Лабораторно- практическое занятие № 5

Тема: Методы стерилизации.

Цель работы: Ознакомить студентов с основными методами стерилизации.

Стерилизация, или обеспложивание (от лат. sterilis — бес­плодный), — это полное уничтожение клеток микроорганиз­мов в питательных средах, посуде и пр. Известно несколько методов стерилизации. Чаше всего применяют стерилизацию нагреванием.

Фламбирование, или прокаливание. Прокаливать можно непосредственно перед употреблением платиновые петли, иглы, шпатели, мелкие металлические предметы (ножницы, ланцеты, пинцеты), а также стеклянные палочки, предметные, покровные стекла и т. д.

Стерилизация сухим жаром. Ее применяют для обработки посуды и сухих материалов, на­пример крахмала, мела. При этом стерилизуемый объект выдерживают при 170 °С в течение 2 ч (считая с того момента, как установлена необходимая температура) в печи Пастера (рис. 8, а) или в электросушильных шкафах. Поднимать температуру выше 170 °С не рекомендуется: ватные пробки и бумага начинают разрушаться (буреют, становятся ломкими).Перед стерилизацией стеклянную посуду закрывают ват­ными пробками и обертывают бумагой. Чашки, пробирки, пи­петки, вату, марлю заворачивают в бумагу или помещают в особые футляры и пеналы, в которых стерильная посуда может храниться после стерилизации.По окончании стерилизации шкаф открывают только после того, как температура снизится до комнатной, иначе стекло может лопнуть.

Стерилизация текучим паром. Текучим паром (100 °С) обрабатывают предметы, портящиеся от сухого жара, и некоторые питательные среды, не выдержи­вающие более высокой температуры (среды с углеводами, МПЖ, молоко). Проводят стерилизацию в кипятильнике Коха (рис. 8, б) по 30 мин в течение 3 суток ежедневно. Такая стерилизация называется дробной.

Кипятильник Коха — высокий металлический цилиндр с двойным дном, свободно закрывающийся конусообразной крышкой с отверстием для термометра. Снаружи цилиндр покрыт асбестом или линолеумом. На дно кипятильника налива­ми воду, устанавливают подставку с отверстиями для прохождения пара, на которую помешают стерилизуемые предметы. Продолжительность стерилизации отсчитывают с момента интенсивного выхода пара из-под крышки и повышения температуры до 100° С.

Рис. 3 -Оборудование для стерилизации: а – печь Пастера; б – кипятильник Коха

При однократном прогреве при температуре 100 ° С в тече­ние 30 мин погибают вегетативные клетки, споры же многих микроорганизмов остаются жизнеспособными. После такого прогрева среду помещают на 24 ч в термостат при 28—30 ° С. Споры, сохранившиеся при первом нагревании, успевают за это время прорасти в вегетативные формы, которые погибают при последующем нагревании. Затем эту операцию повторяют еще 2 раза.

Стерилизация насыщенным паром под давлением. Это наиболее быстрый и надежный способ стерилизации, при котором гибнут самые устойчивые споры. С его помощью сте­рилизуют большинство питательных сред, посуду.Обработку насыщенным паром проводят в герметически закрывающемся толстостенном котле — автоклаве.

Рисунок- 4. Схема автоклава:

1 - воронка, через которую автоклав заправляют водой

2 - предохранительный клапан;

3 - манометр;

4 - крышка автоклава;

5 - водопаровая камера;

6 - кран для выпуска воздуха;

7 - отверстие, через которое пар поступает

в стерилизационную камеру;

8 - стерилизационная камера;

9 -подставка для размещения стери­лизуемых материалов.

На массивной крышке или сбоку котла находятся кран для выхода пара, манометр и предохранительный клапан. Манометр показывает, насколько давление пара внутри котла выше нормального. Для предотвращения взрыва при превышении предель­ного давления срабатывает предохранительный клапан, давая вы­ход пару.

Надежной стерилизации достигают нагреванием при 120 °С и давлении 1 атм в течение 20 мин. Стерилизацию ведут следующим образом. Наливают воду в автоклав, помешают в него стерилизуемые предметы, завин­чивают крышку автоклава и начинают подогрев. Кран оставля­ют открытым до тех пор, пока весь воздух, находящийся в ав­токлаве, не будет вытеснен парами воды. Когда пар начнет вы­ходить из крана непрерывной струей, кран закрывают, доводят давление пара в автоклаве до 1 атм и поддерживают на этом уровне 20—30 мин. Затем нагрев прекращают, ждут, пока стрелка манометра опустится до 0, осторожно (понемногу) от­крывают кран и спускают пар. Только потом отвинчивают крышку автоклава. Если кран открыть раньше, чем упадет дав­ление, то жидкость в стерилизуемых сосудах закипит и вы­толкнет из них пробки. Для контроля за работой автоклавов среди стерилизуе­мых предметов можно закладывать специальные тесты-ампу­лы, содержащие химические вещества, которые плавятся при определенной температуре. Так, температура плавления бензо­нафтола 110 °С, антипирина — 113 °С. Автоклав используют и для дробной стерилизации теку­чим паром. В этом случае крышку не завинчивают, чтобы обеспечить свободный выход пару.

Пастеризация. Пастеризация представляет собой неполную, или частичную, стерилизацию, что означает нагревание при 65—80 °С в течение сответственно 30—10 мин с последующим быстрым охлаждением до 10—11 °С. Прием был предложе Л. Пастером для уничтожения неспорообразующих бактерий в продуктах, чьи свойства ухудшаются при кипячении (молоко, пиво, вино и др.).

Холодная стерилизация — фильтрование через мелкопористые фильтры. Применяют для обработки сред, компоненты которых легко разлагаются при нагревании. Через мелкие поры фильтра мо­гут пройти только ультрамикроорганизмы (вирусы, бактериофаги).Наиболее часто используют фильтры из каолина (полые цилиндры, закрытые с одной стороны). Чтобы жидкость про­шла через такой фильтр, необходимо создать разницу давлений по обе стороны цилиндра. Этого достигают нагнетанием или откачиванием воздуха при помощи масляных насосов. Фильтр соединяют с приемником для жидкой среды, которым служит колба Бунзена. Оттянутый конец колбы закрывают ватной пробкой. Смонтированные фильтр с приемником стерилизуют.Среду для стерилизации наливают в сосуд, в который по­мешают фильтр, а колбу Бунзена с ватной пробкой соединяют с насосом (масляным или водоструйным) и выкачивают воз­дух. Поскольку внутри фильтра давление стало ниже, чем над его поверхностью, жидкость под давлением проходит через фильтр в приемник. Бактерии остаются с внешней стороны фильтра.Неудобства этого метода заключаются в медленной фильтрации и необходимости частой очистки фильтров.

Контрольные вопросы:

1. Значение методов стерилизации.

2. Каким образом стерилизуют лабораторную посуду?

3. Каким образом стерилизуют лабораторные инструменты?

4. Как нужно стерилизовать питательные среды?

5. Что называют стерилизацией насыщенным паром под давлением?

6. Отличия стерилизации в кипятильнике Коха?

7. Что стерилизуют методом пастеризации?

8. Что такое холодная стерилизация? Каким образом она осуществляется?

Дата добавления: 2014-01-04