Трансмиссионный электронный микроскоп

Люминесцентная, или флуоресцентная, микроскопия

Некоторые биологические объекты способны при освещении коротковолновыми лучами (сине-фиолетовыми, ультрафиолетовыми) поглотать их и испускать лучи с более длинной волной. При этом клетки будут светиться желто-зеленым или оранжевым светом. Это собственная, или первичная, люминисценци.

Нелюминесцирующие объекты можно обработать специальными флуоресцирующими красителями - флуорохромами (акридином желтым, акридином оранжевым, аурамином, примулином, тиофлавином, конго красным) и также наблюдать люминесценцию. Это будет наведенная, или вторичная, люминесценция.

Препараты, окрашенные флуорохромами, изучают в средах, не люминесцирующих под действием коротковолновых лучей: в воде, глицерине, вазелиновом масле или физиологическом растворе.

Оптическая схема люминесцентного микроскопа отличается от оптической схемы обычного микроскопа источником света (можно использовать ртутную лампу, а если возможно возбуждение люминесценции объекта сине-фиолетовыми лучами, — то и низковольтные лампы) и наличием на пути лучей двух светофильтров: синего светофильтра перед конденсором, пропускающего сине- фиолетовые лучи видимого спектра, и желтого светофильтра в окуляре микроскопа, убирающего синие лучи, мешающие выявлению люминесценции.

Люминесцентная микроскопия по сравнению с обычной позволяет:

· сочетать цветное изображение и контрастность объектов;

· изучать морфологию живых и мертвых клеток микроорганизмов в питательных средах и тканях животных и растений;

· исследовать клеточные микроструктуры, избирательно поглощающие различные флуорохромы, являющиеся при этом специфическими цитохимическими индикаторами;

· определять функционально-морфологические изменения клеток;

· использовать флуорохромы при иммунологических реакциях и подсчете бактерий в образцах с невысоким их содержанием.

Наиболее удобен для микробиологических исследований микроскоп люминесцентный МЛ-2.

1.5. Электронная микроскопия

По схеме строения электронный микроскоп аналогичен световому, но освещение объекта обеспечивает не луч света, а поток электронов от вольфрамовой нити, нагреваемой электрическим током.

Разрешающая способность современных электронных микроскопов составляет 0,2—0,4 нм, рабочее увеличение в среднем — 100 000 раз.

Трансмиссионный (от лат. transmissio — передача, переход) микроскоп широко применяют в биологических исследованиях.

Каждый электронный микроскоп состоит из электронной пушки (источник электронов); электромагнитных катушек, выполняющих роль конденсорной, объективной и проекционной линз; предметного столика; экрана для изображения и окуляра. Для работы микроскопа необходим вакуумный насос, так как движение электронов возможно только в вакууме. Электроны в трансмиссионном микроскопе движутся по такому же пути, как и лучи света в световом микроскопе.

Изображение объекта можно сфотографировать, если заменить флуоресцирующий экран (металлическую пластину, покрытую тонким слоем сульфида цинка или смеси сульфида цинка с селенидом кадмия) фотопластинкой.

Препараты для электронно-микроскопических исследований помешают на специальные сетки, на которые нанесена тончайшая пленка (подложка). Общая толщина препарата и подложки не должна превышать 0,25 мкм.

При изучении под электронным микроскопом морфологических особенностей клеток микроорганизмов исследуются целые клетки, для изучения ультраструктуры клеток — их срезы. Толщина срезов не должна превышать 0,8—0,9 мкм. Контрастность объекта обеспечивается напылением его тяжелыми металлами (хромом, золотом, палладием) или обработкой различными контрастирующими веществами (фосфорно-вольфрамовой кислотой, уранилацетатом и др.).

Дата добавления: 2014-01-04