Материалы и оборудование

Окисление жиров

Материалы и оборудование

Гелевые пластины, пропитанные средой для целлюлозоразрушающих бактерий и покрытые кружками стерильной фильтровальной бумаги, стеклянные палочки с заостренными концами, образцы свежей поч­вы, часовые стекла, трафареты. При отсутствии гелевых пластин жид­кая минеральная среда Омелянского, мерные цилиндры на 100 мл, колбы Эрленмейера на 100—150 мл, стерильные кружки фильтроваль­ной бумаги для приготовления складчатых фильтров. Микроскопы и все необходимое для микроскопирования.

Вводные пояснения. Жиры попадают в почву с расти­тельными и животными остатками, отмершими клетками микроорганизмов. Микроорганизмы, вызывающие трансфор­мацию жира в аэробных и анаэробных условиях, выделяют фермент липазу, который катализирует гидролиз жиров:

C₃H₅(C_l8H₃₅O₂)₃ + ЗН₂О = С₃Н₅(ОН)₃ + ЗС₁₈Н₃₆O₂

Тристеарин Глицерин Стеариновая кислота

Продукты гидролиза в дальнейшем аэробные микроорга­низмы окисляют до диоксида углерода и воды:

C₁₈H₃O₂ + 26О₂ = 18СО₂ + 18Н₂O

Постановка опыта. Для знакомства с процессом окисле­ния жира и его возбудителями достаточно сначала пригото­вить элективную минеральную среду, не содержащую источ­ника углерода, — среду Рана (г/л дистиллированной воды): К₂НРО₄ - 5; СаС1₂ - 1; (NH₄)₃PO₄ - 5; NaCI - следы; MgSO₄ · 7H₂O - 1; FeCl₃ · 7H₂O - следы. Затем 30 мл среды наливают в колбу Эрленмейера на 100 мл и добавляют ¹/₃ чайной ложки почвы. В качестве источника углерода вносят кусочек расплавленного свиного сала или говяжьего жира.

Культура жироокисляющих бактерий и грибов развивает­ся также и на касторовом масле. В 30 мл среды достаточно внести 1 мл масла. По мере развития жироокисляющих микро­организмов в прозрачном касторовом масле появляются белые хлопья нерастворимых в воде жирных кислот. Можно исполь­зовать и обычное подсолнечное масло.

Микроскопирование. Готовят препарат, стараясь захва­тить гидролизованные хлопья жира с поверхности или из глу­бины культуральной жидкости. Сушат его при комнатной температуре, фиксируют смесью спирта с эфиром (1: 1), уда­ляя одновременно остатки жира, затем красят фуксином.

При микроскопировании можно обнаружить неспороносные палочки Pseudomonas fluorescens (рис. 21), P. stytzeri, иногда на жире развиваются актиномицеты и молочная пле­сень Geotrichum candidum (см. рис. 17).

Минеральная среда Рана, свежая поч­ва, колбы Эрленмейера на 100 мл, мер­ные цилиндры на 200 мл, алюминие­вые ложки (металлические или фарфо­ровые шпатели), пипетки Мора на 1 мл. Микроскопы и все необходимое для приготовления окрашенных препа­ратов имикроскопирования. Смесь спирта с эфиром (1: 1), бюретки с 0,1 н. спиртовым раствором NaOH, фенолфталеин.

	Рисунок21 - Pseudomonas fluorescens

Дата добавления: 2014-01-04