Чувствительность к антибиотикам и лизоциму

Устойчивость к факторам внешней среды

Отношение к кислороду

Отношение к кислотам и щелочам

Для выявления отношения микроорганизмов к кислотности питательной среды добавляют буферные смеси, поддерживающие соответствующую реакцию среды (рН 3,6—4 — цитратно-фосфатный буфер; 4,5—9,2 — фосфатный буфер; выше 9 — буферные смеси Na₂CO₃ и HCI в различных соотношениях, а также NaOH и К₂НРО₄). После 8—10 сут инкубации при 28—30 °С по росту клеточной массы устанавливают предельные значения кислотности среды, при которых еще возможно развитие бактерий. Рост клеточной массы можно оценить по оптической плотности на ФЭКе.

Об отношении микроорганизмов к кислороду судят по росту культуры при посеве уколом в пробирку с агаровой илижелатиновой средой. Аэробы развиваются в верхней части укола(рост в виде гвоздя); факультативные анаэробы — равномернопо всему уколу; анаэробы — в нижней его части.

Для определения устойчивости микроорганизмов к высоким концентрациям солей культуру выращивают на основной питательной среде с добавлением доступного источника углерода и азота, а также NaCl или Na₂SO₄ в разных концентрациях. После инкубации при температуре 28—30 °С по степени накопления клеточной массы устанавливают оптимальные, максимальные и минимальные концентрации солей.

Для выявления устойчивости к температуре культуры на питательной среде (лучше жидкой) помещают в политермостат при разных температурах. Затем по степени накопления клеточной массы, как и в первом случае, выявляют оптимальные, минимальные и максимальные температуры.

Аналогично, создавая соответствующие условия, обнаруживают влияние других факторов внешней среды на развитие микроорганизмов.

Отношение микроорганизмов к антибиотикам можно выявить на агаровых пластинах методами агаровых блоков, штриха или методом диффузии антибиотика в агар с применением бумажных дисков.

Метод агаровых блоков заключается в следующем: в чашки Петри на агаровую питательную пластину, густо засеянную тест-организмом, помещают агаровые блоки с антибиотиками. Предварительно для получения блоков с этими веществами на поверхность питательной среды, предназначенной для выращивания продуцента антибиотика, высевают сплошным газоном соответствующую культуру. После того как микроорганизмы разовьются и образуют антибиотические вещества, диффундирующие в толщу агара (бактерии — на 4—5-е сут, грибы — на 6—8-е, актиномицеты — на 8—10-е сут), стерильным пробочным сверлом вырезают агаровые блоки. По окончании инкубации в термостате, время которой зависит от скорости роста тест-культуры, вокруг агаровых блоков с антибиотиками возникают зоны, в которых отсутствует рост тест-организма. По диаметру зоны судят о чувствительности тест-организма к тем или иным антибиотикам.

При использовании метода штриха на питательном агаре в чашках Петри по диаметру высевают культуру продуцента антибиотика. К выросшему организму вплотную подсевают перпендикулярно штрихами тест-культуры. Нечувствительные к антибиотику тест-культуры развиваются от самого края штриха продуцента; чем чувствительнее тест-организм к антибиотику, тем дальше от штриха происходит его рост.

Для определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам часто используют метод диффузии антибиотика в агар с применением бумажных дисков (см. 15.4). Он заключается в следующем: одну петлю чистой культуры микроорганизма вносят в пробирку со стерильной водой. Стерильной пипеткой наносят на поверхность МПА в чашке Петри 0,02 мл (1 капля) полученной суспензии культуры и равномерно распределяют ее шпателем по поверхности агара. На поверхность засеянного агара стерильным пинцетом у пламени раскладывают диски, пропитанные различными антибиотиками. Чашки (вверх дном) помещают в термостат при 37 °С на 16—18 ч.

Измерять диаметр зон задержки роста микроорганизмов вокруг дисков с антибиотиками следует с учетом диаметров самих дисков. Зоны диаметром до 10 мм указывают на малую чувствительность, зоны диаметром 10 и более мм — на среднюю и большую чувствительность микроорганизма к исследуемым антибиотикам.

Отношение микроорганизмов к лизоциму. Лизоцимы — белки-ферменты с антибиотическим действием, широко распространенные в мире животных. Особенно много их в слюне (например, у собак) и слезах (у человека). В концентрации 1 мкг/мл они гидролизуют хитин и его производные, разрушают клеточные стенки бактерий, в частности действуют на муреин, и поэтому особенно эффективно влияют на грамположительные бактерии (Bacillus megaterium, Sarcina flava и др.).

Дата добавления: 2014-01-04