Определение резус-принадлежности крови

Определения группы крови реакцией изоагглютинации со стандартными сыворотками.

Эту реакцию лучше проводить на тарелке, разделенной на 4 части сектора помеченные: О(1), А(11), Б(111) и АВ(1У)

Берутся стандартные сыворотки трех групп: О(1), А(11), В(111) и двух серий.

На каждый сектор тарелки наносится по две капли сыворотки разных серий. На сектор 0(1) – 2 капли сыворотки 0(1) двух серий, на сектор А(2) – две капли сыворотки А(2) двух серий и на сектор В(3) две капли сыворотки разных серий В(3). Сектор АВ(1У) остается свободным.

В длинную стеклянную пипетку с помощью небольшой резиновой груши набирают из пробирки около 1 мл исследуемой крови и наносят на тарелку по одной маленькой капле рядом с каплей стандартной сыворотки. Капли перемешивают стеклянными палочками до тех пор, пока смесь не окрасится в равномерный красный цвет.

В течение трех минут покачивают тарелку, затем добавляют по капле изотонического раствора хлорида натрия и, продолжая покачивать до истечения 5 минут, оценивают результат.

1).Агглютинации нет нигде-исследуемая кровь 0(1) группы. 2).Агглютинация с сывороткой 0(1) и В(111) – исследуемая кровь А(11) группы.

3).Агглютинация с сывороткой 0(1) и А(11) – исследуемая кровь В (111) группы.

4).Агглютинация во всех каплях – исследуемая кровь АВ (1У) группы.

В этом случае необходимо сделать дополнительное исследование с 1 серией стандартных сывороток АВ (1У) группы.

Если агглютинации нет – исследуемая кровь АВ(1У) гр.

Реакция агглютинации на плоскости с помощью цоликлонов Анти-резус (анти-Д).

Наносят каплю (0,1 мл) реагента на пластинку и рядом маленькую каплю эритроцитов. Тщательно смешивают чистой стеклянной палочкой. Через 20 сек. легко покачивают пластинку. Результаты учитываются через 3 мин.

Наличие агглютинации – кровь резус-положительная, отсутствие – резус-отрицательная.

Способ с использованием стандартного универсального реагента в пробирках без подогрева.

В 2 пробирки вносят по 0,02-0,03 мл осадка эритроцитов.

В 1 пробирку добавляют 2 капли (0,1 мл) желатина и 2 капли реагента.

Во 2 пробирку (контрольную) добавляют 2 капли (0,1 мл) желатина и 2 капли физраствора.

Перемешивают встряхиванием. Помещают в водяную баню на 15 мин или термостат на 30 мин при температуре 46-48 градусов, затем добавляют по 5-8 мл физиологического раствора и перемешивают путем 1-2 кратного переворачивания.

Наличие агглютинации - кровь резус-положительная,

Отсутствие – резус - отрицательная.

В контрольной пробирке агглютинации не должно быть.

Ошибки при определении группы крови возможны трех видов:

1.Ошибки, связанные с техникой выполнения:

а) неправильное расположение и маркировка сыворотки на тарелке

б) взятие сыворотки одной и той же пипеткой

в) пользование одной и той же палочкой при смешивании крови с сывороткой

г) неправильные количественные соотношения сыворотки и крови

д) заключение о группе до 5 минут

е) несоблюдение температурного режима при исследовании

ж) промывание пипеток обычной водой (гемолиз)

з) за агглютинацию принимаются склеивание монетных столбиков

2.Ошибки связанные с использованием недоброкачественных сывороток:

а) неактивная сыворотка (титр не менее 1:32 или вышедшей срок хранения)

б) использование инфицированных сывороток (специфическая агглютинация)

3. Ошибки, связанные с биологическими особенностями испытуемой крови и неправильным чтением результата.

а) наличие в крови слабого агглютиногена А2 и А3

б) панагглютинабельность – свойство испытуемых эритроцитов давать агглютинацию со всеми стандартными сыворотками. Феномен у здоровых людей встречается редко, при заболеваниях крови, печени, почек может быть чаще

в) неспецифическая агглютинация;

1 склеивание эритроцитов в монетные столбики

2 холодовая агглютинация (температура меньше 15⁰С).

Дата добавления: 2014-01-20