Метод виявлення пептидів середньої молекулярної маси у сироватці крові

Метод виявлення циркулюючих імунних комплексів у сироватці крові

Формування циркулюючих імунних комплексів (ЦІК) антиген-антитіло є динамічним процесом, постійно протікаючим в організмі. Усі екзо- та ендогенні антигени, які взаємодіють з рецепторами імунокомпетентних клітин і викликають синтез антитіл, є індукторами освіти ЦІК. Антитіла продукуються в організмі для нейтралізації і виведення антигенів, тому в кровотворних руслі постійно присутній широкий спектр ЦІК з різними структурними та біологічними властивостями. У зв'язку з тим, що до складу ЦІК входять Ig і фракції комплементу, вони можуть через Fc- і С3b-рецептори викликати антігенспеціфіческую і антігеннеспеціфіческую супрессию В-лімфоцитів, здійснювати блокаду клітин-ефекторів, міняти Т-супресорну активність лімфоцитів, пригнічувати Т-В - взаємодію, впливати на фагоцитарну активність більшості клітин фагоцитарного ряду.

Метод заснований на селективної преципітації комплексів антиген-антитіло в поліетиленгліколь (ПЕГ) з наступним фотометричним визначенням щільності преципітату. Визначали кількість циркулюючих імунних комплексів антиген-антитіло в сироватці крові.

Для визначення кількості циркулюючих імунних комплексів (ЦІК) у дві хімічні пробірки вносили по 100 мкл сироватки крові, потім в обидві пробірки додавали по 200 мкл.0,1М боратного буфера з рН = 8,4. У контрольну пробу вносили 2,7 мл.0,1М боратного буфера з рН = 8,4, а в дослідну пробірку – 2,7 мл. 3,75% розчину ПЕГ з молекулярною масою 6000. Інкубували проби протягом години при кімнатній температурі.

Оптична щільність визначалась на контрольних та дослідних зразках на спектрофотометрі при λ = 450 нм, проти боратного буфера.

Референтні величини: ЦВК = 50-100 ум. од.

До пептидів середньої молекулярної маси (ПСММ) відносяться фізіологічні пептидні компоненти біологічних рідин з молекулярною масою 300–5000 дальтон, що володіють вираженою біологічною активністю (інгібування ферментних систем, порушення іонної проникності біомембран). Пул ПСММ включає в себе крім продуктів катаболізму білків похідні олігоспіртів і глюкуронової кислоти, продукти обміну гормонів і ліпідів. ПСММ – вторинні ендогенні токсини пептидної природи, поява яких пов'язана з активацією протеолітичних ферментів в крові і порушення екскреторної функції нирок.

Визначення пептидів середньої молекулярної маси в рідких середовищах організму дозволяє оцінювати ступінь ендогенної інтоксикації, а також контролювати ефективність детоксикаційних процедур.

Метод заснований на обробці сироватки крові розчином трихлороцтової кислоти (ТХО), освітлення досягається шляхом центрифугування, детекцію надосадка, звільненого від грубодисперсних білків, здійснюють після попереднього розведення дистильованою водою спектрофотометріруванням. За величиною оптичної щільності судять про зміст пептидів середньої молекулярної маси.

Для визначення пептидів середньої молекулярної маси в центрифужну пробірку вносили 300 мкл. сироватки крові і додали 150 мкл 10% ТХО. Потім центріфугіували впродовж 30 хв при швидкості 3000 об/ хв.

Потім у хімічну пробірку було знято 200 мкл надосадової рідини і додали 1,8 мл. дистильованої води.

Оптична щільність зразків на спектрофотометрі при була виміряна при λ = 254 нм щодо дистильованої води.

Референтні значення: від 0,240 до 0,280 ум. од.

Дата добавления: 2015-08-31