Определение антибиотиков в сыворотке крови, моче и других биологических жидкостях

Ускоренные методы

Позволяют получить результат через 3-6 часов. При этом используют два основных принципа.

Первый принцип основан на ускоренном определении роста микроорганизмов по изменению окислительно-восстановительного потенциала (изменения рН определяют индикатором), продукции микроорганизмами биологически активных веществ (протеин А стафилококка, протеаз и др.). Чаще всего пользуются методом, основанным на изменении рН среды в процессе роста микроба в присутствии антибиотиков.

При использовании метода бумажных дисков или серийных разведений антибиотиков в агаре через 4-6 часов роста культуры поверхность чашки обрабатывают индикатором или вносят его в пробирки. В местах роста микроба среда окрашивается в красный цвет, при отсутствии роста микроба цвет среды не меняется. Учет и критерии оценки, как и при обычных методах.

На ускорении роста микроорганизмов с использованием специальных добавок к питательной среде основаны другие известные тесты. Разработаны автоматизированные тест-системы ускоренного определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам. В стрипы с критическими концентрациями препаратов (около 30 антибиотиков) вносят определенную концентрацию испытываемого штамма на специальной среде для роста микроорганизмов. После инкубации в течение 4-6 ч определяют прирост мутности раствора по сравнению с контрольными на автоматическом анализаторе или визуально.

Эти методы используют для определения биологической активности антибиотиков и их концентрации в тканях макроорганизма. На практике используют два метода.

Метод серийных разведений. Готовят ряд разведений эталонного антибиотика на жидкой питательной среде и параллельно исследуемый материал. Во все пробирки вносят тестовый микроорганизм в определенной концентрации. Учитывают результаты по помутнению среды. Определяют концентрацию антибиотика умножением наибольшего разведения исследуемой жидкости, задерживающей рост бактерий, на минимальную концентрацию эталонного антибиотика, задерживающего рост.

Метод диффузии в агар. Этот метод точнее, чем метод серийных разведений и чаще используется на практике. Готовят чашку Петри с двумя слоями агара. Первый слой - голодный агар, второй слой состоит из агара в смеси с тест-культурой. После застывания второго слоя агара на его поверхности делают 6 лунок. В половину из них вносят разведения испытуемого раствора, а в остальные – стандартный раствор. Пробы для повышения точности дублируют. Размеры зон задержки роста тест-культуры после инкубации измеряют и производят расчет активности (концентрации) антибиотиков с использованием расчетных таблиц или стандартных кривых.

Дата добавления: 2015-04-24