Лабораторна робота № 20 Кількісне визначення вмісту білків за нінгідриновим методом

Розділ 4. Використання фізико-хімічних методів в аналізі біооб’єктів

Контрольні питання.

Результати изначення заліза(III) сульфосаліцнловою кислотою

№	Стандартний р-н Fe^3+, мг	Вміст заліза, мг	ΔА	ΔА, контрольний р-н	m Fe^3+, мг
	2,5	0,25	А1/А3=
	5,0	0,5	А2/А3=
	7,5	0,75	А3/А3=	Ах/А3=
	10,0	1,0	А4/А3=
	12,5	1,25	А5/А3=
	15,0	1,5	А6/А3=

1. Опишіть оптимальні умови фотометричного визначення заліза у вигляді роданідного та сульфосаліцилового комплексу.

2. Яким чином підібрати світлофільтр для фотометричного визначення?

3. Які фактори впливають на величину молярного коефіцієнта поглинання?

4. Чому молярний коефіцієнт поглинання є найбільш об’єктивною характеристикою чутливості фотометричного методу?

Необхідні прилади і реактиви:

1.Фотоколориметр і кювети;

2.Мірні колби місткістю 25мл - 2 шт.;

3.Стандартний розчин гліцину, що містить 50мг гліцину у 1 мл;

4. 0,1% р-н нінгідрину в 95% ацетоні.

Принцип методу. В результаті взаємодії α-амінокислот з нінгідрином (трикетогідрінденом) утворюється забарвлена комплексна сполука. При нагріванні до 70○С α-амінокислоти окислюються нінгідрином та вступають в реакції окисного дезамінування з утворенням аміаку, диоксиду вуглецю та альдегіду, а нінгідрин відновлюється.

Відновлений нінгідрин, конденсується з аміаком та окисненим нінгідрином, утворюючи єнольну сполуку, що має синьо-фіолетове забарвлення.

В присутності органічних розчинників (ацетон, етиловий спирт) можливе протікання побічного процесу з утворенням сполуки, що має в своєму складі радикал амінокислоти, і забарвлена вона у червоний, жовтий, голубий колір. Гліцин з нінгідрином має синьо-фіолетове забарвлення.

Хід роботи. В одну колбу на 25 мл вносять 20 розчину гліцину з концентрацією 50 мг/мл, доводять до мітки дистильованою водою, отримують стандартний розчин порівняння. В другу колбу вносять досліджуваний розчин з невідомим вмістом гліцину. В обидві колби додають по 10-15 крапель розчину нінгідрину, перемішують, нагрівають на протязі 5 хвилин при 70⁰С, охолоджують доводять до риски дистильованою водою і через 30 хв спостерігають екстинкцію за допомогою фотоколориметру у кюветі з товщиною 10 мм при червоному світлофільтрі (750 нм). Як розчин порівняння використовують дистильовану воду. Потім проводять визначення оптичної густини в задачі. Знаходять невідому концентрацію гліцину в задачі за формулою:

Дата добавления: 2015-06-28