Качественный анализ. Особенности качественного и количественного ТСХ-анализа

Особенности качественного и количественного ТСХ-анализа

Нанесение образца

Наилучшим методом нанесения образца на пластинки с незакрепленным слоем сорбента следует признать метод “висящей капли” – анализируемый раствор аккуратно выдавливают из дозирующего устройства так, чтобы на его конце образовалась микрокапля, а затем аккуратно подносят ее, избегая контакта собственно дозирующего устройства с поверхностью, к сорбенту так, чтобы капля соприкоснулась с ним. Капиллярными силами каплю “всасывает” в слой, после чего дозатор сразу же отводят от поверхности, избегая образования пятна большой площади. После высыхания (при такой технике следует растворять анализируемое вещество в легколетучем растворителе) нанесение можно повторить для получения достаточной для целей анализа пробы вещества на пластинке.

В области качественного анализа ТСХ отвечает на вопросы:

- представляет ли собой данный образец индивидуальное вещество или смесь разных веществ;

- идентично ли анализируемое вещество имеющемуся образцу.

При получении на хроматограмме образца нескольких пятен вывод о наличии примесей в основном веществе является однозначным (следует методом двумерной ТСХ убедиться, что вещество не претерпевает химических превращений в процессе анализа). Наличие единственного пятна на хроматограмме не является однозначным результатом – не исключено наличие двух или более веществ с одинаковыми значениями R_f в выбранных условиях. Поэтому принято считать, что чистым является вещество, на хроматограммах которого присутствует единственное пятно при использовании не менее трех различных сочетаний сорбент-элюент. Следует обращать внимание на форму пятна. Чем больше форма пятна анализируемого объекта отличается от формы пятна нанесения, тем ниже достоверность вывода о чистоте вещества. Указанием на неэффективность разделения вещества и примеси при наличии единственного пятна служит вытянутая вдоль направления элюции форма пятна и его “гантелеобразная” форма, “шапочки” на основных пятнах и градиент окраски пятна вдоль направления элюции. Исключением в этом случае являются “кометообразные” пятна, образование которых является следствием высокой сорбции анализируемого вещества на высокоаффинных центрах (например, при хроматографировании оснований на силикагеле в некислых средах). Вытянутые вдоль “веретенообразные” пятна симметричные по обеим осям без градиента окраски не следует рассматривать как указание на загрязненность вещества – такая форма характерна для средних и слабых оснований и кислот при использовании кислых или основных элюентов, соответственно.

Аналогично, анализируемое вещество можно считать идентичным образцу в том случае, если при использовании не менее трех сочетаний элюент-сорбент значения R_f и цвет пятен анализируемого вещества и образца совпадают с ошибкой, не превышающей общую ошибку эксперимента.

Анализ сложных смесей может оказаться затруднительным из-за большого количества пятен и недостаточной разрешающей способности. В этом случае проблема может быть решена двумерной хроматографией с применением разных элюентов. При элюции в одном направлении, как правило образуются зоны, содержащие смеси близких по своствам веществ, при элюции во втором – разделение внутри каждой группы. Если не удается одним элюентом разделить все группы на составляющие, хроматограмму можно разрезать на отдельные полоски и каждую из них элюировать во втором направлении, применяя отдельно подобранные элюенты.

Рисунок

1.4

– Пример двумерной ТСХ смеси 1 мкг ДНФ-производных амино-

кислот (13 ´ 13 см). Первое направление – элюирование толуольной смесью (см. текст); второе направление – элюирование смесью хлороформ–метанол–уксусная кислота (95: 5: 1). Выделенные соединения: ОН – 2,4-динитрофенол; Ди – ди-ДНФ-производные; NH2 — 2,4-динитроани-лин; AM – а-аминомасляная кислота; АК – a-аминокаприловая кислота; Ала – аланин; Асп – аспарагиковая кислота; (Цис2 – цистин; Глу – глутаминовая кислота; Гли – глицин; Гис – гистидин; Илей – изолейцин; Лей – лейцин; Илей – норлейцин; Лиз – лизин; Мет – метионин; Мет-О2 – метионинсульфон; Орн – орнитин; Фен – фенилаланин; Про – пролин; Сар – саркозин; Сер – серии; Тр – треонин; Три – триптофан; Тир – тирозин; Вал – валин; Нвал – норвалин (Кирхнер Ю. Тонкослойная хроматография: В 2-х т. Т. 1: Пер. с англ. – М.: Мир, 1981. – 617 с., рисунок со стр. 497).

Дата добавления: 2014-12-27