Порядок работы с микроскопом

1.Проверить состояние осветительного аппарата (поднять кон­денсор, открыть его диафрагму, поставить плоское зеркало).

2.Положить на столик микроскопа исследуемый препарат (дрожжи, окрашенные фуксином) и поставить слабый сухой объектив (8×) на расстояние несколько меньше свободного рабочего расстояния (для данного объектива 5-7 мм).

3. Глядя в окуляр и вращая зеркалом, произвести предварительную установку освещения,

4. Медленно поднимая тубус макровинтом, добиться резкого изображения препарата. При использовании слабого сухого объектива в поле зрения, кроме препарата, может быть видно изображение источ­ника света, т.е. оконной рамы и других предметов, находящихся за окном.

5.Движением зеркала поставить в центре поля зрения наиболее светлый участок оконной рамы (например, участок неба с облаками), после чего можно переходить на микроскопию с сильным сухим или иммерсионным объективами. При этом мешающие детали исчезают из поля зрения, Если этого не происходит, то следует осторожно приподнять или опустить конденсор на 1-1,5 мм.

6.Поставив сильный сухой или иммерсионный объектив, ни в коем случае нельзя опускать тубус микроскопа, глядя в окуляр. Необходимо под контролем глаза, глядя сбоку, опустить объектив на расстояние меньше свободного рабочего, а затем, глядя в окуляр, макровинтом медленно поднимать тубус до тех пор, пока появится мелькание препарата. После этого точная установка достигается с помощью микровинта. Не следует делать микровинтом более половины оборота в одну или другую сторону. При фокусировке микроскопа полезно левой рукой слегка двигать препарат по поверхности предметного столика.

3. Пользуясь изложенными сведениями, необходимо научиться быстро и правильно устанавливать препарат в фокусе при всех трех объективах. Рассматривая препарат, следует обратить внимание на резкое увеличение числа разрешаемых подробностей при работе с иммерсионным объективом по сравнению с сухими объективами.

объектив 8×	объектив 40×	объектив 90×
Дрожжевые клетки Saccharomyces cerevisiae

4. Необходимо твердо усвоить основные приемы бактериологической техники: обращение с культурами микробов, использование бактериологической петли, спиртовок, способы обеззараживания использованного материала и отработанных стекол.

При работе с культурами микроорганизмов необходимо соблюдать следующие два основные принципа: 1 - не загрязнить микробами окружающей среды и не заразить самого себя и 2 - не загрязнить культуру посторонними микробами из окружающей среды, так как точная идентификация исследуемого возбудителя заболевания возмож­на лишь при условии выделения и сохранения его в чистой культуре.

Культуру бактерий сохраняют обычно на жидких и плотных питательных средах в пробирках, закрытых ватно-марлевыми пробками. При всех манипуляциях с культурой (приготовление мазка, пересев ее с одной среда на другую и т.д.) используют стерильную бакте­риологическую петлю из металлической проволоки. Правильно приготовленная петля диаметром от I до 5 мм должна быть полностью замкнута и не должна иметь лишнего свободного конца. Петлю стерилизуют прокаливанием докрасна в пламени горелки, держа ее сначала вертикально, затем проводят 3-4 раза через пламя прилегающую к петле часть петледержателя.

Для соблюдения вышеуказанных принципов в случае приготовления бактериологическую петлю берут в правую руку как ручку или карандаш, а пробирку держат в левой руке между большим и указательным пальцами с тыльной стороны кисти почти в горизонталь­ном положении. При этом должна быть хорошо видна поверхность питательной среды с культурой бактерий.

Простерилизовав петлю, правой рукой захватывают пробку, прижимая ее мизинцем к ладони, освобождают ее небольшим поворотом, вынимают над пламенем горелки и, не выпуская пробку из руки (в таком положении она сохраняется в течение последующих манипуляций) обжигают края пробирки. Петлю вводят в пробирку, остужают прикосновением к внутренней стороне стекла и берут ею небольшое коли­чество культуры, стараясь не захватить при этом питательной среды. Вынув петлю, опять обжигают края пробирки, слегка обжигают пробку и закрывают ею пробирку. Не выпуская петли из руки, ставят пробирку в штатив и приступают к приготовлению мазка. После этого пет­лю стерилизуют и ставят в штатив.

С соблюдением этих основных правил производят и все другие манипуляции с культурами бактерий - пересев из пробирки в пробирку» из пробирки в чашку, из чашки в чашку и т.п.

В случае попадания культуры микробов на руки, другие предметы и пол необходимо немедленно протереть руки и загрязненные предметы ватой, смоченной дезинфицирующим растворов, а пол залить этим же раствором. Через 30 минут руки можно вымыть с мылом.

5. На чистое сухое предметное стекло нанести с помощью бактериологической петли каплю воды. Прокаленной и остуженной петлёй внести в небольшое количество (одну петлю) микробной массы и равномерно перемешать с водой. Петлю прокалить и поставить в штатив. Накрыть каплю чистым покровным стеклом и придавить его слегка рукояткой петли. Полученную "раздавленную каплю" поместить на предметный столик микроскопа и промикроскопировать сначала со слабым сухим объективом, затем с сильным сухим объективом и, наконец, с иммерсионным. Для установки препарата в фокусе следует найти вначале при малом увеличении капли, вывести его в центр поля зрения и затем по нему ориентироваться.

При микроскопии необходимо помнить, что рассматривание неокрашенного препарата возможно только с ограниченным освещением, что достигается опусканием конденсора или уменьшением отверстия ирис-диафрагмы,

6. На чистое предметное стекло наносят каплю воды и рядом с ней несколько больших размеров каплю туши. В каплю воды вносят небольшое количество исследуемой культуры (получается облачко помутнения). Прокалив и остудив петлю(чтобы сжечь оставшуюся массу бактерий), готовят равномерную взвесь бактерий. Затем соединяют эту каплю с каплей туши, тщательно перемешивают и размазывают по стеклу тонким слоем. Высушивают мазок на воздухе и микроскопируют с иммерсионным объективом.

При микроскопии препарата рекомендуется начинать с более светлых участков его, а затем переходить на более темные. Необходимо помнить, что при негативных способах окраски микробы остаются не убитыми.

Сарцина Sarcina, Негативная окраска по Бурри	Стрептобацилла Streptobacillus («раздавленная капля»)

7. Основные формы бактерий. Готовые окрашенные препараты-мазки из культур стафилококка, стрептококка, сарцины (кокковые формы); монобактерии, стрептобациллы (палочковидные формы); вибриона (извитая форма) промикроскопировать и зарисовать. Обратить внимание на форму и взаиморасположение бактерий в каждом препарате.

Стафилококк Staphylococcus	Стрептококк Streptococcus	Сарцина Sarcina
Монобактерии Monobacterium	Стрептобацилла Streptobacillus	Вибрион Vibrio

Контрольные вопросы

От чего зависит разрешающая способность микроскопа?

Почему иммерсионные объективы имеют более высокую разрешающую способность по сравнению с сухими объективами с тем же отверстным утлом?

Что такое нумерическая апертура и по какой формуле она определяется?

Чему равны разрешающая способность современных оптических микроскопов и их полезное увеличение?

На какой высоте должен находиться при микроскопии конденсор?

Каким зеркалом следует пользоваться при работе на микроскопах, снабженных конденсором?

Чему равны свободные рабочие расстояния объективов микроскопов и для чего необходимо их знать?

Каким винтом микроскопа следует производить наводку на рез­кость?

Как следует производить наводку" микроскопа на резкость, чтобы избежать повреждения объектива и препарата?

Как выявить наличие загрязнения в окуляре?

Как правильно приготовить бактериологическую петлю?

Как следует держать пробирку, петлю и пробку при взятии ма­териала для приготовления препарата?

Как предохранить культуру микроорганизма от загрязнения из воздуха?

Как производится негативная окраска препарата по Бурри?

Как выглядят бактерии в препарате, приготовленном по Бурри?

Как должно быть установлено освещение при микроскопии неокра­шенных препаратов ("раздавленная капля")?

Как устроен люминесцентный микроскоп?

Каким светом наиболее целесообразно вызывать люминесценцию препарата и почему?

Каково назначение желтого окулярного светофильтра в люминесцентном микроскопе?

Что такое флуорохромирование, какие флуорохромы чаще приме­няются?

В чем заключается принцип иммунофлуоресцентного метода иссле­дования?

В чем сущность темнопольной микроскопии?

В чем сущность фазовоконтрастной микроскопии?

Из каких трех основных систем состоит электронный микроскоп просвечивающего типа?

Почему разрешающая способность электронного микроскопа во много раз выше разрешающей способности светооптических микроскопов?

Приложение к ЗАНЯТИЮ 1.

Дата добавления: 2015-03-29