Возбудитель рожи В-гемолитический стрептококк группы А,

включающей большое число серологических вариантов (49 ти­пов). Бета-гемолитические стрептококки группы А являются факультативными анаэробами и широко распространены в ок­ружающей среде, к условиям которой довольно устойчивы. Хорошо переносят высушивание, низкую температуру, при на­гревании до 56 °С погибают через 30 мин. Дезинфицирующие

средства (хлорная известь, хлорами, лизол и др.) в рабочих концентрациях губительно действуют на стрептококка. Чувст­вительность к антибиотикам (пенициллин, тетрациклин, лево-мицетин и др.) высокая.

2. Малая высеваемость стрептококков является, по-видимому, результатом подавления их роста более устойчивым стафило­кокком, а также реакциями сенсибилизированного организма. Ассоциация стрептококка с другими микробами, чаще со ста­филококком, имеет значение в ряде случаев при развитии гнойных местных осложнений, некроза и сепсиса. В этиологии неосложненных форм рожи другие микробы, в том числе ста­филококк, значения не имеют. Лабораторные исследования в постановке диагноза значения не имеют.

Вопрос 70. Возбудитель газовой гангрены

1. Газовая гангрена — заболевание, возникающее в результате попадания в раны патогенных анаэробов после травм, ранений и т. д. Классическая картина газовой гангрены с явлениями мионекроза, отека тканей, сильного газообразования в них, а также общей интоксикации, "гемолитической анемии" бывает обусловлена главным образом Clostridium perfringens типа А. Однако заболевание могут вызывать и другие типы клостридий (В, С, D, E, F). Как правило, возникают ассоциации несколь­ких типов клостридий со стрептококками, стафилококками, кишечной палочкой.

Морфология, клостридий перфрингенс типов А, В, С, D, Е и F —

крупные грамположительные образующие капсулу палочки. Жгутиков не имеют, неподвижны, образуют при определенных условиях центральные или субтерминальные споры. Клетки разных штаммов могут отличаться друг от друга по своей тол­щине и длине. В одних случаях это короткие толстые палочки, в других — длинные нити с заостренным краем, клетки в 6—8 очаговых культурах грамположительны, хорошо красятся метиленовым синим и другими основными красками. Старые

клетки становятся грамотрицательными. Они не воспринима­ют метиленовый синий, и их окрашивают фуксином.

Биология, культуральные свойства возбудителя газовой гангрены:

в жидких анаэробных питательных средах, приготовленных из гидролизатов мяса или казеина, при 37—43 "С, клостридии перфрингена всех типов растут быстро (3—8 ч) с бурным газо­образованием, изменением рН-среды в кислую сторону. На щелочных средах, богатых белком и не содержащих сбражи­вающих углеводов, возбудители газовой гангрены способны образовывать споры.

Существуют следующие варианты колоний:

• гладкие (S);

• слизистые (М);

• шероховатые (R).

Гладкие формы колоний на поверхности агара в начале роста напоминают пенные капли росы, затем теряют свою прозрач­ность. Они прочные, сочные, куполообразные, с гладкой бле­стящей поверхностью и ровным краем. В мазках из S-форм колоний содержатся короткие бескапсульные клетки.

Слизистые (М) колоний похожи на гладкие и отличаются от последних более высоким куполом и слизистой консистенцией. Они состоят из клеток, имеющих капсулу, которые при росте на жидких средах могут образовывать густую слизь.

Шероховатые (R) варианты на плотных средах имеют колонии неправильной формы с изрезанным "фестончатым" краем, иногда с отростками в виде шипов и неровную бугристую по­верхность.

Колонии возбудителя газовой гангрены, выросшие на поверх­ности кровяного агара, часто окружены 1 или 2 зонами гемо­лиза и при выдерживании на воздухе приобретают зеленоватую окраску. Большинство штаммов клостридин перфригенс обла­дают слабыми протеолитическими свойствами, вырабатывают ферменты, расплавляющие желатин. Все штаммы сбраживают с образованием кислот и газа глюкозу, галактозу, лактазу, ле­вулезу, мальтозу, сахарозу и не ферментируют маннит.

Образование токсинов: деление клостридии перфрингенс на 6 типов основано на способности этих микроорганизмов выраба­тывать различные по своим антигенным свойствами летальные и некротические токсины. Большинство этих веществ выделя-

ется в окружающую среду в процессе роста микроорганизмов, не задерживаясь внутри клеток. Различные типы возбудителя вызывают определенные заболевания людей и животных. Кло-стридии перфрингенс А, вырабатывающий а-токсин в большом количестве, считается в данное время основным возбудителем газовой гангрены, вызывающим это заболевание в 70—80% случаев.

2. Устойчивость к физическим и химическим факторам. Токсины
Clostridium perfringens относительно быстро (несколько часов)
разрушаются под влиянием различных факторов внешней среды.

Наибольшей устойчивостью отличаются прототоксины, кото­рые в неактивной форме могут переносить даже кипячение (до 30 мин — 1 ч). В содержимом кишечника трупов токсины мо­гут сохранять свою активность в течение нескольких часов, а иногда даже суток. Затем они разрушаются.

Устойчивость клостридий перфрингенс к действию различных физических и химических факторов зависит от индивидуаль­ных свойств штамма. Вегетативные формы этих микробов бы­стро погибают при действии кислорода воздуха, солнечного света, высокой температуры, кислот, щелочей, спиртов, де­зинфицирующих средств и антибиотиков, действующих на грамположительную флору. Споры клостридий перфрингенс типов С, Д и Е убиваются обычно при кипячении в течение 15— 30 мин. Однако отдельные штаммы типа А образуют термоус­тойчивые споры, переносящие кипячение или автоклавирова-ние от 1 до 6 ч. Такие споры могут попадать из окружающей среды на сырье, используемое для изготовления различных пищевых продуктов (в том числе консервов), и способны вы­держать длительную обработку. При определенных условиях жизнеспособные споры могут прорастать.

3. Лабораторная диагностика газовой гангрены

Для бактериологического исследования на газовую гангрену берут экссудат, кусочки измененной ткани из раны больного, а так­же кровь из вены. Трупный материал следует брать по воз­можности быстрее после смерти, так как в ткани трупа могут проникать различные патогенные анаэробные микроорганиз­мы, всегда имеющиеся в желудочно-кишечном тракте. Все взя­тые материалы помещают в стерильную герметически закры­вающуюся стеклянную посуду и немедленно пересылают в

бактериологическую лабораторию. Все пробы подвергают мик­роскопии. Для этой цели готовят мазки-отпечатки и окраши­вают их по Граму. Наличие в пробе большого количества крупных грамположительных палочек служит ориентировочным признаком для подозрения на клостридиальную инфекцию.

Бактериологическое исследование: плотные материалы стериль­но измельчают, кровь или экссудат подвергают центрифугиро­ванию в течение 30 мин. Взвесь исследуемого материала засе­вают на кровяной агар, агар Вильсона-Блэра и бензидиновый агар. Посевы инкубируют в анаэробных условиях при 37 "С, просматривают на следующий день и затем через каждые 2 дня (до 7 суток) для выделения подозрительных колоний. Выра­женные колонии, вызывающие гемолиз на кровяном агаре, проверяют на чистоту и наличие грамположительных палочек (путем микроскопии) и затем отсевают в пробирки с жидкой казеиново-грибной средой под слоем вазелинового масла либо на анаэробную среду Китта-Тароцци. Выделенные чистые куль­туры проверяют на токсичность и вирулентность, а также про­водят биологическую пробу на лабораторных животных (мы­шах, морских свинках).

Вопрос 71. Возбудитель столбняка

1. Столбняк — инфекция, возникающая после различных травм и ранений в связи с загрязнением ран почвой, содержащей столб­ нячную палочку (Clostridium tetani).

Морфология: возбудитель столбняка — это подвижная палочка 4—8 мкм в длину и 0,4—0,6 мкм в ширину с закругленными концами. Образует крупные споры, в результате этого приоб­ретает вид барабанной палочки. Имеет жгутики, подвижна. Хорошо окрашивается всеми анилиновыми красками. По Гра­му красится положительно, но в старых культурах встречаются и грамотрицательные особи. Споры окрашиваются плохо. При окраске метиленовым синим или по Граму споры имеют вид колечек. Вегетативная форма бактерий столбняка малоустой­чива к воздействию температуры и химических агентов, тогда как их споры обладают значительной устойчивостью. Во влаж-

ной среде споры выдерживают нагревание до 80 °С в течение 4—6 ч и более, при кипячении они погибают через 40—50 мин. В сухом состоянии споры переносят еще более высокие темпе­ратуры, нагревание при 115 °С разрушает их только через 20 мин, споры совершенно нечувствительны к низким темпе­ратурам. Они годами переносят температуру 40—60 °С, 1%-ный раствор сулемы или 5%-ный раствор карболовой кислоты уби­вают споры только через 10—12 ч. Под действием рассеянного света споры погибают только через длительное время. Будучи защищены от света, в почве и на различных предметах внеш­ней среды споры могут сохраняться в течение десятков лет. В условиях анаэробиоза при температуре 37 "С, достаточной влажности и в присутствии аэробных бактерий (стафилококки, сенная палочка и др.) споры прорастают в развивающиеся ве­гетативные формы.

Биология, кулыпуральные свойства: возбудитель столбняка — строгий анаэроб и очень чувствителен к кислороду. Микроб хо­рошо растет в глубине жидких питательных сред при наличии в них глюкозы, кусочков печени или мышц (среда Китта-Тароцци). Для культивирования столбнячной палочки применя­ют бульон Мартена (мясо-пептонный с добавлением глюкозы, подщелоченной раствором соды), среду Вейнберга (мясной агар).

Питательные среды должны иметь нейтральную или слабокис­лую реакцию. Жидкие среды заливаются слоем вазелинового масла, и перед посевом из них удаляют кислород путем кипя­чения на водяной бане в течение 10—15 мин. Оптимальная температура роста 35—37 °С. На плотных питательных средах — кровяном и печеночном агаре — столбнячная палочка растет только при полном удалении кислорода. На чашках с агаром при температуре 35—37 °С через 2-4 суток вырастают отдельные прозрачные или слегка сероватые колонии величиной 2—5 мм с неровной зернистой поверхностью, края шероховатые, ветвя­щиеся. На кровяном агаре колония бывает окружена зоной ге­молиза. При почве на скошенном агаре в пробирках микроб растет в виде тонких, едва заметных нитевидных отростков, выползающих на поверхность агара. В столбике желатина через 5—6 дней растет в виде елочки, желатина при этом не разжижая. В биохимическом отношении возбудитель столбняка малоакти­вен, обладает слабовыраженными сахаролитическими и протео-литическими свойствами.

Антигенная структура: по антигенной структуре возбудитель столбняка неоднороден. Выделяют групповой соматический О-антиген и типоспецифический дкгутиковый Н-антиген, по которому различают 10 серологических типов. Все они выраба­тывают один и тот же специфический токсин.

2. Токсинообразование является важнейшей биологической особенно­
стью вегетативной формы столбнячной палочки. Столбнячный
токсин относится к экзотоксинам и состоит из 2 фракций:

• тетаноспазмина со свойствами нейротоксина, который пора­жает двигательные клетки центральной нервной системы и вы­зывает сокращение поперечно-полосатых мышц;

• тетаногемолизина, лизирующего эритроциты.

Экзотоксин является одним из сильнейших бактериальных ядов, уступая по силе лишь ботулиническому токсину. Токсин не содержит углеводов, относится к протеинам. Он малостоек, быстро разрушается под влиянием нагревания, солнечного све­та, щелочной среды. Ферменты и энзимы желудочно-кишеч­ного тракта не разрушают токсин, но он не всасывается через слизистую оболочку кишечника, в связи с чем безопасен при попадании через рот. Под действием формалина и при содер­жании в термостате при 37—38 °С в течение суток токсин утра­чивает ядовитые, но сохраняет антигенные свойства. Получен­ный таким образом столбнячный анатоксин используют для активной иммунизации против столбняка.

3. Лабораторная диагностика столбняка. Бактериологическое ис­
следование: исследуется материал, взятый из раны:

• гной;

• кусочки тканей;

• инородные тела;

• обрывки одежды;

• тампоны, закладываемые в рану при перевязке;

• перевязочный материал, содержащий выделения из раны;

• в случаях столбняка после родов или аборта берут на исследо­вание выделения из влагалища и матки;

• при подозрении на столбняк у новорожденного исследованию подвергают выделения из пуповины;

• при исследовании трупа также берут материал из раны, если она имеется, из различных воспалительных очагов и старых рубцов.

В некоторых случаях столбняка происходит генерализация ин­фекции, возбудитель может быть обнаружен во внутренних ор­ганах. Поэтому берут на исследование от трупа кровь, кусочки печени и селезенки. Исследование материала производится с целью обнаружения в нем столбнячного токсина и возбудителя столбняка.

Обнаружение столбнячного токсина: исследуемый материал растирают в стерильной ступке, добавляют двойной объем фи­зиологического раствора. Часть материала засевают в 2 флако­на с жидкой питательной средой. Для постановки реакции нейтрализации на животных экстракт исследуемого материала вводят внутримышечно 2 мышам по 0,5 мл экстракта, а еще 2 мышам — те же дозы с противостолбнячной сывороткой. В зависимости от количества токсина симптомы столбняка у животных развиваются на 1-е или 2-е сутки. У животных, по­лучивших токсин с противостолбнячной сывороткой, симпто­мы не появляются, что свидетельствует о наличии в исследуе­мом материале столбнячного токсина.

Одновременно с постановкой реакции нейтрализации произ­водят посев растертого материала в 2 флакона или 2 пробирки с питательной средой (бульон Мартена, бульон Вейнберга) под слоем вазелинового масла. Перед посевом из среды удаляют кислород путем кипячения 15 мин, а затем охлаждают до 40— 50 °С и в нее добавляют 0,5% глюкозы. После культивирования при температуре 35 "С на 2, 4, 6 и 10-е сутки микроскопируют мазки из посевов и исследуют культуральную жидкость на на­личие столбнячного токсина. Для этого ставят реакцию нейтра­лизации с противостолбнячной сывороткой. При обнаружении в посеве столбнячного токсина и наличии грамположительных па­лочек с крупными спорами дают положительный ответ.

Вопрос 72. Морфология и биология

1. Сибирская язва — тяжелое острое инфекционное заболевание человека и животных, которое вызывает сибиреязвенная споро-образующая палочка (Bacillus anthracis). В зависимости от пер-

возбудителя сибирской язвы

винного проникновения и последующей локализации этого микро­организма развиваются:

• кожные;

• висцеральные (легочная и кишечная);

• висцерально-генерализованные клинические формы болезни.

Сибирская язва может возникать на всех континентах и во всех странах в связи с производством, потреблением и обра­боткой животного сырья (мясо, шерсть, шкуры и т. п.) и ухо­дом за больными животными.

Морфология: это крупный (1—2 х 6—10 мкм) палочковидный неподвижный микроорганизм, с обрубленными под прямым углом концами. В организме встречаются как единичные ин­капсулированные палочки, так и их цепочки из 2—3 микробов, окруженные общей капсулой. В последнем случае концы сли­ваются и цепочка напоминает собой бамбуковую трость. Си­биреязвенные бациллы хорошо окрашиваются анилиновыми красками, грамположительные. Капсулы бывают отчетливо видны при окраске по Романовскому-Гимзе. Для выявления спор используют метод Циля-Нильсена.

2. Возбудитель сибирской язвы неприхотлив и может развиваться на различных лабораторных средах — на мясо-пептонном агаре и бульоне, желатине, молоке, экстрактах из семян растений, различных углеводных средах и даже настое сена. Палочка си­бирской язвы является факультативным аэробом, поэтому на бактериологических питательных средах, при температуре 37— 38 °С, хорошо растет при свободном доступе кислорода.

На поверхности мясо-пептонного агара возбудитель сибирской язвы вырастает в виде типичных матового цвета, шероховатых бескапсульных колоний, состоящих из сплетений нитей с от­ростками ("львиная грива", "голова медузы"). Гладкие, слизи­стые полупрозрачные колонии вырастают на поверхности при 80 °С на лошадиной сыворотке, отдельные палочки и цепочки колоний снаружи покрыты капсулой.

В мясо-пептонном бульоне бактерии сибирской язвы дают рост в виде комка ваты на дне пробирки, без помутнения среды. Капсулы при этом не образуются. Капсульная форма этого микроба является вирулентной. Оптимум роста находится в пределах 36 "С.

При истощении и высыхании среды вегетативные формы мик­роба переходят в споровые. При этом в каждой палочке образует­ся одна центральная спора. Обязательным условием спорооб­разования является доступ кислорода и температура в пределах 12—2 °С. В организме человека и в невскрытом трупе споры не образуются. Вегетативные формы без кислорода растут очень медленно. При посеве уколом в столбик агара или желатина растет "елочной верхушкой вниз"; верхняя часть желатина раз­жижается ("пуговка") протеолитическим ферментом.

На кровяном агаре — рост без гемолиза. Молоко свертывается на 2—4-е сутки с последующей пептонизацией. Большинство штаммов разлагают галактозу, глюкозу, мальтозу, сахарозу (медленно), левулезу с образованием кислоты без газа.

Сероводород образуется не всегда. При повышении щелочно­сти в бульонной культуре может иметь место помутнение. От­дельные штаммы одновременно с образованием типичного осадка на дне сосуда с жидкой средой могут вызывать умерен­ное помутнение жидких сред.

Вирулентность возбудителя сибирской язвы связана с капсулой в организме инфицированных животных. Капсула не только пре­дотвращает фагоцитоз возбудителя, защищает его от воздейст­вия бактерицидных веществ инфицированного организма, но и способствует фиксации капсульных бацилл на клетках, кото­рые затем подвергаются дегенерации и гибели. Бескапсульные сибиреязвенные бациллы этими свойствами не обладают.

Вирулентность бацилл антрацис обусловлена также образова­нием ими токсина как капсульными, так и бескапсульными штаммами.

В теле возбудителя сибирской язвы содержится термостабиль­ный "соматический" антиген полисахарид ной природы, сохра­няющийся длительное время в трупном материале; в капсуле обнаружен протеиновый антиген — полипептид D-глютами-новой кислоты.

Исключительный интерес представляет наследственно изменен­ные штаммы возбудителя сибирской язвы — мутанты, утра­тившие способность образовывать специфическую капсулу, превратившиеся из высоковирулентных штаммов в вакцинные штаммы, что используется для практических целей. Из наслед-

ственно измененных авирулентных штаммов изготавливают иммунопрофилактические вакцины, применяемые в медицин­ской и ветеринарной практике.

Вопрос 73. Устойчивость и диагностика возбудителя сибирской язвы

1. Вегетативные формы микробов без доступа кислорода относи­
тельно быстро отмирают, особенно под влиянием гнилостной
флоры.

Они быстро погибают при нагревании до 50 "С в течение 30 мин, при температуре 75—80 °С — через минуту, а при воздействии различных дезинфицирующих средств — от действия сулемы, формальдегида, хлора в обычных концентрациях — гибель воз­будителя наступает через несколько минут. К низкой темпера­туре бациллы сибирской язвы весьма устойчивы.

Сибиреязвенные споры высокоустойчивы во внешней среде. В воде сохраняются жизнеспособными в течение нескольких лет, в почве — десятки лет; сухой жар губит их при 140 °С за 3 ч, ки­пячение — через 45—60 мин. Споры устойчивы и к дезинфици­рующим средствам; в шкурах животных, выделанных дублением, они могут сохраняться живыми длительное время, засаливание мяса не уничтожает спор.

Выявление специфических свойств и отношения возбудителя к внешней среде имеет большое значение в связи с трудностями дифференциальной диагностики. В природе широко распро­странены ложносибиреязвенные палочки, которые морфологиче­ски невозможно отличить. Помимо этого имеются и другие спорогенные аэробы, такие, как сенная, картофельная, капу­стная и корневидная палочки, которые могут находиться в раз­личных объектах среды. Из старых лабораторных культур, почвы и сточных вод выделен специфический сибиреязвенный фаг, используемый для дифференциальной лабораторной диаг­ностики возбудителя сибирской язвы.

2. Лабораторная диагностика сибирской язвы состоит:

• в бактериоскопии нативного материала;

• посеве его на питательные среды;

• заражении животных (биологическая проба);

• постановке реакции термопреципитации по Асколи.

Для диагностики сибирской язвы у больных и ретроспективно­го анализа используют внутрикожную пробу с антраксилом. Для лабораторного исследования от больного в стерильную по­суду берут содержимое пустулы, гной, отделяемое карбункула, кровь, мочу, мокроту, испражнения, рвотные массы, соблюда­ют при этом правила работы с особо опасными инфекциями.

Исследование начинают с бактериоскопии мазков, окрашенных по Граму и анилиновыми красками. Окраску мазков произво­дят также раствором Ребигера на предмет обнаружения кап-сульных форм бацилл сибирской язвы — капсулы окрашивают­ся в красно-фиолетовый цвет, бактерии — в темно-фиоле­товый. Для бактериологического исследования материал засе­вают в чашки Петри на мясо-пептонный агар и в пробирки с мясо-пептонным бульоном. Через 24 ч выращивания в термо­стате при 37 "С в положительных случаях на поверхности агара можно видеть матовые шероховатые колонии с ворсистыми краями типа "львиной гривы", в пробирках с мясо-пептонным бульоном сибиреязвенный возбудитель растет на дне пробирки в виде комка ваты. Выделенные культуры в мазках исследуют под микроскопом на морфологию и в висячей капле — на под­вижность.

Биологическая проба: окончательное подтверждение видовой принадлежности выделенной культуры устанавливают путем подкожного заражения белых мышей, морских свинок, кроли­ков эмульсией из однодневной агаровой культуры. Наблюде­ние за животными проводят 10 дней. Павших животных вскрывают: делают мазки-отпечатки из внутренних органов для микроскопирования, производят посевы из крови, сердца, селезенки и инфильтрата на месте инъекции.

Для ускоренной диагностики сибиреязвенной инфекции исполь­зуют иммунофлюоресцентный метод. Этот метод состоит в об­работке мазков культур микробов люминесцентными сыворот­ками и просмотре их в люминесцентном микроскопе — бациллы сибирской язвы выглядят в виде палочек с ободком, светя­щимся зеленом цветом. Лаборатория может дать предваритель­ное заключение по исследуемому материалу через сутки после его получения и окончательное — через 3—4 дня после резуль­татов постановки биологической пробы.

Реакцию термопреципитации по Асколи проводят с целью обнару­жения сибиреязвенного антигена. Для этого измельчают кусочки органов трупа, кожи, шерсти животных и кипятят в физиоло­гическом растворе 10—15 мин. Полученный термоэкстракт фильтруют. Фильтрат наслаивают на преципитирующую сыво­ротку, разлитую в узкие пробирки. В положительных случаях на границе обеих жидкостей появляется мутно-белое кольцо преципитации.

Аллергическая проба состоит во внутрикожном введении 0,1 мл антраксина — антигена, извлекаемого из оболочки сибиреяз­венного возбудителя. На месте введения у больных и перебо­левших сибирской язвой появляются гиперемия и инфильтрат размером 3,5 х 3 см.

Вопрос 74. Возбудитель проказы

1. Проказа — заболевание, вызываемое микробом рода микобак-терий — Micobacterium leprae (палочка Хансена). Различают следующие клинические формы болезни:

• полярную туберкулоидную;

• пограничную туберкулоидную;

• недифференцированную;

• пограничную лепроматозную;

• полярную лепроматозную.

Лепроматозная (узловая) форма характеризуется разрастанием в слизистых оболочках и в коже грануляционной ткани, состав­ляющей основу так называемых лепром, в последних имеется значительное количество кислотоупорных микобактерий в ко­же, лимфатических узлах, слизи носа, зева.

Морфология и биология лепры: возбудитель проказы по морфо­логии сходен с туберкулезной палочкой. Это прямая или слег­ка изогнутая микобактерия, сплошная или зернистая, которая легче, чем туберкулезная, окрашивается фуксином (без подог­ревания) и легче обесцвечивается кислотами и щелочами. Грамположительна. В лепрозных узлах (лепромах) палочки Хансена встречаются в громадном количестве, лежат значи­тельными скоплениями в виде "связок сигар".

Многократные попытки выращивания микробактерии проказы на питательных средах заставляют сомневаться в возможности получения культур микробактерий лепры вне тканей человека. На глицериновом плацентарном агаре возбудители лепры мед­ленно растут в виде складчатого или влажного налета или пленки, бульон равномерно мутнеет.

Биологическую пробу нельзя воспроизвести — эксперименталь­ные животные невосприимчивы к лепре.

По характеру бактерии выделенных культур можно разделить на 3 типа:

• кислотоустойчивые микробактерии, непатогенные для всех ви­дов животных;

• кислотоустойчивые микробактерии, растущие только в пер­вичной культуре;

• микробактерии некислото- и слабокислотоустойчивые.

2. Микроскопическое исследование. Диагноз ставят на основании бактериоскопического исследования слизи из носа или ткане­вой жидкости из кожных поражений. Положительные находки подкрепляют диагноз. При отрицательном результате делают биопсию пораженных участков и производят исследования от­печатков их или гистологических срезов.

В лепрозных поражениях имеются очень характерные "лепроз-ные клетки", овальные или круглые, заполненные кислото­устойчивыми бактериями. Большие сильно раздутые клетки с бактериями носят название "лепрозных шаров". Гигантские клетки в лепромах не обнаруживаются.

Лепрозные микробактерии приходится дифференцировать с ту­беркулезными на основании более легкой окрашиваемости ле­прозных микробактерий и более легкой их обесцвечиваемости спиртом и кислотами после окраски. Одним из наиболее упот­ребляемых является способ Баумгартена — окрашивают мазок фуксином без подогревания, обесцвечивают в течение 30 мин в азотнокислом спирте, промывают в воде и докрашивают вод­ным раствором метиленового синего. Срезы лепром окраши­вают в том же растворе фуксина в течение 12—15 мин, обес­цвечивают полминуты в азотнокислом спирте, промывают в воде и докрашивают метиленовым синим. В старых лепромах палочки лепры окрашены в красный цвет; в свежих поражени-

ях микробактерии частью синие, частью красные. Туберкулез­ные микобактерии этим методом обычно не прокрашиваются.

Аллергическая реакция: для подтверждения диагноза проказы применяют аллергическую пробу с лепромином {реакция Мит-суда). Лепромин приготовляют из биопсированных тканей больных проказой. Через 8—24 ч после введения в кожу лепро-мина развивается инфильтрат с гиперемией. Однако проба Мит-суда недостаточно специфична, хотя и очень распространена.

Вопрос 75. Возбудитель сапа

1. Сап — заразное заболевание цельнокопытных (лошадь, осел,
мул), протекающее преимущественно в хронической форме и пе­
редающееся человеку. В органах (лимфатические узлы, легкие,
печень и др.) изменения возникают в виде типичных санных
узелков различной величины.

Морфология возбудителя (Pseudomonas mallei) — палочка с за­кругленными концами, длиной 1—5 мкм, с характерным зерни­стым строением. Бактерия полиморфна: может иметь коккооб-разные, вздутые формы; микроб часто располагается нитями, принимает вид палочек с неправильными контурами. Нити из бактерий средней длины, состоят обычно из 4—8 члеников.

Обнаружены фильтрующиеся формы, которые при пассаже на животных восстанавливаются в типичные формы. Палочка са­па грамотрицательна, окрашивается водно-спиртовыми раствора­ми анилиновых красок со щелочными растворами, со щелоч­ными протравами. Наблюдаются биполярные и неравномерно окрашенные палочки. При электронной микроскопии видны светлые участки протоплазмы и плотные гранулы. Спор и кап­сул палочка не образует. Является факультативным аэробом.

2. Биология, культуральные свойства. Микроб неприхотлив к пи­
тательным средам. Его выращивают на мясо-пептонном агаре
и бульоне, картофеле. Рост на средах значительно усиливается
при прибавлении к ним до 5% глицерина. Температурный оп­
тимум 37 °С, ниже 20 и выше 45 "С сапная палочка не разви-

вается. Микроб хорошо растет при слабокислой, нейтральной и слабощелочной реакции среды.

Картофельная среда считается дифференцирующей. Рост возбу­дителя сапа особенно характерен: к 3-му дню образуется рав­номерной слизистый янтарно-коричневый, медообразный на­лет, матовый или часто блестящий. К 6—8-му дню янтарная просвечивающая культура приобретает красноватый оттенок, прозрачность налета теряется. На мясо-пептонном агаре с 2% глицерина рост микроба обычно начинается через сутки. Сен­ная культура на агаре представляет собой вначале просвечи­вающий серовато-белого цвета налет с перламутровым блеском. В мясо-пептонном бульоне с 2—4% глицерина сначала возни­кает равномерная муть, затем выпадает слизистый серо-белый осадок, поднимающийся при легком встряхивании пробирки. К 10-му дню на поверхности появляется сероватая слизистая пленка. Сенный микроб свертывает молоко медленно, чаще на 6—8-й день. Желатин не разжижает, протеолитическое дейст­вие выявляется лишь при малых концентрациях желатина. Сапная палочка развивается также на безбелковых синтетиче­ских средах, в которых источниками азота и углерода служат аммонийные соли органических и угольной кислот. Индол не образуется. Лактозу и глюкозу расщепляет с выделением ки­слоты без газообразования.

3. Палочки патогенны для цельнокопытных животных. Лошадей
удается заражать подкожно и путем скармливания малыми ко­
личествами сапной культуры. Лошади часто болеют хрониче­
ской формой сапа. Крупный рогатый скот, овцы и козы в ес­
тественных условиях сапом не болеют.

Весьма резистентны к сапу свиньи, птицы, крысы. Из лабора­торных животных сапом заражаются морские свинки, при подкожном заражении они гибнут спустя 10—15 дней, иногда даже через 2—3 мес. В качестве лабораторного животного мож­но использовать кошку, которая очень чувствительна к зара­жению. Сап у нее протекает в форме септицемии. Кролики маловосприимчивы, несколько более чувствительны молодые животные. Белая мышь сапом не заражается.

4. Палочка сапа во внешней среде довольно устойчива: в воде, поч­
ве сохраняется до 1,5 мес, в выделениях больных, трупах жи­
вотных, павших от сапа, — несколько недель.

В замороженных материалах сапный микроб весьма устойчив. Быстро гибнет при нагревании (при температуре 55 °С в тече­ние 10 мин, при кипячении — через несколько минут). Высу­шивание ведет к гибели микроба через 1—2 недели, губительно действуют на него ультрафиолетовые лучи. Палочка чувстви­тельна к воздействию дезинфицирующих веществ (хлорная из­весть, формалин, щелочи, марганцево-кислый калий, сулема).

5. Лабораторная диагностика сапа: материалом для исследования могут служить:

• стерильно взятые носовые выделения;

• гнойное отделяемое язв;

• пунктаты подкожных абсцессов;

• кусочки органов из трупа;

• лимфатические узлы.

Консервирование материала возможно 30%-ным стерильным глицерином.

Микроскопическое исследование: микроскопия мазков из пато­логического материала ввиду отсутствия специфических мето­дов окраски бактерии сапа имеет ограниченное диагностиче­ское значение, но важна для исключения других возбудителей. Мазок окрашивают по Граму и по Романовскому-Гимзе.

Бактериологическое исследование: посевы материала произво­дят на глицеринизированный картофель, мясо-пептонный агар и бульон. На картофельно-глицериновой среде через 3—4 дня наблюдается характерный рост возбудителя сапа в виде янтар-но-коричневого цвета слизистого налета. К 6—8-му дню куль­тура становится мутной, красноватого оттенка. Чистую культу­ру получить не всегда удается, так как посторонняя флора препятствует росту палочки сапа. При хроническом сапе бак­териологическое исследование часто дает отрицательный резуль­тат. Для идентификации возбудителя учитывают его:

• биохимические свойства;

• агглютинабельность;

• патогенность для лабораторных животных.

Биологической пробой заражаются морские свинки (самцы), хо­мяки, кошки. Исследуемый материал можно вводить подкожно (если он не загрязнен), но более надежно внутрибрюшное за­ражение. Через 3—5 дней у зараженного самца развивается орхит. Через 8—15 дней большая часть свинок погибает. На высоте

заболеваний свинок забивают и производят бактериологиче­ское исследование органов и тканей.

Серологическое исследование: основным методом исследования служит реакция связывания комплемента (РСК); используют также реакцию пассивной гемагглютинации. РСК более чувстви­тельна. Исследование проводят в динамике с учетом нараста­ния титра антител. При хроническом сапе РСК нередко бывает отрицательной.

Аллергическая проба имеет важное значение для подтверждения диагноза сапа. Внутрикожно или накожно на предплечье вво­дят 0,1 мл маленна (фильтрат 4-недельной бульонной культуры палочки сапа, разведенной в 100 раз). В положительном случае через 24—48 ч на месте введения маленна появляется гипере­мия, припухлость, болезненность. При этом может наблюдаться общая реакция в виде недомогания, повышение температуры тела. Проба становится положительной с 10—15-го дня болезни.

Дата добавления: 2014-01-07