Методов генотипоскопии

ИСТОРИЯ ВОЗНИКНОВЕНИЯ И РАЗВИТИЯ

С ПРИМЕНЕНИЕМ МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИХ МЕТОДОВ

СУДЕБНО-МЕДИЦИНСКАЯ ЭКСПЕРТИЗА

Важное значение в расследовании преступлений, объективи­зации доказывания по уголовным делам имеют объекты биоло­гического происхождения. Все биологические объекты, проис­ходящие от человека,— кровь, сперма, фрагменты органов и тканей, волосы, ногти с подногтевым содержимым, слюна, потожировые наслоения, зубы, кости и т. д., являются предметом исследования судебно-медицинской экспертизы. Для этого ис­пользуются различные методы: серологический, цитологиче­ский, гистологический, биохимический, химико-токсикологи­ческий, физико-технический и др.

1985-й год вошел в историю судебной медицины как год по­явления принципиально нового — молекулярно-генетического метода, объектом исследования которого стала ранее не вхо­дившая в число традиционных биологических объектов моле­кула дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК).

Современный уровень знаний о молекулярной биологии и ДНК обусловлен теоретическими и экспериментальными дос­тижениями в фундаментальных областях науки — классической генетике, биохимии и других. ДНК — сложное химическое со­единение, давно была открыта в ядре клетки, но ее функция как хранителя наследственной информации оставалась неизвест­ной. И только в 1953 г., когда Уотсон и Крик постулировали двухспиральную структуру и предложили ее трехмерную мо­дель, появилась и стала бурно развиваться новая самостоятель­ная наука — молекулярная биология. С ее возникновением поя­вились способы познания природы на субмолекулярном уров­не.

Молекула ДНК является хранителем наследственной генети­ческой информации человека. По внешнему виду — это тон­чайшая цепочка, звеньями которой являются химические веще­ства — нуклеотиды. Их всего четыре типа: аденин, гуанин, ти-мин и цитозин. Таких звеньев (нуклеотидов), образующих одну молекулу ДНК,— 3 х 10⁹. Зная размер одного нуклеотида, уста­новили, что общая длина ДНК в ядре клетки около двух мет­ров. И все многообразие живущих на Земле видов живых су­ществ и их индивидуальные отличия внутри каждого вида обу­словлены бесчисленным множеством комбинаций этих нуклео­тидов.

В начале 80-х годов в молекуле ДНК человека были обнару­жены участки, обладающие структурным полиморфизмом, т. е. у каждого человека по своему строению они уникальны. Такие участки были названы вариабельными тандемными повторами (ВТП). В 1985 г. генетиком Лестерского университета (Англия) А. Джеффрисом разработан метод генной идентификации лич­ности, в последствии названный ДНК-фингерпринтом (от англ. fingerprint — отпечаток пальца) или генной дактилоскопией (в настоящее время чаще употребляют термин “генотипоскопия”). Но, в отличие от отпечатка пальца в криминалистическом по­нятии, метод ДНК-фингерпринта позволяет не только иденти­фицировать личность. Джеффрис обратил внимание на свойст­ва ВТП, которые позволили шире использовать эти участки ДНК в судебной медицине: прямое наследование ВТП от роди­телей к детям используется для установления кровного родства; соматическая стабильность (абсолютное тождество ВТП во всех клетках у одного и того же человека) используется при установлении принадлежности частей тела одному или не­скольким трупам; наличие у мужчин и женщин половых Х- и У-хромосом позволяет установить генетический пол биологи­ческих объектов; уникальность ВТП используется для иденти­фикации личности, т. к. практически невозможно встретить двух человек (кроме монозиготных (однояйцевых) близнецов), имеющих одинаковую структуру молекулы ДНК. Подсчитано, что метод позволяет выделить одного человека из 100 милли­ардов. Благодаря своей точности метод сразу приобрел сенса­ционный успех, поэтому быстро был внедрен в судебно-медицинскую практику. Уже в 1987 г. британский суд впервые принял генетическую экспертизу в качестве доказательства при установлении спорного отцовства. В том же году рассматрива­лось уголовное дело об изнасиловании и убийстве двух деву­шек, где экспертом выступал сам А. Джеффрис. В 1988 г. в США (штат Колорадо) был принят закон о ДНК-тестировании рецидивистов и сексуальных маньяков перед освобождением из тюрьмы.

В нашей стране развитие этого метода началось с 1988 г. на базе НИИ молекулярной биологии в Москве. Большой вклад в эту работу внесли российские ученые А. Б. Рысков, А. Г. Джин-чарадзе, П. Л. Иванов, С. А. Лимбарский, М. И. Просняк. Пер­вая экспертиза по уголовному делу с применением данного ме­тода была проведена в 1989 г.

В 1990 г. метод был внедрен в практику Бюро судебно-меди-цинской экспертизы Ленинграда. Почти одновременно подоб­ные работы были начаты в Новосибирске, Вильнюсе, Минске.

В настоящее время целый ряд лабораторий различных ре-гионов России, часть которых не входит в состав судебно-ме-дицинских учреждений, применяют молекулярно-генетические методы исследования в целях судебной медицины (лаборато-рия при Республиканском центре судебно-медицинской экспер­тизы, Экспертно-криминалистический центр МВД РФ, Волго­градский ветеринарный институт и др.).

Метод генотипоскопии, как и все другие методы, применяемые в судебной медицине, имеет недостатки. Однако многие проблемы были решены после появления способа исследования ДНК, основанного на применении полимеразной цепной реак­ции (ПЦР).

Способ ПЦР предложил сотрудник химической корпорации “Цетус” (США) К. Мюллис. Идея и ее воплощение на первый взгляд просты. Основа метода в том, что в микропробирках, используя специальные реагенты и аппараты — программи­руемые термоциклеры, можно получить миллионы копий инте­ресующих участков ДНК. ПЦР позволяет использовать в каче­стве стартовой матрицы ничтожно малое количество ДНК, причем с высокой степенью деградации, т. е. нарушением структуры.

В нашей практике были получены результаты при работе с пятнами крови и спермы диаметром 2—4 мм и несколькими волосяными луковицами. Более крупные пятна крови имели давность 2,5 года, пятна спермы — около 4-х лет.

При исследовании тампонов с содержимым влагалища ДНК получают, используя методику дифференциального лизиса кле­ток. Это позволяет отделить ДНК спермы от ДНК сопутст­вующих клеток женского происхождения и избежать возмож­ной ошибки.

Способ ПЦР реализуется в три этапа: получение ДНК из биообъектов, собственно ПЦР и анализ продуктов реакции с помогаю электрофореза.

В нашей практике длительность экспертизы составляет в среднем 2—4 недели. Однако использование зарубежных экс-пресс-систем для получения ДНК, наличие достаточного парка термоциклеров и мощных комплексов для электрофореза с компьютерной обработкой результатов позволит в будущем выполнить экспертизу за 3—5 дней.

Ранее типирование ДНК проводилось способом гибридиза­ции, включающим в себя более десяти этапов, в том числе и радиоактивные работы с короткоживущими изотопами. При этом каждый этап длился сутки и более. Поэтому сроки исследования затягивались на 1 — 1,5 месяца. В настоящее время этот трудоемкий, сложный и вредный для здоровья способ исполь­зуется редко.

Дата добавления: 2015-06-04