КАТЕГОРИИ: Архитектура-(3434)Астрономия-(809)Биология-(7483)Биотехнологии-(1457)Военное дело-(14632)Высокие технологии-(1363)География-(913)Геология-(1438)Государство-(451)Демография-(1065)Дом-(47672)Журналистика и СМИ-(912)Изобретательство-(14524)Иностранные языки-(4268)Информатика-(17799)Искусство-(1338)История-(13644)Компьютеры-(11121)Косметика-(55)Кулинария-(373)Культура-(8427)Лингвистика-(374)Литература-(1642)Маркетинг-(23702)Математика-(16968)Машиностроение-(1700)Медицина-(12668)Менеджмент-(24684)Механика-(15423)Науковедение-(506)Образование-(11852)Охрана труда-(3308)Педагогика-(5571)Полиграфия-(1312)Политика-(7869)Право-(5454)Приборостроение-(1369)Программирование-(2801)Производство-(97182)Промышленность-(8706)Психология-(18388)Религия-(3217)Связь-(10668)Сельское хозяйство-(299)Социология-(6455)Спорт-(42831)Строительство-(4793)Торговля-(5050)Транспорт-(2929)Туризм-(1568)Физика-(3942)Философия-(17015)Финансы-(26596)Химия-(22929)Экология-(12095)Экономика-(9961)Электроника-(8441)Электротехника-(4623)Энергетика-(12629)Юриспруденция-(1492)Ядерная техника-(1748) |
Метод Виноградского в модификации Теппер
Метод Виноградского Микроорганизмы, разлагающие гумусовые вещества Метод обрастания стекол по Холодному Состав и соотношение почвенных микроорганизмов Сущность метода состоит в следующем. На ровной поверхности почвы делают ножом разрез, глубина которого зависит от исследуемого горизонта. Отмытые и обезжиренные стекла (одновременно берут несколько стекол) плотно прижимают к вертикальной стенке разреза и засыпают почвой. В пахотном слое стекла помещают на 3—5 см ниже поверхности. Сверху разрез засыпают почвой и место, где заложены стекла, отмечают этикеткой. Стекла выдерживают в почве в зависимости от задачи исследования от недели до нескольких месяцев. После истечения времени экспозиции убирают почву с тыльной стороны стекол, «откидывают» их от стенки и вынимают. Тыльную сторону вытирают сухой тряпкой, а опытную поверхность стекол высушивают на воздухе и фиксируют трижды, проводя тыльной стороной над пламенем горелки. После фиксации стекло погружают в воду опытной поверхностью вниз, не доводя его до дна. При этом крупные частицы почвы, отмокая, падают на дно, а фиксированные микроорганизмы и мелкие частицы остаются на стекле. После промывки препарат погружают в раствор карболового эритрозина на срок от 30 мин до 24 ч. Окрашенные препараты исследуют под микроскопом с иммерсионной системой. При микроскопировании отмечают характер микрофлоры, плотность обрастания стекол и доминирующие формы. Отдельные ассоциации микроорганизмов можно запечатлеть, используя микрофотосъемку. Для выявления автохтонной — истинно почвенной группы микроорганизмов, минерализующих гумусовые вещества, по Виноградскому отмытые от следов хлора и прокипяченные гелевые пластины пропитывают минеральной средой без источников углерода и азота (г/200 мл дистиллированной волы): К2НРО4 - 1,0; MgSO4 • 7Н,0 - 0,5; NaCI – 0,5; FeSO4 • 7Н,О - 0,01; MnSO4•4H2O - 0,01. В чашку вносят 3—5 мл минеральной среды, а в качестве единственного источника углерода и азота добавляют гумат кальция. Чашки Петри с гелевыми пластинами с гуматами и комочками почвы (см. 8.2.1) помешают во влажную камеру крышками вниз и выдерживают при 25—28 °C 40—50 сут и более. Вокруг комочков почвы на гумате появляются специфичные бурые колонии в виде тонких бархатистых налетов розового и белого цвета — Bactoderma (В. alba. В, rosea).
В данной модификации в отличие от основною метода к 3-5 мл минеральной среды добавляют 0,3 г СаСО3, а вместо гумата кальция используют более подвижную и доступную для микроорганизмов форму — гумат натрия 10 – 50 мл. Вместо комочков почвы добавляют 1 мл почвенной суспензии разведения 10-2. Содержимое чашки также тщательно перемешивают, подсушивают до эмалевой поверхности, помещают во влажную камеру и выдерживают при 25—28 °С. Через 50—60 сут инкубации на поверхности гелевых пластин с гуматами появляются мелкие колонии бурого и желто-бурого цвета. Диаметр отдельных колоний колеблется от 0,5 до 1,0—1,5 мм, а после 4 мес. инкубации — от 1,0 до 2,5 мм. Более крупные колонии микроорганизмов образуются, если гуматы используют только как источник углерода. В этом случае в минеральную среду вносят дополнительно азот в виде KNO3 (14 мг на чашку). При просмотре колоний под микроскопом с увеличениями х30 (10х — окуляр, 3х — объектив) и х80 (10х — окуляр, 8х — объектив) у многих из них по периферии обнаруживается мицелиальная зона, состоящая из фрагментированных гифов, характерных для представителей рода Nocardia. Припосеве бурых и желто-бурых колоний на нитритный агар (см. 10.2.1) часть их образуют микроорганизмы рода Nocardia, микобактерии и Arthrobacter. Определенная доля бурых колоний на гумате принадлежит представителям Micromonospora. В более поздние сроки инкубации (через 5—6 мес. ипозже) появляются бактерии рода Bactoderma (В. alba и В. rosea). Для выявления бактерий этого рода к нитритному агару следует добавить дрожжевой автолизат. Описанным способом можно изучить микроорганизмы, участвующие в разложении не только гумата натрия, но и фульвокислот. В этом случае к основной минеральной среде, указанной выше, следует добавить 10—50 мг фульвокислот. Метод Виноградского в модификации Теппер дает возможность изучить сукцессию микроорганизмов, участвующих в разложении гумусовых кислот. С этой целью при постановке опыта чашки с гумусовыми кислотами (фульвокислотами или гуминовыми кислотами), инфицированные почвенной суспензией (10-2), помешают во влажную камеру и в термостат при25—28° С. В разные сроки инкубации (через 2, 4, 6, 8 и 12 мес.) вынимают две параллельные чашки и изучают в них микрофлору. Поскольку в гумусовых кислотах соотношение С: N < < 25: 1, то при их разложении выделяется аммиак. Однако аммиак не накапливается, а по мере образования окисляется нитрифицирующими бактериями. Поэтому в процессе окисления гумусовых кислот (через 4, 6 и 8 мес. инкубации) наряду с микроорганизмами автохтонной группы (Nocardia, Bactoderma, Mycobacterium) на гелевых пластинах с гумусовыми кислотами обнаруживаются зоны с клетками Nitrosomonas.
Дата добавления: 2014-01-04; Просмотров: 1379; Нарушение авторских прав?; Мы поможем в написании вашей работы! Нам важно ваше мнение! Был ли полезен опубликованный материал? Да | Нет |