Различают физические и химические методы фиксации

Физический способ фиксации: предметное стекло с препаратом мазком к верху плавным движением проводят 2-3 раза над верхней частью пламени горелки.

Химический способ: на высушенный мазок капают (или опускают мазок в стакан)

1. безводный метиловый спирт на 5 минут

2. этиловый спирт, либо жидкость Никифорова, либо жидкость Карнуа на 10-15 минут

3. ацетон на 5 минут

Техника простого метода окраски:

Фиксированный препарат помещают мазком вверх на подставку. На мазок пипеткой наносят раствор красителя (синь Леффлера на 3-5 минут или раствор фуксина на 1-2 минуты) так, чтобы он весь был покрыт красителем.

После окраски краситель сливают, препарат промывают водой и высушивают между листами фильтровальной бумаги. На высушенный мазок капают каплю иммерсионного масла и микроскопируют. Простые методы окраски являются ориентировочными в то время как сложные (дифференциальные) методы позволяют выявить физико-химические особенности микробной клетки. В отличие от простых методов при сложных методах окраски используется для окрашивания нескольких красителей и обесцвечивающие вещества.

Окраска по Граму (классический вариант)

Метод окраски по Граму является самым универсальным из сложных методов окраски. Отношение к окраске по Граму является важным опознавательным признаком бактерий. Микроорганизмы, входящие в группу грамположительных, имеют многослойную клеточную стенку с большим содержанием пептидогликана и образуют прочное соединение его и основных красителей (генцианвиолета и раствора Люголя), которое не обесцвечивается при воздействии на них спирта. Вследствие чего при дополнительном окрашивании фуксином грамположительные микроорганизмы не изменяют первоначально принятый фиолетовый цвет. Грамотрицательные микроорганизмы, имеющие в клеточной стенке меньше пептидогликана, образуют с генцианвиолетом и Люголем не прочный комплекс, легко разрушающийся под воздействием спирта, в результате чего они обесцвечиваются и затем окрашиваются фуксином, приобретая розовый цвет.

Методика окраски по Граму:

1. На фиксированный мазок кладут фильтровальную бумагу и наносят каплю генцианового фиолетового на 1-2 минуты.

2. Снимают фильтровальную бумагу, не промывая водой, наносят раствор Люголя до почернения на 1-2 минуты, затем сливают краситель.

3. Не промывая водой, наносят 96% спирт на 30 секунд-1 минуту.

4. Промывают препарат водой.

5. Докрашивают фуксином Пфейффера в течение 1- 3 минут.

6. Промывают водой и высушивают между листами фильтровальной бумаги.

Задание на дом: учебник С.А. Павлович «Медицинская микробиология»

Мн. 1997 стр. 26-34, повторить стр. 9-23

Дата добавления: 2014-01-04