Реєстрація результатів

Постановка аналізу.

Був складений протокол маркірування лунок:

А1 А2 – № 1 – для вимірювання величини оптичної щільності ТМБ;

В1 В2 – № 2 – для виміру величини оптичної щільності КП №1;

С1 С2 – № 3 – для виміру величини оптичної щільності КП №2;

D1 D2 – № 4 – для виміру величини оптичної щільності КП №3;

Е1 Е2 – № 5 – для виміру величини оптичної щільності КП №4;

F1 F2 – № 6 – для виміру величини оптичної щільності КП №5;

G1 G2 – № 7 – для виміру величини оптичної щільності КП №6;

H1 H2 – № 8 – для виміру величини оптичної щільності контрольної сироватки.

У відповідні лунки додали по 50 мл калібрувальних проб, контрольної сироватки, у лунки, що залишилися додли по 50 мкл досліджуваної сироватки крові у дублікатах.

Загальний час внесення калібрувальних проб, контрольної сироватки та досліджуваних сироваток крові не перевищував 15 хвилин (згідно методики), щоб час інкубації різних зразків не відрізнятися, що могло б призвести до невірних результатів.

В усі лунки, окрім лунок А1 та А2, додали по 150 мкл кон’югантів.

Стрипи інкубуювалися впродовж 60 хвилин при стряхувані у термостійкому шейкері при температурі +37°С зі швидкістю 500–800 об/хв.

По закінченню інкубації зміст лунок був видалений у контейнер з дезінфікуючим розчином (1% розчином гіпохлориту натрію або 6% розчин перекису водню), лунки були промиті чотири рази. При кожній промивці в усі лунки додавалося по 300 мкл промивного розчину, потім рамка була стряхнена на шейкері впродовж 5–10 сек з наступним декантируванням. Після останнього декантирування були ретельно видалені залишки рідини з лунок постукуванням рамки зі стрипами у перегорнутому стані по фільтрувальному паперу.

Потім було негайно додано в усі лунки по 100 мкл розчину ТМБ. Стрипи інкубувалися у темряві при кімнатній температурі (+18…25°С) впродовж 15–30 хвилин в залежності від ступеню розвитку забарвлення або 10 хвилин у термостатуємо у шейкері при температурі +37°С зі швидкістю 500–800 об/хв.

В усі лунки з тією ж швидкістю і в тій же послідовності, як і розчин ТМБ, додали по 100 мкл стоп-реагенту для зупинки ферментної реакції, перемішали у шейкері впродовж 1–2 хвилин при кімнатній температурі.

Забарвлення у лунках планшету стабільне не більше, ніж 20 хвилин при кімнатній температурі.

Оптична щільність у лунках була заміряна на фотометрі вертикального сканування при довжині хвилі 450 нм.

При реєструванні результатів було віднято величину оптичної щільності у лунках А1 та А2 зі значення оптичних щільностей усіх інших лунок.

Середнє арифметичне значення оптичної щільності у лунках А1 та А2 не повинне перевищувати 0,09 од. ОЩ.

Облік результатів виконувався шляхом побуви калібрувального графіку залежності оптичних щільностей від концентрації кортизолу (нмоль/л) у калібрувальних пробах.

Референтні величини 200–700 нмоль/л.

Дата добавления: 2015-08-31