Патогенные хламидии

Лабораторная диагностика риккетсиозов

Методы выделения риккетсий

Исследуемый материал	Способ культивирования	Феномен, указывающий на наличие возбудителя	Идентификация возбудителя (АГ)
1.Кровь больных 2.Ткани погибших людей или животных 3.Эктопара-зиты (пере-носчики) 4.Мокрота (при Q-лихорадке).	Культура клеток (Неla, Нep-2 и др.)	деструкция клеток (ЦПЭ)	1.Окраска препарата по Романовскому-Гимзе или Здродовскому 2.РИФ
Желточный мешок 3-5 дневных куриных эмбрионов	гибель эмбрионов на 5-10 сутки после заражения
Лабораторные животные: белые мыши, морские свинки	повышение температуры, гибель

Альтернатива культуральному методу — детекция и идентификация ДНК риккетсий в ПЦР (молекулярно-генетическая диагностика).

Серодиагностика риккетсиозов (основной метод)

Используемые серологические реакции: РИФ (непрямая), реакция агглютинации риккетсий (РАР), РНГА, РСК, ИФА с растворимым антигеном R.prowazekii.

РНГА в серодиагностике сыпного тифа

РНГА при сыпном тифе ставится с единым групповым антигеном и не может быть использована для дифференциации риккетсиозов в пределах группы.

Для дифференциации эпидемического (R.prowazekii) и эндемического (R. typhi) сыпного тифа параллельно ставят РА с двумя диагностикумами. В случае эндемического сыпного тифа диагностический титр с R. typhi в 3-4 раза превосходит титр к риккетсиям Провацека.

РНГА при дифференциации первичного сыпного тифа от болезни Брилла

В сыворотке заболевших первичноактивной формой сыпного тифа обнаруживаются IgM, а у реконвалесцентов и при болезни Брилла — IgG. Для дифференциации первичного сыпного тифа от повторного используют обработку сыворотки 2-меркаптоэтанолом, что приводит к разрушению дисульфидных связей IgM и потере их активности, не изменяя в то же время структуры и иммунологической специфичности действия IgG.

Для дифференциации первичного сыпного тифа от болезни Брилла в настоящее время используется иммуноферментный анализ (тест-системы для обнаружения IgG, IgM и суммарных иммуноглобулинов).

Кожно-аллергическая проба для диагностики Ку-лихорадки. Используют корпускулярный аллерген из автоклавированных коксиелл Бернета. Вводят его внутрикожно в объеме 0,1 мл в область предплечья. В положительных случаях через 30-36 ч возникает гиперемия с инфильтратом диаметром 20-25 мм.

Таксономия

Царство Procaryotae, отдел Gracilicutes, порядок Chlamydiales, семейство: Chlamydiaceae.

Роды: Chlamydia, Chlamydophila

Виды: Chlamydia trachomatis, Chlamydophila psittaci, Chlamydophila pneumoniae, Chlamydophila pecorum

Отличие хламидий от истинных прокариот:

· мелкие размеры элементарных телец (внеклеточных форм) — 0,3-0,6-1,5 мкм;

· облигатный внутриклеточный паразитизм (хламидии не имеют систем мобилизации энергии, используют АТФ клетки хозяина);

· длительная персистенция в организме хозяина;

· непрокариотный цикл размножения.

Морфология и цикл развития

Основные стадии жизненного цикла хламидий:

1) элементарные тельца — мелкие (0,2-0,5 мкм) электронноплотные шаровидные структуры, имеющие компактный нуклеоид и ригидную трехслойную клеточную стенку;

2) инициальные (исходные), или ретикулярные тельца — большие (0,8-1,5 мкм в диаметре) сферические образования, имеющие сетчатую структуру с тонкой клеточной стенкой и фибриллярным нуклеоидом;

3) промежуточные тельца — промежуточная стадия между элементарными и ретикулярными тельцами.

Элементарные тельца являются инфекционной, а ретикулярные — вегетативной формой хламидий.

Вегетативные формы размножаются путем бинарного деления внутриклеточно, но не инфекционны, когда выделяются из клетки-хозяина. Жизненный цикл хламидий начинается с того, что элементарные тельца фагоцитируются клеткой-хозяином, а затем в течение нескольких часов реорганизуются, увеличиваются в размерах и превращаются в ретикулярные формы, которые размножаются путем поперечного деления. Образующиеся дочерние формы также размножаются путем бинарного деления. Жизненный цикл заканчивается, когда возникающие промежуточные формы реорганизуются (уплотняются), уменьшаются в размерах и превращаются в элементарные тельца. После разрыва стенки везикулы и мембраны клетки-хозяина вновь образовавшиеся хламидий высвобождаются, и элементарные тельца, инфицируя другие клетки, повторяют цикл развития.

При окрашивании по Романовскому-Гимзе хламидии приобретают голубой или фиолетовый цвет. Хламидий хорошо видны и в неокрашенном состоянии при микроскопии влажных препаратов под стеклом с помощью фазовоконтрастной оптической системы.

Рисунок 12 − Цикл развития хламидий

Факторы патогенности хламидий:

· компоненты клеточной стенки (блокируют слияние фагосом с лизосомами фагоцитов);

· экзотоксины;

· эндотоксины.

Классификация представителей семейства Chlamydiaceae и вызываемые ими заболевания

Род	Вид возбудителя	Биовар	Серовар	Заболевание
Chlamydia	Chlamydia trachomatis	Trachoma	А, В, С	Трахома
D-K	Урогенитальный хламидиоз, пневмония новорожденных, конъюнктивит
LGV	L1,L2,L3	Венерическая лимфогранулема
Chlamydophila	Chlamydophila pneumoniae	TWAR	-	ОРЗ, пневмония, бронхиты
Chlamydophila psittaci		8 сероваров	Орнитоз (пситтакоз)
Chlamydophila pecorum		-	Инфекции дыхательного тракта у животных

Лабораторная диагностика

Исследуемый материал:

· соскоб конъюнктивы глаза при трахоме;

· мокрота при орнитозе;

· соскоб и отделяемое уретры, вагины,моча при урогенитальном хламидиозе.

Используемые методы

1. Цитологический метод. Обнаружение хламидийных включений в пораженных клетках.

2. Иммуноцитологический метод. Выявление антигенов в исследуемом материале в РИФ, ИФА.

3. Молекулярно-генетический метод (ПЦР и др.).

4. Культуральный метод (используется в специализированных лабораториях).

5. Серодиагностика: ИФА (обнаружение IgM, IgG), непрямая РИФ, РСК, РТГА. Ставятся с парными сыворотками.

6. Аллергодиагностика.

Дата добавления: 2014-01-07