Методы оценки функциональной активности фагоцитирующих клеток

Дополнительный материал к занятию

План изучения темы

Исходный уровень знаний

ЗАНЯТИЕ 14

ИММУНИТЕТ. ФАКТОРЫ ВРОЖДЁННОГО ИММУНИТЕТА.
АНТИГЕНЫ

Для врача очень важно иметь представление об иммунитете как о способе защиты постоянства внутренней среды организма от генетически чужеродных агентов, в том числе от патогенных микроорганизмов. Иммунология внесла значительный вклад в такие области современной медицины, как переливание крови, вакцинация, трансплантация органов, лечение аллергии, аутоиммунных болезней и рака. Мощным фактором защиты организма от микроорганизмов является врождённый (видовой) иммунитет, который представляет собой совокупность анатомо–физиологических приспособлений организма. Приобретённый иммунитет формируется в результате попадания или введения в организм антигена. Студент должен знать, какие же вещества могут выступать в роли антигена, как получить антиген.

Цель самоподготовки

После самостоятельного изучения темы студент должен знать:

- определение понятия иммунитет, виды иммунитета;

- клеточные и гуморальные факторы врождённого (видового) иммунитета;

- антигены, способы их получения и практическое применение.

Из курса биологии и гистологии вспомнить клетки крови, их морфологию; приготовление мазка из крови, фиксацию, окраску.

Цель занятия

1. Познакомиться с клеточными и гуморальными механизмами врождённого иммунитета (фагоцитоз, лизоцим, комплемент, интерфероны).

2. Освоить методы оценки факторов врождённого иммунитета организма человека.

3. Выработать чёткое преставление об антигенах, их разнообразии, свойствах.

1. Иммунитет, виды иммунитета.

2. Факторы врождённого иммунитета.

3. Антигены, свойства антигенов, методы получения.

В процессе самоподготовки используйте конспект лекций, учебник, руководство к практическим занятиям. Просмотрите дополнительный материал в пособии, ответьте на контрольные вопросы и решите задачи.

После изучения темы студент должен уметь

1. Оценить факторы врождённого иммунитета организма (гуморальные и клеточные).

Количественную оценку фагоцитарной активности лейкоцитов проводят в цельной крови, или в лейкоцитарной взвеси, или в обогащенных фракциях фагоцитирующих клеток. В качестве стандартных объектов фагоцитоза используют мелкодисперсные частицы латекса диаметром от 1,0 до 2,0 мкм, суспензию убитых нагреванием клеток бактерий или дрожжеподобных грибов.

Определение фагоцитарной активности полиморфноядерных
лейкоцитов периферической крови

В микропипетку набирают 0,05 мл 2% цитрата натрия и 0,1 мл крови, выливают в пробирку. Добавляют 0,05 мл 2-миллиардной взвеси убитых стафилококков. Пробирку помещают на 30 минут в термостат, после чего встряхивают, готовят мазки, фиксируют их смесью Никифорова и окрашивают метиленовым синим (1% раствор, разведённый 1:4) в течение одной минуты. Мазки микроскопируют, находят 25 нейтрофилов и подсчитывают: процент активных фагоцитов (фагоцитарная активность) - количество нейтрофилов, фагоцитировавших стафилококки, по отношению к 25 изученным нейтрофилам; фагоцитарное число – среднее число стафилококков на один нейтрофил (общее число фагоцитированных стафилококков разделить на 25). Запись удобно вести в сетке (5 клеток х 5 клеток).

Количественная проба на лизоцим в сыворотке крови

В контрольную пробирку налить 0,5 мл физиологического раствора. Этой же пипеткой в опытную пробирку налить 0,5 мл инактивированной сыворотки крови. В обе пробирки добавить по 0,5 мл взвеси микрококка. Встряхнуть. При наличии в сыворотке лизоцима просветление в опытной пробирке появляется через несколько минут.

Контрольные вопросы

Определение понятия иммунитет. Виды иммунитета в зависимости от способа его формирования. Виды иммунитета в зависимости от агента, против которого он направлен. Врождённый (естественный) иммунитет является видовым или индивидуальным, специфическим или неспецифическим, может ли передаваться по наследству? Назовите основные факторы врождённого иммунитета. Автор фагоцитарной теории, основные положения этой теории. Какие клетки обладают фагоцитарной активностью? Фазы фагоцитарного процесса. Какими показателями определяют фагоцитарную активность лейкоцитов (показатель, название, сущность). Какое различие между завершённым и незавершённым фагоцитозом? При каких заболеваниях наблюдается незавершённый фагоцитоз? Укажите факторы, усиливающие фагоцитоз. Опсоно-фагоцитарная реакция – принцип реакции, методика постановки. Что такое опсонический индекс? Перечислите гуморальные защитные факторы крови. Лизоцим: автор, открывший его (в каком материале), химическая природа, отношение к нагреванию, где содержится в организме, какие клетки продуцируют его, что происходит с бактериями под действием лизоцима, влияет ли он на вирусы? Комплемент, его химическая природа, отношение к нагреванию, из каких фракций состоит, где содержится в организме; основные пути активации комплемента; какое участие принимает в реакциях иммунитета; что происходит с бактериями при действии комплемента; укажите животное, которое используется для получения комплемента; при какой температуре и в течение какого времени можно разрушить (инактивировать) комплемент. Как называется сыворотка крови, прогретая при таком режиме? Приобретённый иммунитет, его характеристика: видовой или индивидуальный, специфический или неспецифический, передаётся ли по наследству, функция какой системы (ткани) лежит в основе формирования приобретённого иммунитета?

ЗАДАЧА. В семье заболел дифтерией ребенок Валерий, 3-х лет. Другие члены семьи не заболели, причём мать переболела дифтерией в детстве, а отец был привит дифтерийным анатоксином. Старшая сестра Наташа не была привита дифтерийным анатоксином из-за медицинских противопоказаний, поэтому ей пришлось провести экстренную профилактику с помощью противодифтерийной антитоксической сыворотки. Младший брат, Виталий, 3-х месяцев, не заболел, хотя ничем не был привит. В доме есть кошка и собака, они не заболели. Назовите для каждого из членов семьи и для животных вид иммунитета, благодаря которому они не заболели.

Что такое антиген? Характеристика полноценных антигенов. Какие вещества могут быть антигенами? Как называется способность антигенов индуцировать образование и накопление антител и иммунных лимфоцитов? Вступать с антителами в специфическое взаимодействие? Как называются антигены, обладающие обоими этими признаками? Как называются антигены, обладающие одним (каким?) из этих признаков? Структура антигена. Как называется часть молекулы антигена, определяющая его специфичность? Назовите известные вам антигены. Антигенная структура микробной клетки. Жгутиковый антиген, локализация, буквенное обозначение, природа, отношение к температуре, способ получения. Соматический антиген, его локализация, буквенное обозначение, химическая природа, отношение к температуре, способы получения. Для чего применяются антигены бактерий? Что такое «химическая вакцина»? Что такое протективный антиген? Продукты жизнедеятельности микробной клетки как антигены. Анатоксин, его свойства, получение, применение. Видоспецифические, типоспецифические и группоспецифические антигены микробов, их практическое значение для идентификации микробов. Гетероантигены. Методика приготовления антигена из эритроцитов. Антигены организма человека, аутоантигены, изоантигены.

Задания для выполнения в процессе самоподготовки.

Составьте схему «Классификация иммунитета», заполните таблицу «Факторы неспецифической защиты организма».

Работа студента на практическом занятии

I. Изучение факторов врождённого иммунитета.

1. Фагоцитоз.

Цель опыта: Определить фагоцитарную активность лейкоцитов периферической крови.

Ход опыта: описать.

Результат: подсчитать, зарисовать, отметить на рисунке стрелками стадии фагоцитоза.

Вывод: сформулировать.

2. Незавершённый фагоцитоз. Промикроскопировать и зарисовать мазок из гноя больного гонореей.

3. Лизоцим.Цель опыта: определить, обладает ли лизоцимной активностью сыворотка крови. Ход исследования записать в тетрадь, учесть результат и сделать вывод.

II. Антигены.

1. Приготовление антигена из культуры кишечной палочки. Приготовить взвесь культуры в физиологическом растворе, инактивировать на водяной бане, проверить на стерильность путём посева на скошенный агар. Стандартизировать с помощью оптического стандарта мутности.

2. Приготовление дифтерийного анатоксина. Рассчитать количество формалина, необходимое для того, чтобы получить 0,4% его концентрацию в 10 мл дифтерийного токсина. Добавить формалин и смесь поставить в термостат.

Дата добавления: 2014-10-15