Приготовление фиксированных и окрашенных препаратов бактерий

На лабораторных занятиях бакалавры получают пробирки или чашки Петри с культурами бактерий, выращенных на соответствующих питательных средах. При приготовлении препарата необходимо соблюдать определенные правила. Материал из пробирки или чашки с поверхности агаровой среды берут бактериологической петлей, предварительно обожженной в пламени горелки. В ходе дальнейшей работы петлю прокаливают до красного каления перед каждым очередным пассажем и после него (взятие из пробирки капли воды, нанесение ее на стекло, снятие культуры с питальной среды, распределение по поверхности стекла и т.д.). После прокаливания петлю охлаждают на воздухе (держат 2-3 сек., ни к чему не прикасаясь), после чего приступают к выполнению очередного этапа.

Приготовление препарата состоит из следующих операций:

1. Приготовление мазка. На обезжиренное предметное стекло из жидкой среды наносят прокаленной и охлажденной петле каплю исследуемой культуры бактерий и равномерно распределяют ее по поверхности стекла тонким слоем. С твердой питательной среды культуру бактерий петлей вносят в каплю водопроводной воды и тщательно размазывают кругообразными движениями. Получается мазок.

2. Высушивание. Мазок подсушивают на воздухе в течение 1-2 мин.

3. Фиксация. Высушенный мазок фиксируют в пламени горелки. Фиксация имеет целью: убить клетки микробов, обеспечить их лучшее прилипание к стеклу и тем самым предохранить препарат от смывания, сделать мазок более восприимчивым к окраске, т.к. мертвые клетки лучше окрашиваются, чем живые.

Простейшим способом является фиксация пламенем. С этой целью предметное стекло с препаратом захватывают большим и указательным пальцами и проводят 3-4 раза через верхнюю часть пламени горелки.

Достаточность нагревания определяют путем прикладывания предметного стекла к руке. Если при этом ощущается легкое жжение, то препарат можно считать фиксированным.

4. Окрашивание. Фиксированный препарат через полоску фильтровальной бумаги обливается раствором краски (например, фуксина) с выдержкой 1,5-2 мин.

5. Промывание. Через 1,5-2 мин. Полоску снимают и препарат с боковой стороны стекла промывают легкой струей водопроводной воды. При этом смывается излишек краски, но сохраняется краситель адсорбированный клетками бактерий. В правильно окрашенном и хорошо промытом препарате поле зрения остается светлым и чистым, окрашенными оказываются только клетки бактерий.

6. Высушивание. Препарат обсушивают досуха с площадью полосок фильтровальной бумаги.

7. Микроскопирование. На сухой мазок наносят каплю иммерсионного масла изучают препарат с помощью объектива 90х.

Дата добавления: 2015-06-27