Лабораторная диагностика хламидиозов

Хламидиозы - разнообразные по патогенезу и клиническим проявлениям распространенные заболевания человека и животных. Хламидии - грамотрицательные бактерии с облигатным внутриклеточным паразитизмом. Биологическое своеобразие хламидий, выражающееся в энергозависимом паразитизме и уникальном цикле развития, определяет самостоятельное положение этих микроорганизмов в системе прокариотов. Хламидии выделены в отдельный порядок Chlamydiales, включающий одно семейство Chlamydiaceae, содержащее один род Chlamydia, состоящий из 3 видов: C.trachomatis, C.psittaci, С. pneumoniae.

Хламидии имеют две стадии жизненного цикла: одна - инфекционная стадия элементарного тельца (ЭТ), она приспособлена к внеклеточному существованию; другая - ретикулярное тельце (РТ) - внутриклеточная практически неинфекционная стадия, лабильна, обладает выраженной метаболической активностью. ЭТ имеют размеры 0,3 мкм, содержат нуклеоид, в клеточной стенке имеется длой - аналог пептидогликана грам-бактерий. Форма проникает в клетку при фагоцитозе. Из поверхностных мембран клетки хозяина вокруг ЭТ образуется вакуоль и ЭТ превращается в крупное ретикулярное тельце (РТ) - диаметр 0,5-1 мкм. Внутри образованной вакуоли РТ многократно делится. В конечном счете, вакуоль через 8-12 циклов деления заполняется этими частицами и превращается во включение (микроколонию). На последней генерации РТ образуются ЭТ нового поколения. Затем мембрана, ограничивающая микроколонию, повреждается и хламидий выходят в цитоплазму и далее за пределы клетки. Помимо ЭТ и РТ имеются промежуточные или переходные формы хламидий, которые образуются на двух стадиях цикла развития, на ранней при преобразовании ЭТ в РТ и на поздней - РТ в ЭТ, а также аномальные формы.

Хламидии чувствительны к антибиотикам тетрациклинового ряда,

макролидам (эритромицин, рифампицин).

Хламидии имеют сложную антигенную структуру. Выделяют три основных антигенных комплекса. Родоспецифический термостабильный, липополисахаридный комплекс, характерный для представителей рода, видоспецифические и типоспецифические термолабильные белковые фракции. Видоспецифический антиген определяет принадлежность штаммов к соответствующему виду. Типоспецифические антигены позволяют дифференцировать различные серовары (серотипы) хламидии внутри вида.

Вид C.psittacci Объединяет возбудителей болезней птиц: орнитоз и пситаккоз (инфицировано до 140 видов птиц) и некоторых млекопитающих

(экзогенные аборты, пневмонии и др.). Возбудитель передается человеку

от птиц и животных, вызывает разнообразную форму патологии (поражения

легких, заболевания нервной системы, гепатолиенальный синдром). Среди

генерализованных форм летальность достигает 20%.

Вид C.trachomatis. Имеет наибольшую социально-медицинскую значимость.

Он весьма неоднороден и представлен 15 серотипами, относящимися к 3

биоварам. Вызывает антропонозные хламидиозы.

Биовар1 - возбудитель трахомы, известной с древности. Это хронический

кератоконьюнктивит, протекающий с воспалением коньюнктивы и роговицы,

образованием рубцов и слепотой. До настоящего времени в ряде стран

трахома интенсивно распространена. На территории бывшего СССР

ликвидирована в 60-е годы. В мире поражено трахомой 400 млн человек.

Биовар 2 - возбудитель венерической лимфогранулемы. Заболевание

передается половым путем. Развивается гнойный паховый лимфаденит.

Активно циркулирует в Юго-Восточной Азии. Выделяется и у нас (завозные

случаи).

Биовар 3 - возбудитель урогенитальных и экстрагенитальных хламидиозов:

пневмоний новорожденных и младенцев, коньюнктивитов у новорожденных,

коньюнктивитов у взрослых (так называемых "бассейновых").

Проблема заболеваний мочеполовых органов, вызываемых C.trachomatis,

за последние десятилетия приобрела чрезвычайно важное значение, что

связано с широким распространением данного вида инфекции и

значительным числом развивающихся после нее осложнений.

Вид C.pneumoniae. Еще недостаточно изучен. Вызывает острую инфекцию

верхних и нижних отделов дыхательного тракта, передающуюся от человека

к человеку.

Бактериоскопический метод исследования: выявление хламидии, их

морфологических структур и антигенов в пораженных клетках (клиническом

материале).

Материал для исследования: соскобные препараты с доступных

исследованию слизистых оболочек мочеполового тракта (уретра, шейка

матки и т.п.) и других органов (конъюнктива, прямая кишка и пр.) при

экстрагенитальных формах.

Из материала готовят мазки, которые окрашивают по Романовскому-Гимзе.

Цитоплазматические включения хламидии (тельца Гальберштедтера-

Провачека) содержат крупные ретикулярные тельца или мелкие

элементарные тельца. По цвету и внутренней структуре РТ и ЭТ отличаются

от ядра клетки и цитоплазмы. Метод характеризуется сравнительно низкой

чувствительностью, позволяет диагностировать 10-20% случаев

урогенитальной инфекции; при хламидийной патологии глаз его

чувствительность составляет 90-100%.

Применение люминисцирующих поликлональных и моноклональных антител

для выявления антигенов хламидии в цитоплазматических включениях в

соскобных препаратах урогенитального тракта значительно увеличивает

чувствительность и специфичность метода. Используется как прямой, так и

непрямой иммунофлюоресцентный метод. При люминесцентной

микроскопии антигены хламидии выявляют на красном или оранжевом фоне

(при контрастировании синькой Эванса или родамином) цитоплазмы

эпителиальных клеток в виде внутриклеточных включений ярко-зеленого

цвета. По информативности и чувствительности уступает только

бактериологическому методу.

При диагностике орнитоза и других зоонозных хламидиозов

бактериоскопический метод не применяется.

Бактериологический метод исследования: выделение хламидии из

инфекционного материала проводится заражением куриных эмбрионов,

лабораторных животных или клеточных культур с последующей индикацией

возбудителя.

Материал для исследования: - тот же, что и при бактериоскопии. При орнитозе

- кровь или мокрота. Кровь из вены (не менее 5 мл) исследуют в первые 7-10

дней заболевания, мокроту - до 14 дня заболевания. Для удаления

сопутствующей микрофлоры добавляют антибиотики, не действующие на

хламидии. (стрептомицин, нистатин, гентамицин). При заражении куриного

эмбриона исследуемый материал вводят в желточный мешок 6-7-суточного

развивающегося эмбриона.

Индикацию хламидии проводят через 48-72 часа на основании обнаружения

типичных цитоплазматических включений, содержащих элементарные и

ретикулярные тельца (мазки-отпечатки из желточных мешков куриных

эмбрионов и (или) оценка зараженных клеток - окраска по Маккиавелло,

прямая и непрямая РИФ).

При диагностике орнитоза кроме культур клеток можно заражать

пибораторных животных (в мозг или внутрибрюшинно).

Серологический метод исследования: антитела выявляют в сыворотке крови, которую исследуют 2-3 раза с интервалом 10-14 дней, и секретах половых органов. Для диагностики используют РСК, РПГА, РИФ, ИФА. При урогенитальных хламидиозах диагностически значимыми в РИФ являются титры 1:32-1:64. Наиболее достоверным является нарастание титра антител в четыре и более раза.

Аллергологический метод исследования: постановка кожно-аллергических проб. Используется при диагностике орнитоза с орнитозным аллергеном. Внутрикожная проба становится положительной с первых дней заболевания у 87-95% больных, сохраняясь до года и более.

Дата добавления: 2015-07-02