Студопедия

КАТЕГОРИИ:


Архитектура-(3434)Астрономия-(809)Биология-(7483)Биотехнологии-(1457)Военное дело-(14632)Высокие технологии-(1363)География-(913)Геология-(1438)Государство-(451)Демография-(1065)Дом-(47672)Журналистика и СМИ-(912)Изобретательство-(14524)Иностранные языки-(4268)Информатика-(17799)Искусство-(1338)История-(13644)Компьютеры-(11121)Косметика-(55)Кулинария-(373)Культура-(8427)Лингвистика-(374)Литература-(1642)Маркетинг-(23702)Математика-(16968)Машиностроение-(1700)Медицина-(12668)Менеджмент-(24684)Механика-(15423)Науковедение-(506)Образование-(11852)Охрана труда-(3308)Педагогика-(5571)Полиграфия-(1312)Политика-(7869)Право-(5454)Приборостроение-(1369)Программирование-(2801)Производство-(97182)Промышленность-(8706)Психология-(18388)Религия-(3217)Связь-(10668)Сельское хозяйство-(299)Социология-(6455)Спорт-(42831)Строительство-(4793)Торговля-(5050)Транспорт-(2929)Туризм-(1568)Физика-(3942)Философия-(17015)Финансы-(26596)Химия-(22929)Экология-(12095)Экономика-(9961)Электроника-(8441)Электротехника-(4623)Энергетика-(12629)Юриспруденция-(1492)Ядерная техника-(1748)

Реакция локального гемолиза в геле





Дополнительный материал к занятию

План изучения темы

Исходный уровень знаний

ЗАНЯТИЕ 16

РЕАКЦИЯ ИММУННОГО ЛИЗИСА (ИММУННОГО БАКТЕРИОЛИЗА,
ИММУННОГО ГЕМОЛИЗА). РЕАКЦИЯ СВЯЗЫВАНИЯ
КОМПЛЕМЕНТА. РЕАКЦИИ С МЕЧЕНЫМИ КОМПОНЕНТАМИ:
ИММУНОФЛЮОРЕСЦЕНЦИЯ (РИФ), ИММУНОФЕРМЕНТНЫЙ
АНАЛИЗ (ИФА), ИММУНОБЛОТТИНГ, РАДИОИММУННЫЙ
АНАЛИЗ (РИА), ИММУННАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ МИКРОСКОПИЯ (ИЭМ)

На данном занятии изучаются реакции иммунитета с участием комплемента и реакции иммунитета с мечеными компонентами (меченые антигены или антитела). Необходимо продумать механизмы и схемы постановки этих реакций. В последние годы перечисленные реакции широко используются для диагностики инфекционных заболеваний и вытесняют традиционные методы (агглютинации, преципитации).

Цель самоподготовки

После самостоятельного изучения темы студент должен знать о каждой из реакций:

- ингредиенты;

- механизм реакции;

- методы и схемы постановки;

- практическое применение;

- диагностические препараты.

 

Для усвоения материала необходимо восстановить знания, полученные на предыдущих двух занятиях: комплемент и пути его активации; антигены и антитела; механизмы реакций иммунитета.

Цель занятия

1. Изучить механизм и методы постановки реакции иммунного бактериолиза и иммунного гемолиза.

2. Изучить механизм и методы постановки реакции связывания комплемента (РСК).

3. Изучить механизм и методы постановки реакции иммунофлюоресценции (РИФ).

4. Изучить механизм и методы постановки реакций иммуноферментного анализа (ИФА), радиоиммунного анализа (РИА), иммуноблоттинга.

5. Изучить механизм и методы постановки реакции иммунной электронной микроскопии (ИЭМ).

6. Научиться интерпретировать результаты серологических исследований.

 

1. Реакция иммунного бактериолиза.

2. Реакция иммунного гемолиза.

3. Реакция связывания комплемента.

4. Реакция с мечеными компонентами: РИФ, ИФА, РИА. ИЭМ, иммуноблоттинг.

5. Реакции иммобилизации.

 

После изучения темы студент должен уметь



1. Поставить РСК с готовыми ингредиентами по схеме, учесть и интерпретировать её результат.

2. Учесть и оценить результаты РИФ.

3. Учесть и оценить результаты ИФА.

4. Учесть и оценить результаты иммуноблоттинга.

 

Реакция предложена Н. Йерне в 1963 г., её применяют для подсчета клеток-антителопродуцентов. Клетки, продуцирующие антитела (например, плазмоциты селезёнки, после иммунизации животного эритроцитами барана), вносят вместе с эритроцитами барана в гель (агар). Затем в реакционную систему вносят комплемент (наслаивая его на агар) и наблюдают образование зон гемолиза вокруг каждой клетки, образующей антитела к эритроцитам барана. Метод получил распространение во многих областях экспериментальной иммунологии, так как даёт возможность оценить образование антител на уровне отдельных тканей и органов и клеточных популяций иммунной системы после различных воздействий.

 

Иммуноферментный анализ (ИФА)

ИФА –это выявление антигенов (или антител) с помощью соответствующих им антител (антигенов), конъюгированных с ферментом-меткой (пероксидазой хрена, β-галактозидазой или щелочной фосфатазой).

Наиболее распространён твердофазный ИФА, когда один из компонентов иммунной реакции (антигены или антитела) сорбирован на твёрдом носителе, например, в лунках пластиковой микропланшетки из полистирола. Для определения антител в лунки с сорбированным антигеном последовательно добавляют:

- сыворотку крови больного,

- антиглобулиновую сыворотку, меченую ферментом,

- смесь растворов субстрата для фермента и хромогена.

Каждый раз после добавления очередного компонента из лунок удаляют несвязавшиеся реагенты путём тщательного промывания. При положительном результате изменяется окраска раствора хромогена в жёлто-коричневый цвет (при использовании пероксидазы) или жёлто-зелёный цвет (при использовании фосфатазы).

Если необходимо определить в исследуемом материале антиген, тогда в лунку с сорбированными антителами вносят исследуемый материал, добавляют иммунную сыворотку против антигена, меченную ферментом, и смесь растворов субстрата для фермента и хромогена.

Для постановки ИФА выпускаются специальные тест-системы с набором всех необходимых ингредиентов.

К настоящему времени созданы многочисленные модификации базовой методики ИФА.

Конкурентные методы ИФА: искомый антиген и меченный ферментом антиген конкурируют друг с другом за связывание ограниченного количества антител иммунной сыворотки. Этот тест используется для определения количества антигена в исследуемом материале.

Сэндвич-ИФА (метод двойных антител для определения антигена):фиксированные на твёрдой фазе антитела инкубируют с анализируемым антигеном. После отмывания добавляют избыток меченых антител, специфичных к тому же антигену. Несвязавшиеся антитела отмывают. Продукт ферментативной реакции образуется в количествах, пропорциональных количеству связанного антигена. Можно использовать немеченые вторые антитела; о реакции в данном случае судят по связыванию энзим-меченых антител, специфичных по отношению к IgG (вторые антитела). В любом случае первые и вторые антитела должны принадлежать животным разных видов.

Измерение количества продуктов реакции ИФА проводят в автоматизированном варианте в приборах-ридерах с помощью спектрофотометра, по оптической плотности растворов в лунках при определённой длине волны.

 

Поможем в написании учебной работы
Поможем с курсовой, контрольной, дипломной, рефератом, отчетом по практике, научно-исследовательской и любой другой работой




Дата добавления: 2014-10-15; Просмотров: 1249; Нарушение авторских прав?;


Нам важно ваше мнение! Был ли полезен опубликованный материал? Да | Нет



ПОИСК ПО САЙТУ:


studopedia.su - Студопедия (2013 - 2022) год. Все материалы представленные на сайте исключительно с целью ознакомления читателями и не преследуют коммерческих целей или нарушение авторских прав! Последнее добавление




Генерация страницы за: 0.013 сек.