Микробов рода Staphylococcus

Микробиологические методы идентификации

ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЙ МАТЕРИАЛ К ЗАНЯТИЮ

Целью идентификации является установление рода и вида выделенной чистой культуры. Род стафилококка относится к семейству Micrococcaceae, в которое входят также роды Micrococcus и Planococcus. Общими чертами представителей этого семейства являются: морфология, положительная окраска по Граму; наличие фермента – каталазы.

Род Staphylococcus состоит из нескольких видов, наиболее важными из которых являются S.аureus, S.epidermidis и S.saprophyticus. Представители последних двух видов являются коагулазоотрицательными и долгое время считались непатогенными. В настоящее время доказано, что эпидермальный стафилококк может вызвать такие заболевания, как эндокардит, сепсис, конъюнктивит, инфекция ран и мочевыводящих путей, послеродовые инфекции, а сапрофитический – острый уретрит, цистит и др. На первом этапе устанавливается принадлежность выделенной культуры к семейству Micrococcaceae и роду Staphylococcus. На принадлежность культуры к семейству микрококков указывает положительная проба на каталазу, так как другие кокки (в частности стрептококки), каталазу не образуют. Для установления принадлежности культуры к роду Staphylococcus основными методами являются культуральный и биохимический.

Культуральный метод. Основным отличием стафилококков от микрококков является окраска колоний на плотной среде. Для стафилококков характерна золотистая или белая окраска колоний. У микрококков колонии окрашены в желтый или розовый цвет.

Биохимический метод. Он основан на том, что стафилококки являются факультативными анаэробами, микрококки – облигатными аэробами. В связи с этим стафилококки способны расти и ферментировать глюкозу в анаэробных условиях, а микрококки лишены этой возможности. Для определения этого признака культуру засевают петлёй в столбик полужидкой среды, содержащей 1% глюкозы и индикатор на кислые продукты. Сверху среду заливают стерильным вазелиновым маслом и ставят в термостат при 37⁰С на 5 суток. Рост культуры и изменение цвета среды указывает на принадлежность её к роду Staphylococcus.

Видовая идентификация стафилококков. S.aureus отличается от других видов наличием золотистого или палевого пигмента (в большинстве случаев), наличием ферментов: плазмокоагулазы, лецитиназы (лецитовителлазы) и ДНК-азы. Плазмокоагулазу определяют путём посева культуры в цитратную кроличью плазму, после чего посевы помещают в термостат при 37⁰С и регистрируют результаты через 1, 2, 4, 6 и 18 часов. Появление на дне пробирки студнеобразного сгустка любого размера считается положительным результатом реакции. Лецитиназу определяют путём посева культуры на молочно-желточный солевой агар. В составе яичного желтка имеется лецитовителлин, а наличие молока стимулирует образование пигмента. Посевы выдерживают в термостате при 37⁰С 18-24 часа. О наличии лецитиназы свидетельствует образование вокруг колоний радужного венчика.

Определение ДНК-азы. Принцип метода: под действием ДНК-азы добавленная в плотную среду высокополимерная ДНК распадается на низкополимерные фрагменты. При этом мутная среда, содержащая высокополимерную ДНК, становится прозрачной. Ход исследования: на питательную среду в чашке Петри, включающую от 50 до 200 мг ДНК и 0,5 мл 10% раствора хлористого кальция, штрихами засевают исследуемую культуру и помещают в термостат при 37⁰С на 18-24 часа. После этого на поверхность агара заливают 5-7 мл 3 моль/л раствора соляной кислоты. Если через 2-3 минуты вокруг посевов появляются зоны просветления, то реакция считается положительной

Если культура имеет золотистый (палевый), пигмент, коагулирует плазму и обладает хотя бы одним из двух других ферментов (лецитиназа, ДНК–аза) – её относят к виду золотистого стафилококка. При отсутствии полного набора указанных признаков (основным является наличие плазмокоагулазы) проводят идентификацию видов эпидермального и сапрофитического стафилококков по трем основным признакам, отличающим эти два вида (см. таблицу).

Вид стафилококка	Устойчивость к новобиоцину	Фосфатаза	Ферментация маннита
эпидермальный	-	+	-
сапрофитический	+	-	+

Устойчивость к новобиоцину определяют путём посева культуры на среду, содержащую 2 мкг/мл новобиоцина. Ферментацию маннита проводят в аэробных условиях путём посева культуры бляшкой на поверхность среды в чашке Петри, содержащей 1% маннита и индикатор на кислые продукты. Появление окрашенных колоний (в цвет индикатора) указывает на способность культуры ферментировать маннит. Таким образом, для эпидермального стафилококка характерны:

- чувствительность к новобиоцину;

- наличие фосфатазы и неспособность окислять маннит.

Для сапрофитического стафилококка характерны противоположные свойства.

Выделенные культуры S.aureus обычно подвергают фаготипированию с международным набором фагов (22 фага). Определение фаготипа стафилококка помогает установить источник инфекции и принадлежность выделенной культуры к госпитальным штаммам.

Контрольные вопросы.

Стафилококки: морфология: форма, расположение особей, окраска по Граму. Токсины и ферменты. На каких средах культивируются? На какой среде изучаются гемолитические свойства? Виды стафилококка. По каким признакам можно отнести стафилококки к виду Staphylococcus aureus? Распространение стафилококков в окружающей среде. Заболевания, вызываемые стафилококками. Внутрибольничные инфекции. Характеристика госпитальных штаммов. Что исследуют при гнойных процессах? Какой материал исследуют при септических процессах? Как определяется чувствительность микроба к антибиотикам методом стандартных дисков? Перечислите препараты для специфической профилактики и терапии стафилококковых заболеваний. Что они собой представляют, какое действие оказывают? Стрептококки: морфология: форма, расположение особей, окраска по Граму. Классификация по гемолизу. Токсины. На каких средах культивируются? Стрептококковые заболевания. Какой материал надо взять на исследование при гнойных процессах, при сепсисе? Какие препараты применяют для лечения? Пневмококки: форма, особенности морфологии, окраска по Граму. Токсинообразование. На каких питательных средах растут? Какие заболевания вызывают? Какие препараты применяют для лечения? Менингококки: форма, расположение особей, окраска по Граму, типы менингококков, токсинообразование. На каких средах растут? При какой температуре погибают? Какие заболевания вызывают? Источник инфекции, основной путь передачи. Какие препараты применяются для лечения? Гонококки: форма, расположение, окраска по Граму, токсинообразование. На каких средах растут? При какой температуре погибают? Какие заболевания вызывают. Источник инфекции и пути передачи. Какие препараты применяются для лечения острой и хронической гонореи? Условно-патогенные микроорганизмы - возбудители гнойно-воспалительных болезней. Какие условно-патогенные микроорганизмы могут вызывать заболевания, при каких условиях?

Характеристика основных видов из группы грамотрицательных микроорганизмов. Синегнойная палочка: название по- латыни, морфология, культивирование, пигментообразование, основные факторы патогенности; группы больных, у которых чаще всего наблюдается синегнойная инфекция. Принципы лабораторной диагностики. Препараты для лечения и профилактики синегнойной инфекции. Протей: название по- латыни, морфология и физиология, особенности культуральных свойств. Принципы лабораторной диагностики. Препараты для лечения и профилактики протейной инфекции. Кишечные палочки: название по- латыни, морфология, культуральные свойства, факторы патогенности. Принципы лабораторной диагностики. Препараты для лечения и профилактики. Клебсиеллы: название по- латыни, морфология, культуральные свойства, факторы патогенности. Принципы лабораторной диагностики. Препараты для лечения и профилактики.

Задания для выполнения в процессе самоподготовки.

Напишите по-латыни название возбудителей: синегнойная палочка, протей, кишечная палочка, клебсиеллы.

Напишите по-латыни названия гноеродных кокков. Составьте таблицу: «Характеристика гноеродных кокков»

Название микроба	Морфология (форма расположение, споры, жгутики, капсула)	Окраска по Граму	Токсин	Заболевания	Препараты для лечения и профилактики

Работа студента на практическом занятии.

1. Промикроскопируйте и зарисуйте демонстрационные препараты:

- стафилококки в чистой культуре,

- стрептококки в чистой культуре,

- менингококки в спинномозговой жидкости (все препараты окрашены по Граму),

- гонококки в гное (окраска метиленовой синью),

- синегнойная палочка в чистой культуре,

- протей в чистой культуре.

Все препараты окрашены по Граму.

2. Разберите по таблицам принципы микробиологической диагностики гнойно-воспалительных заболеваний, вызываемых кокками.

3. Изучите культуральные свойства синегнойной палочки и протея на скошенном агаре и в чашках Петри с МПА. Обратите внимание на цвет пигмента синегнойной палочки и характер роста протея.

4. Разберите по таблицам принципы лабораторной диагностики инфекций, вызываемых грамотрицательными палочковидными микроорганизмами.

5. Охарактеризуйте препараты, предназначенные для диагностики, специфической профилактики и терапии данных инфекций.

Дата добавления: 2014-01-04