую лунку добавить по 0,25 мл материала, содержащего вирус, разведенного в 4 раза меньше титра, установленного в РГА.

4. После термостатирования в каждую лунку добавить по 0,5 мл — 1-2% взвесь эритроцитов.

5. Поместить в термостат на 30 минут, или выдержать 45 минут при комнатной температуре.

Реакция сопровождается тремя контролями:

1. Контроль сыворотки: 0,25 мл сыворотки (1:10) + 0,25 мл физ. раствора поместить в термостат на 30 минут. Добавить 0,5 мл 1-2% взвеси эритроцитов и поместить в термостат на 30 минут или выдержать 45 минут при комнатной температуре.

2. Контроль антигена: 0,25 материала с искомым вирусом +0,25 мл физ. раствора поместить в термостат на 30 минут. Добавить 0,5 мл 1-2% взвеси эритроцитов и поместить в термостат на 30 минут или выдержать 45 минут при комнатной температуре.

3. Контроль эритроцитов: 0,5 физ. раствора поместить в термостат на 30 минут. Добавить 1-2% взвесь эритроцитов, поместить в термостат на 30 минут или выдержать 45 минут при комнатной температуре.

Учет реакции начинается с контролей. Во всех контрольных лунках «пуговки» - торможение гемагглютинации. В рабочих лунках: если сыворотка не подошла вирусу, то в лунках «зонтики». Титр сыворотки — это ее максимальное разведение, в котором происходит задержка гемагглютинации.

Дата добавления: 2013-12-13