Реакция коагглютинации 5 страница

При бактериологической диагностике кишечного иерсиниоза и псевдотуберкулеза в связи с накоплением возбудителя при низких температурах (в отличии от большинства других микроорганизмов) материал предварительно забирают в забуференный физиологический раствор и сохраняют в холодильнике с периодическими высевами на среды Эндо, Плоскирева, Серова. Подозрительные колонии пересевают для получения чистых культур, изучают их по биохимическим свойствам и идентифицируют в РА с диагностическими сыворотками.

Для серологической диагностики используют РА и РНГА (на псевдотуберкулез - с I сероваром, на иерсиниоз - с сероварами О3 и О9) с исследованием взятых в динамике инфекционного процесса парных сывороток.

Специфическая профилактика.

Применяется в очагах чумы. Используется живая ослабленная вакцина из штамма EV. Имеется сухая таблетированная вакцина для перорального применения. Для оценки иммунитета к чуме (естественного постинфекционного и вакцинального) может применяться внутрикожная аллергическая проба с пестином.

16. Бруцеллы. Лабораторная диагностика бруцеллёза.

Бруцеллы (род Brucella) – возбудители бруцеллеза человека и животных. В. melitensis, В. abortus и В. suis – вызывают заболевание у человека; B. ovis, B. canis, B. neotomae заболевания человека не вызывают.

Морфология, физиология. Мелкие Гр– коккобактерии размером 0,5-0,7х0,6-1,5 мкм. Также могут быть палочковидной формы; в мазках обычно расположены беспорядочно. Жгутиков не имеют. Спор не образуют. Свежевыделенные штаммы могут образовывать нежную капсулу при культивировании на средах, содержащих 10% иммунной сыворотки барана или лошади, а также при выращивании на куриных эмбрионах.

Требовательны к питательным средам. Для выращивания обычно применяют триптозный, триптозо-казеиново-соевый и кровяной (5% овечьей крови) агары; оптимальная среда для культивирования - печёночный агар Хеддльсона. Выделяемые из организма больных они размножаются очень медленно, рост может быть обнаружен только через 1–3 недели после посева исходного материала. Многократное пересевание в лабораторных условиях делает культуры способными расти в течение 1–2 дней. На плотных питательных средах образуют мелкие, выпуклые, бесцветные с перламутровым блеском колонии S-формы (жемчужины), легко переходят в мукоидную и шероховатую. В жидких средах возникает равномерное помутнение. Под влиянием антибиотиков образуют L-формы.

Бруцеллы строгие аэробы, а В. abortus в первых поколениях требует увеличенной концентрации (5–10%) СО₂.

БХ: расщепляют глюкозу и некоторые другие углеводы, разлагать мочевину и аспарагин, гидролизовать белок, пептоны, аминокислоты, выделять каталазу, гиалуронидазу, пероксидазу, липазу, фосфатазу и другие ферменты. Внутри видов бруцелл различают биовары. Их дифференциация основана как на биохимических различиях, так и на способности расти на средах с фуксином и тионином, лизабельности фагом Т6, агглютинабельности моноспецифическими сыворотками.

АГ. Содержат поверхностно расположенный Vi-АГ и соматические видоспецифические АГ А и М, количественное соотношение которых различно у разных видов. У В.melitensis преобладают М-АГы. у В. abortus и В. suis – А-АГ. Для идентификации бруцелл по антигенным свойствам используют реакцию адсорбции агглютининов или монорецепторные сыворотки.

Экология и распространение. Зоонозная инфекция. Возбудители разных видов циркулируют среди животных, от которых заражаются и люди. В.melitensis вызывает заболевания мелкого рогатого скота, В. abortus – КРС, В.suis – свиней. Непатогенные для человека

Бруцеллы устойчивы к действию факторов окружающей среды. Они длительно сохраняют жизнеспособность при низкой температуре. В почве, моче, испражнениях животных, больных бруцеллезом, в навозе, сенной трухе возбудители выживают 4–5 мес., в шерсти– 3– 4 мес., в пыли – 1 мес., в замороженном мясе – до 5 мес. К высокой температуре и дезинфицирующим веществам бруцеллы высокочувствительны: при 60°С погибают за 30 мин, при кипячении – мгновенно. Все дезинфектанты губят бруцелл в течение нескольких минут.

Патогенность и патогенез. Проникновение – алиментарным, контактным и воздушно-капельным путями. Алиментарный путь заражения связан с употреблением в пищу продуктов животноводства (масла, молока, мяса), полученных от больных животных. Контактным путем заражаются чаще ветеринары, зоотехники, работники мясокомбинатов при уходе за больными животными, обработке сырья. Заражение возможно при работе с инфицированной шерстью, ветошью, когда имеет место распыление, попадание бруцелл в воздух. Для человека наиболее патогенными являются В.melitensis – возбудитель болезни мелкого рогатого скота (овец, коз).

Выраженные инвазивные и агрессивные свойства бруцелл обусловливают способность возбудителя проникать в организм через неповрежденные слизистые оболочки. После проникновения в организм распространяются лимфогенным путем, попадают в кровь, а из крови – в селезенку, костный мозг, лимфоузлы, где, локализуясь внутриклеточно, могут длительно сохраняться.

Болезнетворность бруцелл определяется действием эндотоксина. Выделяющиеся ферменты (гиалуронидаза и др.) способствуют распространению микробов в тканях. В патогенезе бруцеллеза имеет значение способность возбудителя размножаться в клетках лимфоидно-макрофагальной системы.

С первых дней болезни возникает реакций ГЗТ, которая сохраняется в течение всей болезни и длительное время после выздоровления.

Иммунитет. В основе иммунитета при бруцеллезе лежит активность системы Т-лимфоцитов. Важную роль играет фагоцитоз и состояние аллергии. Обезвреживание бруцелл происходит при участии антител – опсонинов, агглютининов.

Лабораторная диагностика. Проводится бактериологическим и серологическим методами. Материалом для бактериологического исследования служат кровь, испражнения и моча больных, иногда – спинномозговая жидкость. Выделением возбудителя занимается специальная режимная лаборатория.

Образцы инкубируют в МПБ или бульоне Мартена (можно использовать соевый бульон) при 37°С. При проведении исследования засевают 2 порции среды и в одной создают повышенную концентрацию СО. Через 4-5 сут наблюдают рост бруцелл, нередко в виде мелких колоний, вкрапленных в тяжи фибрина; среда остаётся слегка мутной или прозрачной. После пересева на твёрдые среды отмечают характерный рост колоний, из которых отвивают чистые культуры с последующими идентификацией биохимических свойств, определением способности расти на средах с добавлением некоторых анилиновых красителей (бактериостатический метод Хеддльсона) и определением биотипа реакциями агглютинации.

Серологические исследования. Реакция агглютинации (реакция Райта) - один из основных методов диагностики бруцеллёза. Динамика реакции может быть различной, для неё характерно колебание титров в течение суток; положительная реакция с первого дня заболевания; наиболее высокие титры отмечают через 1-2 мес. Для получения адекватных результатов необходимо использовать негемолизированную сыворотку и Аг, приготовленный из S-форм бруцелл (применять Аг диссоциированных форм нельзя); в эндемичных очагах, вызванных Brucella melitensis, рекомендуют применять гомологичный Аг. Следует помнить, что для реакции Райта характерны проагглютинационные зоны, или прозоны (отсутствие агглютинации в первых разведениях и чёткое её проявление в более высоких разведениях сыворотки). Часто применяют микрометод реакции агглютинации на стекле (реакция Хеддльсона). В острой фазе заболевания диагностическую ценность имеет иммуноферментный метод, выявляющий IgM в сыворотке больного. Выявление неполных AT (реакция Кумбса) с применением антиглобулиновой сыворотки. Для диагностики, особенно при отрицательных результатах бактериологических и серологических исследований, используют аллергические кожные пробы (проба Бюрне), обычно положительные у 70-85% пациентов к концу 1 мес заболевания. В качестве Аг применяют бруцеллин (мелитин, абортин) - протеиновый экстракт культуры бруцелл. Пробу также применяют для проведения эпидемиологических обследований; бывает положительной после вакцинации.

Для выявления возбудителя в молоке широко применяется кольцевая проба Банга.

Профилактика и лечение. Общие и специфические мероприятия ветеринарной службы. Выявляют и ликвидируют бруцеллез среди сельскохозяйственных животных, обезвреживают продукты и сырье животного происхождения. Людей, подвергающихся опасности заражения, вакцинируют живой бруцеллезной вакциной. Лечение бруцеллёза затруднено внутриклеточным паразитизмом бруцелл, что защищает их от действия антимикробных препаратов и AT. Препаратами выбора считают тетрациклин и стрептомицин. В тяжёлых и упорных случаях можно назначить рифампин (рифамицин). Смертность без лечения может достигать 5-10%.

17. Лабораторная диагностика кишечного дисбактериоза.

На состав микробных сообществ различных полостей организма влияют самые разнообразные факторы: состав и качество пищи, курение и употребление алкоголя, нормальная перистальтика и своевременное опорожнение кишечника и мочевого пузыря, качество пережёвывания пищи и даже характер трудовой деятельности (сидячий или иной). Однако наибольшее воздействие оказывают заболевания, патогенез которых включает изменения физико-химических свойств эпителиальных поверхностей и приём антимикробных препаратов. Стойкие нарушения микробных ценозов называют дисбактериозами (дисмикробиоценозами), среди них, безусловно, превалируют поражения микрофлоры кишечника.

Показания для бактериологической диагностики дисбактериоза кишечника – длительно протекающие инфекции и расстройства, при которых не удаётся выделить патогенные энтеробактерии; затяжной период реконвалесценции после перенесённой кишечной инфекции; дисфункции ЖКТ на фоне или после проведённой антибиотикотерапии или у лиц, постоянно контактирующих с антимикробными препаратами. Исследования также следует проводить у больных с болезнями злокачественного роста, страдающих диспептическими расстройствами, у лиц, подготавливаемых к операциям на органах брюшной полости, а также у недоношенных или травмированных новорождённых и при наличии бактериемии и гнойных процессов, трудно поддающихся лечению (язвенные колиты и энтероколиты, пиелиты, холециститы и др.). Посевы изучают на наличие патогенных микроорганизмов и на нарушение соотношений микрофлоры. Для обогащения в качестве обязательных рекомендуют использовать среды Мюллера-Хитона, селенитовый бульон, магниевую среду; для культивирования – среды Плоскирева, Эндо и Левина (одна из них градиентная), КА, среду Цёйсслера, среду Сабуро, среду Блауртка или тиогликолевый бульон и др. Патогенные бактерии определяют на средах с антибиотиками; исследования на дисбактериоз проводят для получения основных критериев и показателей. Результаты исследования следует считать объективными при анализе роста изолированных колоний, у которых можно изучить морфологию и подсчитать их общее количество на чашку Петри. При сплошном росте анализ следует повторить, производя высев из больших разведении. Факультативные бактерии культивируют 24-48 ч при 37°С, бифидобактерии – 48 ч, анаэробы и бактероиды – 4-5 сут в анаэростате, посевы на среде Сабуро – 96 ч при 28-30°С. После идентификации производят пересчёт содержания микроорганизмов каждой таксономической группы на 1 г исследуемого материала. К оценке результатов следует подходить осторожно, т.к. состав кишечной микрофлоры подвержен различным колебаниям и необходимо отличать истинный дисбактериоз от дисбактериальных реакций (сдвиги в составе микрофлоры незначительны либо кратковременны и не требуют специфической коррекции). При истинном дисбактериозе нарушения микробного ценоза обычно коррелируют с клиническими проявлениями, и их нормализация достаточно длительна (20-30 сут.). При выдаче результатов следует указать на наличие или отсутствие патогенной микрофлоры и дать состав присутствующих микроорганизмов. При наличии дисбактериоза необходимо указать следующие параметры:

Содержание общего количества Escherichia coli, полноценных в ферментативном отношении.

Наличие гемолитических Escherichia coli (в %).

Наличие прочих условно-патогенных бактерий (в %).

Наличие ассоциаций грамотрицательных бактерий, плазма-коагулирующего стафилококка и других ассоциаций.

Наличие бактерий рода Proteus.

Наличие грибов рода Candida.

Наличие или отсутствие бифидобактерии, лактобактерий, бактероидов и прочих в минимальных разведениях фекалий.

Наличие ассоциаций аэробных и анаэробных бактерий.

Повторные исследования. Следует отразить имеющиеся позитивные или негативные сдвиги; при обнаружении патогенной микрофлоры необходимо изучить её чувствительность к антибактериальным препаратам или бактериофагам. При определении чувствительности следует отдать предпочтение антибиотикам узкого спектра действия для возможно более селективного подавления патогенов. Содержание различных бактерий в фекалиях здоровых взрослых лиц и детей первого года жизни (сначала цифры для взрослых, после запятой - для детей) Количество бактерий в 1 г испражнениий (указывается только степень, цифру 10 не пишу, например вместо 10⁸-10⁹ пишу 8-9):

Бифидобактерии (8-9, 9-10)

Бактероиды (9-10, 8)

Лактбациллы(6-7, 6-8)

Молочнокислый стрептококк (6-8, 7-8)

Спорообразующие анаэробные клостридии (5,--)

Эшерихии ферментирующие лактозу (7-8, 7-8)

лактозодефектные (5-7, 6-7)

не ферментирующие лактозу (5-7, 6-7)

Протеус (4, 3)

18. Лабораторные исследования крови при септических состояниях.

Кровь – один из наиболее распространённых образцов клинического материала, исследуемых в бактериологической лаборатории. Ежегодно в мире отмечают не менее миллиона клинически проявляющихся случаев проникновения бактерий в кровоток, 30-50% которых заканчивается летально. Следует помнить, что выявление бактерий в крови – один из наиболее ответственных и трудных микробиологических исследований. Основные показания для проведения бактериологического исследования крови – лихорадка (38°С и выше), гипотермия (36°С и ниже), лейкоцитоз (особенно со сдвигом влево) и гранулоцитопения; основное требование (к сожалению, трудно выполнимое на практике) – забор материала до начала антибактериальной терапии. В клинической практике термины бактериемия и септицемия часто используют как взаимозаменяемые, хотя между этими состояниями существуют определённые различия.

Бактериемия – более широкое понятие, обозначающее присутствие бактерий в крови вообще; связано с проникновением микроорганизмов в кровь через входные ворота. Бактериемия может сопровождаться клиническими проявлениями либо протекать бессимптомно и обычно развивается при проникновении микроорганизмов в кровь экзогенным путём (например, травма и др.) либо из инфекционного очага, существующего в макроорганизме. Иногда можно зафиксировать временное присутствие бактерий в кровотоке, известное как транзиторная бактериемия – обычно бессимптомное состояние, возникающее при физических нагрузках и стрессовых ситуациях. В многочисленных исследованиях установлены факты циркуляции в кровотоке практически здоровых пациентов Staphylococcus epidermidis, Plevotella melaninogenica, Clostridium perfiingens и др.

Септицемия. Термин определяет состояния с характерными клинической картиной различной выраженности, течением процесса и склонностью к образованию вторичных очагов. Микроорганизмы, циркулирующие в крови, активно размножаются. Наиболее часто этиологические агенты септицемий диссеминируют в кровоток из очагов инфекции, но также возможна и травматическая инокуляция возбудителя. Микроорганизмы циркулируют в кровотоке вплоть до проведения эффективной терапии либо, при её отсутствии, до смерти пациента.

Бактериемия и септицемия часто являются составными частями многих инфекционных процессов. Например, внутрисосудистое диссеминирование отмечают при пневмококковой пневмонии, бартонеллёзе, лихорадке Скалистых Гор и других риккетсиозах, сифилисе и желтушном лептоспирозе. В ряде случаев бактериемия и септицемия вызывают клиническую симптоматику, характерную для определённых заболеваний. Следует помнить, что независимо от этиологии основные клинические проявления – лихорадка и озноб. Одно из самых распространённых осложнений грамотрицательных бактериемий и септицемий – эндотоксиновыи шок. Как правило, состояние развивается при одновременном поступлении в кровь значительного количества бактериальных токсинов. Бактериемию способны вызвать практически любые микроорганизмы.

Бактеремические инфекции.

Грамотрицательные бактериемии. В подавляющем большинстве случаев термин применяют при состояниях, вызванных представителями семейства Enterobacteriaceae и Pseudomonadaceae. В среднем подобные состояния возникают у 1% госпитализированных пациентов. Наиболее распространённые возбудители – Escherichia coli (35% всех случаев), виды Klebsiella, Enterobacter и Serratia (27% случаев), виды Proteus (11% случаев) и Pseudomonas aeruginosa (12% случаев).

Грамположительные бактериемии. Основной возбудитель – коагулазо–положительный золотистый стафилококк; коагулаза–отрицательные стафилококки (S. epidermidis и S. saprophyticus) редко вызывают подобные поражения. Выделяют первичные (возбудитель проникает с кожных покровов) и вторичные стафилококковые бактериемии (источник возбудителя – очаг существующей инфекции). Инфекции, наиболее часто сопровождаемые бактериемиями – Salmonella choleraesuis serovar typhi (S. enterica serovar typhi); Neisseria gonorrhoeae, Neisseria meningitidis серогрупп А, В, С.

Септицемические инфекции. Возникают при высокой вирулентности микроорганизмов и наличии предрасполагающих факторов. Большинство возбудителей септицемии способно вызывать и бактериемию.

Септицемия, вызванная бактероидами. Основные возбудители – Bacteroides fragilis и Prevotella melaninogenica.

Клостридиальная септицемия. Потенциальным возбудителем бактериемии и септицемии может быть любой из более чем 70 видов рода Clostridium. Более 90% всех клостридиальных септицемии вызывает С. perftingens. Менее вирулентные виды, С. septicum и С. ramosum, способны вызвать шок и гибель новорождённых, а также взрослых пациентов со злокачественными новообразованиями и иммунодефицитами. Источники клостридиальной септицемии – толстая кишка, желчевыводящие пути, матка. Клинически точную локализацию источника определяют только в половине случаев; в остальных предполагают вышеуказанную локализацию. Для получения адекватного результата предпочтительно забирать 20-30 мл крови. У детей концентрация микроорганизмов обычно выше, и объём образца зависит от возраста ребёнка (1-5 мл). Кровь немедленно вносят в сосуд с питательной средой (не меняя иглы) в соотношении 1:10 и перемешивают. Отобранные образцы необходимо быстро доставить в лабораторию, сохраняя при комнатной температуре. Образцы крови нельзя замораживать. Как правило, успешное выявление бактерий у 99% пациентов возможно только при изучении трёх гемокультур, взятых в течение 24 ч. При исследовании только одной гемокультуры бактерии обнаруживают в 80% случаев.

Техника выделения возбудителя. В отличие от грибковых и паразитарных инфекций, микроскопическое исследование крови обычно не проводят, т.к. обнаружить бактерии микроскопией мазков крови удаётся редко. Одна из немногих бактерий, наиболее часто обнаруживаемая в мазках, – Borrelia recurrentis. Для культивирования образцов крови применяют относительно стандартные методики. Разведение крови в соотношении 1:10 стабильно снижает бактерицидное действие сывороточных факторов. При возможности в среду вносят 0,025% раствор полианитолсульфоната Na, ингибирующего фагоциты и компоненты комплемента, а также инактивирующего аминогликозидные антибиотики. Обычно используют обогащённые питательные среды, например, 100 мл триптического соевого бульона. При подозрении на конкретную инфекцию можно использовать соответствующие среды, например среду для выращивания бруцелл. Посев необходимо проводить в 2 сосуда; в каждый вносят по 5 мл крови. В один обеспечивают поступление воздуха для обнаружения аэробов и факультативных анаэробов; в другом создают условия, препятствующие контакту среды с воздухом (например, заливают парафином или минеральным маслом), что необходимо для роста строгих анаэробов. Гемокультуры инкубируют при температуре 35-37°С и в течение 7 дней ежедневно осматривают. Помутнение среды указывает на рост бактерий; при отсутствии роста проводят повторное исследование на 14 день. При выделении бактероидов исследование продолжают в течение 2-3 нед. Через 24 ч готовят мазки и окрашивают по Граму. Из пробирок с отсутствием помутнения проводят повторный посев на чашки с КА. Повторный пересев сильно повышает возможность выявления бактерий в гемокультуре. После 2 нед исследования гемокультуру признают отрицательной при отсутствии роста даже при подозрении на наличие бактерий.

19. Лабораторное исследование мочи при уроинфекции.

Моча здорового человека стерильна; как правило, бактерии проникают в неё при прохождении через дистальные отделы мочевыводящих путей. Проникшие в мочу микроорганизмы быстро размножаются, т.к. она содержит основные вещества, необходимые для роста (углеводы, мочевина, минеральные соли и т.д.). Росту бактерий также способствуют благоприятные значения рН (5,3–6,5). К резидентной микрофлоре относят стафилококки, микрококки, дифтероиды, сарцины, энтеробактерии, нейссерии, микобактерии, микоплазмы, бактероиды, фузиформные бактерии и трепонемы. Обилие бактерий, колонизирующих наружные половые органы и переднюю уретру, а также способных быстро размножаться в моче, ставит проблемы правильной интерпретации результатов бактериологического исследования. Для проведения дифференциальной диагностики между истинными возбудителями и бактериями, случайно попавшими в мочу, следует правильно проводить забор мочи, использовать методы количественного определения микроорганизмов и знать возбудителей инфекций мочевыводящих путей.

Перед проведением забора мочи следует попросить больного обмыть наружные половые органы с мылом. В стерильный сосуд отбирают 3–5 мл средней порции утренней мочи, т.к. она содержит повышенное количество микроорганизмов, скопившихся за время сна. Критическая величина нормального содержания бактерий – 105/мл. Полученный образец следует быстро (в течение 30 мин) доставить в лабораторию, исследование необходимо начинать не позднее 1 ч после забора. При невозможности начать работу немедленно мочу можно сохранять в холодильнике не более 24 ч. Некоторые методики позволяют производить посев у постели больного: чаще используют метод предметного стекла (стекло, покрытое слоем питательной среды, погружают в мочу, извлекают, дают моче стечь и инкубируют) и метод калиброванных флаконов (используют сосуды ёмкостью 30 мл, стенки которых покрыты питательной средой: в сосуд вносят 3–5 мл мочи, ополаскивают стенки и сливают; сосуды инкубируют в термостате). При невозможности самостоятельного мочеиспускания показаны катетеризация и надлобковая пункция мочевого пузыря. На факт контаминирования образца часто указывает наличие нескольких видов бактерий. Наличие в моче клеток эпителия влагалища указывает, что забор образца был произведён неправильно.

Количественные методы бактериологического исследования мочи. Наибольшее распространение получил метод калиброванной петли. Образец мочи высевают на подходящую плотную среду платиновой калиброванной петлёй диаметром 2 мм. Следует соблюдать технику посева. Платиновой петлей диаметром 2 мм производят посев мочи (30–40 штрихов) на сектор А чашки Петри с простым питательным агаром. После этого петлю прожигают и производят 4 штриховых посева из сектора А в сектор I и аналогичным образом – из сектора I во II и из II в III.Чашки инкубируют при 37°С 18–24 часа, после чего подсчитывают число колоний, выросших в разных секторах. По этому количеству определяют степень бактериурии.

При латентном течении уроинфекции, а также после лечения антибактериальными препаратами рекомендуется производить посев по 0,1 мл цельной мочи на плотные питательные среды и в пробирку с 0,25% сахарным бульоном. Посевы инкубируют при 37С° 24 часа. При отсутствии роста на 5% кровяном агаре чашки выдерживают в термостате, т.к. может наблюдаться замедленный рост стрептококков.

Быстрый метод определения количества бактерий в образце – микроскопия нецентрифугированной мочи; выявление хотя бы одной бактерии в поле зрения при большом увеличении микроскопа (тысячекратном) эквивалентно наличию 105 бактерий/мл мочи. При поражениях в моче часто обнаруживают лейкоциты и эритроциты, что может указывать на наличие патологического процесса, но не считается диагностическим показателем.

При профилактических осмотрах можно использовать экспресс–тесты для скрининговых иссследований, основанные на определении продуктов метаболизма, образующихся при размножении микроорганизмов в моче. При положительном результате, полученном ускоренными методами, необходимы дальнейшие исследования с помощью метода секторных посевов.

Нитритный тест. Нитриты, являющиеся продуктами метаболизма энтеробактерий, можно выявить в моче с помощью реактива Грисса. Готовят 2 раствора

а) 1,25 г. сульфониловой кислоты растворяют в 500 мл 30% уксусной кислоты

б)2,5 г a–нафтиламина растворяют в 500 мл 30% уксусной кислоты.

Оба раствора хранят в защищенном от света месте. Непосредственно перед исследованием оба раствора смешивают в равных количествах, 1 мл смеси добавляют к 1 мл мочи. Появление красного окрашивания свидетельствует о присутствии в 1 мл мочи не менее 105 микробных клеток.

ТТХ – тест. Трифенилтетразолий хлористый (ТТХ) под действием продуктов жизнедеятельности микроорганизмов переходит из бесцветного в красный нерастворимый в воде трифенилформазан. Интенсивность окраски находится в прямой зависимости от степени бактериурии.

Готовят три раствора: 1) Насыщенный раствор двузамещенного фосфорнокислого натрия; 2) 750 мг ТТХ растворяют в 100 мл раствора 1; 3) Рабочий раствор – 4 мл раствора 1 смешивают с 100 мл раствора 2. Хранят растворы в прохладном защищенном от света месте. Срок хранения растворов 1 и 2 – до 2 месяцев, рабочего раствора не более 2 недель. При постановке реакции пользуются стерильной посудой.

К 2 мл мочи прибавляют 0,5 мл рабочего раствора и помещают после перемешивания в термостат при 37°С. После 4–х часовой инкубации учитывают результаты. Появление на дне пробирки красного осадка свидетельствует о наличии в 1 мл мочи не менее 105 микробных клеток.

В 1 мл мочи здорового человека содержится не более 104 бактерий (критическое число – 105 бактерий), превышение этих величин считают патологией, а состояние рассматривается как клинически значимая бактериурия. При выявлении 106–108 бактерий в правильно отобранных образцах наличие инфекции мочевыводящих путей можно считать несомненным. Неясные, пограничные значения требуют проведения многократных повторных исследований.

Транзиторная бактериурия. В зависимости от количества микроорганизмов может быть явной или незначимой. Нередко развивается при различных патологиях, например энтероколитах, а также при проведении различных медицинских манипуляций. При отсутствии патологии мочевыводящих путей бактерии быстро выводятся из организма.

Неясная бактериурия. Содержание бактерий в моче не превышает 104, к находке следует отнестись серьёзно и повторить исследования 2–3 раза через различные интервалы (учитывая время проведения последнего курса антибиотикотерапии). Особое внимание следует обратить на наличие бактериурии неясного генеза у детей младшего возраста.

Значимая бактериурия. Как правило, сопровождается объективными или субъективными признаками поражения мочевыводящих путей. К этой группе следует отнести и бессимптомные бактериурии, сопровождающиеся выделением 105 и более бактерий (обычно соответствует бессимптомной стадии цистита или пиелонефрита).

При поражениях, вызванных не энтеробактериями, можно наблюдать менее выраженную бактериурию. У пациентов с заведомой предрасположенностью к развитию инфекции также наблюдают бактериурию с выделением меньшего числа микроорганизмов.

При поражениях мочевыводящих путей часто большее значение имеют биологические свойства возбудителя, а не его содержание в моче.

Следует иметь в виду, что в некоторых случаях – у больных, получающих антибактериальную терапию, при плохом оттоке мочи, при низком ее удельном весе, при рН ниже 5 – может наблюдаться низкая степень бактериурии при имеющемся заболевании. Поэтому, помимо степени бактериурии, следует учитывать вид выделенных из мочи микроорганизмов. Энтеробактерии чаще выделяются из мочи больных уроинфекцией.

Дифтероиды, лактобациллы, грамположительные палочки обычно выделяются из мочи здоровых людей.

При трактовке результатов исследования следует учитывать повторность выделения одного и того же вида микроорганизмов, наличие монокультуры или ассоциации микроорганизмов. Монокультура чаще встречается при острых воспалительных процессах и коррелирует с высокой степенью бактериурии. Ассоциации микроорганизмов чаще встречаются при хронических процессах и коррелируют с низкой степенью бактериурии.

Дата добавления: 2014-10-17