Методические указания. Метиленовый щелочной синий Лёффлера

Метиленовый щелочной синий Лёффлера

Водно-спиртовый раствор метиленового синего

Насыщенный спиртовый раствор метиленового синего

Карболовый фуксин Циля

Основной фуксин 1 г

Спирт 96^° 10 мл

Карболовая кислота кристаллическая 5 г
Глицерин несколько капель

Вода дистиллированная до 100 мл

Водный фуксин (фуксин Пфейффера)

Карболовый фуксин Циля 1 мл

Дистиллированная вода 10 мл

Метиленовый синий 10 г

Спирт 96^° до 100 мл

Насыщенный спиртовый раствор метиленового синего 10 мл

Дистиллированная вода 100 мл

Насыщенный спиртовый раствор метиленового синего 30 мл

Едкий натр или едкое кали 1%-ный раствор I мл

Дистиллированная вода до 100 мл

З А Н Я Т И Е4

Дата ______________

Тема: Физиология бактерий. Питательные среды. Методы стерилизации и дезинфекции. Влияние на микробы физических и химических факторов. Бактериологический метод диагностики инфекционных заболеваний Выделение чистых культур бактерий: аэробов и анаэробов (1 день).

План занятия:

1. Питательные среды, применяемые для выращивания бактерий.

2. Знакомство с термостатами, их устройством, терморегуляцией. Знакомство с бактериологической посудой.

3. Методы стерилизации. Знакомство с устройством и работой сухожарового аппарата и автоклава.

4. Знакомство с характером роста бактерий на плотных и жидких питательных средах (культуры бактерий на МПА в чашках Петри и в пробирках, а также на МПБ).

5. Пигменты бактерий, демонстрация пигментных культур.

6. Изучение колоний бактерий на пластинках МПА.

7. Техника пересева бактериальных культур с пластинок МПА на косячок МПА, с косячков МПА на косячок и пластинки МПА с помощью бактериальной петли и шпателя.

8. Исследование смеси бактерий. Бактериоскопия смеси и посев ее на пластинки МПА для выделения изолированных колоний.

1. Питательные среды (ПС). По назначению делятся на: Универсальные среды – (мясопептонный агар - МПА, мясопептонный бульон - МПБ) – растут многие вида бактерий. Специальные среды – (кровяные, сахарные, сывороточные) – для культивирования бактерий, плохо растущих или не растущих на универсальных средах. Избирательные (элективные) среды – (желчь, желчный бульон, пептонная вода, солевой агар) – хорошо растут (избирательно) лишь нужные виды бактерий, рост сопутствующих подавлен. Дифференциально-диагностические среда – (Эндо, Левина, Плоскирева и др.) – различные виды бактерий растут в виде окрашенных или неокрашенных колоний (дифференциация по внешнему виду колоний).

ПС по консистенции: жидкие, полужидкие, плотные (твёрдые).

ПС должны обязательно отвечать следующим требованиям: 1) они должны содержать все необходимые питательные вещества, витамины и соли; 2) иметь оптимальную рН; 3) обладать буферной ёмкостью; 4) иметь дос­таточную влажность (особенно плотные среды); 5) должны быть стерильными; 6) должны быть прозрачными (особенно жидкие ПС).

2. Демонстрация термостатов, бактериологической посуды.

3. Демонстрация сухожарового шкафа, автоклава. Разбор методов стерилизации и дезинфекции.

4-6. Обратить внимание на внешний вид культуры: муть, плен­ка, осадок (для жидких культур). Описать внешний вид колоний на пластинках МПА: размеры; края колонии (ровные, фестончатые, лопастные); поверхность колонии (влажная или сухая, гладкая или шероховатая, складчатая или ровная, плоская или выпуклая и т.д.); прозрачность колонии (прозрачная, полупрозрачная, непрозрачная); на­личие пигмента и цвет его; консистенция колонии (плотная, рыхлая, слизистая).

Из описанной колонии приготовить препарат-мазок, окрасить фуксином Пфейффера, зарисовать препарат и записать морфологию бактерий, а затем при помощи бактериальной петли сделать посев на косячок МПА. Для этого необходимо простерилизовать петлю, приподнять крышку чашки Петри и стерильной холодной петлёй прикоснуться к колонии. После этого в левую руку берется пробирка с косячком МПА (между большим и указательным пальцами) так, чтобы поверхность скошенного агара была перед глазами. Пробирка открывается над пламенем горелки, обжигается ее край, а затем петля вводится в пробирку до дна ее, где имеется небольшое количество конденсационной влаги. Плоской поверхностью петли прикасаются к поверхности косячка агара и делают посев штрихообразными движениями, постепенно продвигаясь снизу вверх. Обжигают на пламени спиртовки край пробирки и пробку и закрывают пробирку над пламенем спиртовки. На пробирке восковым карандашом (маркером) надписывают название культуры, дату посева, фамилию и группу студента и ставят посев до следующего занятия в термостат. Результаты работы оформляют в виде протокола по следующей форме.

Дата добавления: 2015-03-29