Методы оценки гуморального иммунитета

Методы оценки клеточного иммунитета

1. Методы оценки Т-системы.

А. Количественная оценка.

Определение количества Т-лимфоцитов. Метод Е-розетко-образования (Е-РОК). Принцип метода: на первом этапе методом центрифугирования в градиенте плотности из крови выделяют лимфоциты. На втором этапе с помощью реакции розеткообразоаания с эритроцитами барана определяют процент Т-лимфоцитов от общего числа. Реакция розеткообразования основана на наличии на поверхности Т-лимфоцитов рецепторов, способных фиксировать эритроциты барана. Поэтому при добавлении к суспензии лимфоцитов эритроцитов барана последние адсорбируются Т-лимфоцитами. Образующиеся при этом структуры называются розетками. Розеткообразующей считается клетка, окруженная тремя и более эритроцитами. Общее количество лимфоцитов и количество розеток подсчитывают под микроскопом.

Б. Качественная (функциональная) оценка.

Б1. Оценка способности к пролиферации в реакции бласт-ной трансформации лимфоцитов. Принцип метода: Т-лимфоциты под воздействием некоторых биостимуляторов, например, фитогемагглютинина (ФГА) в культуре ю УЙГО способны превращаться в большие бластрпо-добные клетки с разрыхленным ядром и базофильной цитоплазмой, активно синтезирующие ДНК.

Б2, Определение количества Т-супрессоров, Т-хелперов и Т-киллеров в реакции иммунофлюоресценции (РИФ) и ИФА.

Принцип РИФ: лимфоцитарная взвесь обрабатывается моноклинальными антителами против отдельных субпопуляций Т-лимфоцитов, а затем — меченой флюорохромом антиглобу-линовой сывороткой. Подсчет флюоресцирующих клеток проводят под люминесцентным микроскопом (двухэтапная РИФ).

А. Количественная оценка. Определение количества В-лимфоцитов методом ЕАС-розеткообразования (ЕАС-РОК).

Принцип метода: аналогичен реакции розеткообразования для выявления Т-лимфоцитов, но вместо эритроцитов барана используются эритроциты быка (Е), нагруженные антителами (А) и комплементом (С). Взаимодействие обусловлено наличием у В-лимфоцитов рецепторов к комплементу.

Б. Качественная (функциональная) оценка. Определение концентрации иммуноглобулинов в реакции преципитации по Манчини.

Принцип метода: образцы исследуемой сыворотки помещают в лунки агарового геля, который содержит антитела против иммуноглобулина определенного класса. Иммуноглобулины, диффундирующие в агар, при взаимодействии с соответствующими антителами образуют кольца преципитата, диаметр которых пропорционален концентрации иммуноглобулинов соответствующего класса в исследуемой сыворотке. Концентрацию иммуноглобулина определяют по заранее построенному с помощью эталонных сывороток графику (калибровочной кривой).

Дата добавления: 2015-05-10