Цитогенетический

Тема 2. Методы клинической генетики.

Цитогенетика - область науки, изучающая структуру и функции хромосом. Для этого применяются следующие методы: световая микроскопия, электронная и конфокальная лазерная микроскопия, люминисцентная микроскопия Цитогенетический метод включает исследование кариотипа, определение частоты сестринских хроматидных обменов, частоты и типов аббераций хромосом, исследование полового хроматина.

Объектом исследования служат соматические, мейотические и интерфазные клетки. В различных ситуациях применяется культивирование фибробластов, клеток костного мозга, эмбриональных тканей, хориона, клеток амниотической жидкости. Наиболее удобным объектом является культура лимфоцитов периферической крови. Для этого у консультируемого производится забор 1-2 мл. венозной крови с последующим культивированием ее на фитогемагглютинине в течение 48-72 часов. За 2-3 часа до завершения культивирования используют колцемид (колхицин), который разрушает веретено деления клетки на стадии метафазы (метод метафазных пластинок). Для более детального изучения районов хромосом применяется метод прометафазных пластинок.

На следующем этапе культуру клеток обрабатывают гипотоническим раствором с целью разрушения ядерных мембран. После фиксации клеточной суспензии препарат окрашивают. Для этого используются простые, дифференциальные и флюоресцентные методы окрашивания.

При простом окрашивании возможна групповая идентификация хромосом (выявляются числовые аномалии). Каждая хромосома имеет индивидуальный рисунок при дифференциальном окрашивании, который определяется специфически чередующимися гетеро- и эухроматиновыми последовательностями. К простым методам окрашивания относят Q,G,R, С.

В настоящее время разработаны молекулярно-цитогенетические методы диагностики хромосомных перестроек. Один из них - метод флюоресцентной гибридизации "in situ" (FICH). Он основан на обработке денатурированной хромосомной ДНК специфическими зондами, которые обладают тропизмом к определенным сегментам ДНК. Далее проводится окрашивание флюорохромами. После этого окрашенные хромосомы визуализируются с помощью люминисцентной микроскопии. Метод более информативен по сравнению с простыми и позволяет идентифицировать незначительные по размерам внутри- и межхромосомные перестройки, а также любой вариант известных хромосомных мутаций.

Кариотип человека обозначается как: 46,ХХ – для мужчин, и 46,ХУ – для женщин. Плечи хромосом: «q» - длинное плечо, «p» - короткое. Аномалии хромосом записываются следующим образом:

Необходимо подчеркнуть показания для проведения цитогенетического исследования:

1) наличие случая хромосомного заболевания (ХЗ) в семье, либо подозрение на ХЗ по клиническим проявлениям: множественные микро- и макроаномалии у пробанда, особенно в сочетании с отставанием в психо-речевом и моторном развитии; задержка умственного и физического развития;

2) первичное невынашивание беременности (2 и более спонтанных аборта, либо выкидыша, мертворождения), первичная аменорея, бесплодие у женщин и мужчин, что может быть обусловлено носительством кого-либо из родителей сбалансированных хромосомных перестроек;

3) пренатальная диагностика хромосомной патологии, а также в случае, если у кого-либо из родителей имеет место наличие транслокационного синдрома;

4) подозрение на синдромы с хромосомной нестабильностью (пр.: лейкоз, наследственные анемии, иммунодефицитные состояния);

5) оценка эффективности лечения, прогноза при лейкозах;

6) оценка мутагенных воздействий.

Дата добавления: 2014-01-11