Абсорбционная спектрофотометрия УФ и видимого света

Измерение поглощения света осуществляется при помощи спектрофотометров или фотоколориметров.

Эти приборы используются также для исследования спектрального состава веществ по длинам волн электромагнитных излучений, нахождения спектральных характеристик излучателей и объектов, взаимодействовавших с излучением, а также для спектрального анализа и фотометрирования. В зависимости от длины волны используемого излучения, спектрофотометры могут работать диапазоне ультрафиолета (100- 400 нм), в диапазоне видимого света (400-1000 нм) и в диапазоне инфракрасного излучения (10³ – 10⁵ нм).

Несмотря на различия в конструкции, все спектрофотометры (рис. 4) состоят из источника света (1), монохроматора (2), стеклянной кюветы (3), куда помещается исследуемый образец, детектора света (4) и измерительного прибора (5). Ход работы обычно следующий. Прибор настраивают таким образом, чтобы он показывал нулевое значение при измерении поглощения растворителя, в котором растворено исследуемое вещество. Затем можно снимать показания, соответствующие непосредственно поглощению образца. Для получения спектра поглощения операция повторяется при различных длинах волн.

1 2 3 4 5

Рис. 4. Схематичное изображение устройства абсорбционного спектрофотометра

1. источник света (вольфрамовая или дейтериевая лампа);

2. монохроматор;

3. кюветная камера с кюветой;

4. фотоэлемент (детектор света);

5. измерительный прибор.

Абсорбционная спектофотометрия широко используется для определения концентрации растворов, анализа химических реакций, идентификации веществ, определения структурных параметров макромолекул.

1. Определение концентрации растворов проводят непосредственно измерением оптической плотности, если известен e исоблюдается закон Ламберта-Бэра. В большинстве случаев для определения концентрации используют калибровочные графики, составленные по известным концентрациям.

2. Исследование биохимических реакций. Скорость реакции, активность ферментов можно измерить по уменьшению концентрации субстрата или по повышению концентрации продукта реакции в реакционной смеси.

3. Идентификация веществ путем спектральных измерений. Большинство соединений имеют характерные спектры поглощения и могут быть идентифицированы с их помощью. Для этих целей используются автоматические регистрирующие спектрофотометры.

4. Исследование процессов денатурации и ренатурации ДНК. При денатурации ДНК его оптическая плотность D₂₆₀ повышается, при ренатурации – понижается

Дата добавления: 2014-01-11