Популяционно-статистический метод (ПСМ).

Цитологический метод.

К цитологическим методам относятся цитохимический, радиоавтографический (определение синтеза РНК и ДНК, анализ функциональной активности хромосом), иммуннофлюоресцентный и электронно-микроскопический (анализ структурной организации функционально активного хроматина, в том числе при гибридизации соматических клеток, РНК-полимеразная реакция на цитологических препаратах).

Применение цитологических методов ограничивается диагностикой некоторых форм наследственных болезней.

Основное направление метода - исследование частот генов, спектра, распространенности наследственной патологии в различных этнических группах (популяциях), а также влияния на эти показатели факторов популяционной динамики (инбридинг, дрейф генов, миграции и др.). Популяционно-статистические исследования в СССР были начаты в 70-х гг. сотрудниками лаборатории генетической эпидемиологии Института медицинской генетики АМН СССР, переименованный в настоящее время в Медико Генетический Научный Центр РАМН (МГНЦ РАМН). Ранее научные исследования проводились в республиках Средней Азии (Туркменинистан, Татжикистан, Узбекистан, Казахстан), в Российских регионах - Краснодарском Крае, Костромской, Кировской областях, Адыгее, Республике Марий Эл и др. регионах, а также в Мордовии (изучена группа наследственных болезней нервной системы). Результаты подобных работ имеют важное значение не только в научном плане, но и для практического здравоохранения регионов, так как в ходе исследований одномоментно проводится скрининг населения по всем формам наследственной патологии, отягощенным семьям оказывается квалифицированная медико-генетическая консультативная помощь ведущими сотрудниками МГНЦ РАМН, применяются новейшие диагностические методы (ДНК-типирование, цитогенетическое, биохимическое исследование, компьютерная диагностика). В итоге такие исследования позволяют реально оценить обьем медико-генетической, лечебно-реабилитационной помощи населению, региональные медико-генетические консультации получают возможность для формирования диагностических, профилактических и др. регистров.

Иными словами результаты популяционно-статистических исследований являются залогом адекватной диспансеризации населения в области наследственной патологии.

5. Биохимический метод (БМ).

Методы аналитической биохимии применяются, главным образом, для диагностики наследственных болезней обмена (НБО). Для этого выделяют несколько этапов:

1 этап: применяются ориентировочные биохимические тесты, являющиеся основой массового скрининга всех новорожденных, либо селективного "просеивания" в группах риска по конкретной наследственной патологии обмена (например – в домах-интернатах для больных). В России проводится массовый скрининг с целью раннего выявления фенилкетонурии (ФКУ) (проба Феллинга, тест Гатри) и врожденного гипотиреоза(ВГ) (исследование тироксина -Т4 и тиреотропного гормона - ТТГ). Микробиологический тест гатри разработан в 60-х гг.в США. Для диагностики применяются фильтровальная бумага, пропитанная каплей крови новорожденного, взятой на 4-5 сутки жизни из пятки или большого пальца. При проведении пробы рост бактерий на питательной среде происходит вокруг вокруг дисков с образцами крови, содержащих избыточное количество фенилаланина, концентрацию которого можно определить по контрольным образцам. Нередко в педиатрических стационарах РФ применяется проба Феллинга. Материалом для исследования служит моча предполагаемого больного, в которую добавляется треххлористое железо, изменяющее окраску мочи при избыточном содержании продуктов фенилаланина. Проба менее информативна по сравнению с тестом Гатри. Она может быть положительной при других наследственных заболеваниях: лейцинозе, тирозинозе, гистидинемии. С целью исключения ложноположительных результатов пробы рекомендуют проводить трижды. Эти исследования возлагаются на региональный уровень медико-генетического консультирования (МГК). Кроме того, в медико-генетических консультациях широко применяется большая группа тестов для раннего выявления наследственной патологии обмена. К ним относятся:

- исследование плотности, прозрачности, реакции и цвета: снижение плотности утренней мочи взятой натощак до 1006 и ниже наблюдается при несахарном диабете, кислая реакция мочи – при аминоацидопатиях, изменение прозрачности наблюдается при липурии; черно-коричневая окраска мочи при добавлении щелочи имеет место при алкаптонурии, молочно-белый – при липурии, красный – при порфирии, гемоглобинурии, коричневый – при метгемоглобинурии, порфирии, билирубинурии;

- проба Селиванова: выявляет избыток фруктозы (при фруктоземии);

- тест на кетоновые кислоты: выявление алкаптонурии, фенилкетонурии, болезни «мочи с запахом кленового сиропа», гистидинемии, болезни «сушеного хмеля»;

- иодозидная проба на цистин, гомоцистин: при гомоцистинурии, цистинурии, болезни Вильсона-Коновалова, синдрома де Тони-Дебре-Фанкони;

- проба Пантуса на ионы хлора: при гипо- гиперальдостеронизме, тубулопатиях;

- тест на пролин: при б. Вильсона-Коновалова,, синдромах Жозефа, де Тони-Дебре-Фанкони;

- проба Бенедикта на сахара, фенольные кетокислоты: при галактоземии, с-ме де Тони-Дебре-Фанкони, цистинозе, врожденной непереносимости лактозы, почечном и сахарном диабете;

- проба Гайнеса аналогична предыдущей, но более информативна в отношении сахаров;

- тест с толуидиновым синим на выявление гликозоаминогликан:при мукополисахаридозах;

- проба Сулковича на ионы кальция: при идиопатической гиперкальциемии;

- тест Милона на тирозин: при тирозинозе, синдроме Хартнапа, галактоземии, б.Вильсона-Коновалова, цистинозе;

- проба Легаля на кетоновые тела: при сахарном и почечном диабете, гликогенозах;

- проба Альтгаузена: при гликогенозах

- проба на медь: при болезни Вильсона-Коновалова.

Спектр тестов обширен и их количество зависит от возможностей и оснащенности биохимических лабораторий медико-генетических консультаций. Разработан массовый биохимический скрининг беременных (исследование альфафетопротеина, хорионического гонадотропина, эстриола, 17-оксипрогестерона и др.) с целью пренатальной диагностики хромосомных синдромов, врожденных аномалий развития.

Массовый скрининг рекомендуется осуществлять при следующих условиях: 1) тестируемое заболевание является частым (распространенность более 1 случая на 20 тыс. новорожденных); 2) наличие методов профилактической терапии (ФКУ, ВГ и др.) и пренатальной диагностики; 3) применяемые экспресс-методы диагностики экономически доступны для региона.

2 этап: уточнение диагноза с использованием высокочувствительных методик биохимического анализа (газовая, жидкостная хроматография и др.). Это позволяет определить содержание, активность конкретного субстрата, фермента (энзимодиагностика), продукта промежуточного обмена в жидких средах организма, фибробластах, гепатоцитах, эритроцитах и др. клетках. Результаты этого исследования служат основой для проведения последующей пренатальной диагностики, основанной как на методах аналитической биохимии, так и ДНК-диагностике.

3 этап: окончательный диагноз НБО основан на результатах ДНК-типирования.

В настоящее время существуют методики биохимического анализа, позволяющие определить наличие любого известного на сегодняшний день субстрата организма человека.

Дата добавления: 2014-01-11