Работа 9. Обнаружение желчных пигментов в моче

Определение кальция в сыворотке крови по методу де Ваарда.

В центрифужную пробирку отмеряют 2 мл дистилированной воды. Приливают 1 мл сыворотки крови. Затем добавляют 1 мл насыщенного раствора оксалата аммония и оставляют на 10 мин, после чего центрифугируют 5 минут. Оксалат кальция образует плотный белый осадок на дне пробирки. Жидкость над осадком сливают. Осадок промывают, добавляя в пробирку 4 мл 2% раствора гидроксида аммония. Вновь центрифугируют 5 минут. Сливают аммиак с осадка и наливают в пробирку 2 мл 1 н. серной кислоты, осадок размешивают стеклянной палочкой. Берут еще одну пробирку и наливают 2 мл 1 н. серной кислоты (контроль). Погружают пробирки на 1-2 минуты в кипящую водяную баню. Горячий раствор титруют из микробюретки 0,01 н раствором перманганата калия до появления бледно-розового окрашивания, исчезающего в течение минуты. Из израсходованного количества перманганата калия в опытной пробе вычитают количество перманганата, пошедшее на титрование контрольного опыта.

Пример расчета: 1 мл 0,01 н раствора перманганата калия эквивалентен 0,0499 ммоль кальция. На титрование сыворотки было затрачено 0,54 мл перманганата калия, на титрование контрольного опыта 0,05 мл перманганата калия, отсюда содержание кальция в сыворотке равно:

(0,54-0,05)*0,04990*100=2,044 ммоль/л.

Контрольные вопросы

1. Каков минеральный состав крови?

2. Приведите уравнения, характеризующие механизм действия основных буферных систем кровию

3. В каких случаях развиваются гипокальциемия и гиперкальциемия?

4. В чем отличие сыворотки от плазмы?

5. Укажите причины гипо- и гиперпротеинемий.

Билирубин обычными методами в нормальной моче не открывается, хотя и может находиться в ней в виде следов. Выделение билирубина с мочой повышается при гипербилирубинемии. В этих случаях качественные пробы на билирубин становятся положительными. Реакции на желчные пигменты основаны на получении окрашенных продуктов окисления билирубина: биливердина (зеленый), билицианина (синий), холетелина (желтый) и др.

В пробирку вносят 1 мл концентрированной азотной кислоты и осторожно из пипетки наслаивают мочу. Реакция называется «проба Гмелина». Она основана на окислении билирубина мочи под влиянием азотной кислоты с примесью азотистой в ряд окрашенных в разные цвета продуктов окисления. При наличии желчных пигментов на границе двух жидкостей появляются зеленое, синее, фиолетовое, красное и желтое кольца в указанной последовательности, что соответствует разным степеням окисления билирубина. Дальше всего от азотной кислоты располагается зеленое кольцо биливердина (наименее окисленный продукт), ближе всего к азотной кислоте — желтое кольцо холетелина (наиболее окисленный продукт).

Контрольные вопросы:

1. Приведите схему образования билирубина в организме.

2. Что такое «прямой» и «непрямой» билирубин?

3. Какие виды желтух приводят к гипербилирубинурии?

4. Как отличить механическую желтуху от гемолитической по анализу крови?

Дата добавления: 2015-03-29