Выделение чистой культуры бактерий

Материалы и оборудование

Часовые стекла, шпатели, ложки, почва, стерильные колбы на 250 мл со 100 мл и стерильные пробки с 9 мл водопроводной воды, стерильные пипетки Мора на 1 мл, колбы с расплавленным МПА, стерильные чашки Петри, микроскопы и все необходимое для микрокопирования.

При изучении физиолого-биохимических особенностей и цикла развития бактерий, а также для установления их видовой принадлежности необходимо работать с чистой культурой микроорганизмов. Чистой называют такую культуру, которая получена из одной клетки и содержит микроорганизмы одного вида.

Выделение чистой культуры включает три этапа: получение накопительной культуры, выделение чистой культуры, определение ее чистоты.

Для получения накопительной культуры определенного вида бактерий сначала подбирают элективные (избирательные) условия среды, обеспечивающие преимущественное развитие данных бактерий. Затем из мест обитания, в которых преобладают представители данной группы, делают посев на соответствующую элективную (селективную) среду.

Чистую культуру получают из одной клетки или отдельной колонии накопительной культуры. Во втором случае из накопительной культуры после ее разведения делают высев на плотную среду по методу Коха. Каждую образовавшуюся колонию считают развившейся из одной клетки.

Для выделения из накопительной культуры чистых культур аэробных бактерий делают высев на чашки Петри: каплю соответствующего разведения осторожно размазывают стерильным стеклянным шпателем по поверхности плотной среды, после чего этим же шпателем протирают поверхность последующих 3—4 чашек. Чашки выдерживают в термостате от 2 до 7 сут, так как скорость роста различных микроорганизмов неодинакова. Выросшие на некотором отдалении от других колонии отсевают петлей в пробирки на поверхность скошенной плотной среды или в жидкую среду.

Высев из накопительной культуры микроорганизмов, относящихся к факультативным аэробам или факультативным анаэробам, для получения изолированных колоний делают методом глубинного посева в пробирки со столбиком стерильного агара. Для этого стерильной иглой берут чистую культуру из колоний, одновременно вынимают пробку, обжигают края пробирки, держа ее вверх дном, и над горелкой делают иглой прокол до дна.

Выделение чистой культуры анаэробных бактерий по методу Коха возможно только при ограничении доступа кислорода, в частности при инкубации в анаэростате.

Чистоту культуры определяют микроскопированием препарата.

Дата добавления: 2014-01-04