Техника приготовления мазков

Занятие 2

Микробиологическая лаборатория, оборудование, оснащение

Знать:

1. Задачи микробиологической лаборатории
2. Материал для микробиологических исследований
3. Набор помещений микробиологической лаборатории
4. Оснащение микробиологической лаборатории
5. Правила поведения и работы в микробиологической лаборатории
6. Характеристика микробов по степени опасности заражения

Уметь:

1. Пользоваться лабораторной посудой: пробирками, чашками Петри, бак.петлями, градуированными и пастеровскими пипетками, спиртовками, предметными стеклами.

Задачами микробиологической лаборатории являются:

1. Диагностика инфекционных заболеваний
2. Выявление носителей патогенных микробов
3. Исследование объектов внешней среды
4. Получение иммунобиологических препаратов

Для выполнения всех правил работы с заразным материалом и проведения исследований лаборатория должна иметь набор помещений: регистратуру, лабораторные комнаты, боксы, средоварочные, стерилизационные, моечные, комнаты отдыха, санузел. Лабораторные комнаты предназначены для проведения исследований. Они должны быть просторными и светлыми. Стены покрывают плиткой или покрывают масляной краской; пол покрывают линолеумом, столы — пластиком. Окна ориентированы на север или северо-восток. В комнатах должна быть подводка холодной и горячей воды.

Материалом для исследований чаще всего являются выделения человека: кровь, моча, мокрота, испражнения, гной, отделяемое ран и так далее. Кроме этого исследуют объекты внешней среды на содержание микробов, которые прямо или косвенно влияют на здоровье человека.

Оснащение микробиологической лаборатории:

1. Холодильник для хранения культур и сред.

2. Термостат, который служит для выращивания микробов на питательных средах

3. Суховоздушный шкаф предназначенный для стерилизации лабораторной посуды, ваты, бумаги и т. д.

4. Микроскопы, необходимые для изучения микробов в живом и окрашенном состоянии.

5. Бактерицидный облучатель для санации воздуха

6. Лабораторная посуда, наборы красок, лотки, бак.петли и т. д.

Правила поведения и работы в микробиологической лаборатории:

1. К работе допускают сотрудников только после ознакомления с правилами поведения и режимом работы.

2. Все работники подвергаются профилактическим прививкам

3. К работе допускаются лица не моложе 18 лет

4. Каждый сотрудник должен иметь халат, шапочку, сменную обувь, маску, резиновые перчатки.

5. В лабораторных комнатах запрещается курить, принимать пищу, громко разговаривать.

6. При попадании исследуемого материала на руки, халат, стол, другие объекты необходимо срочно провести дезинфекцию и сообщить вышестоящему лицу.

Режим работы в лабораториях зависит от степени опасности заражения для лиц, работающих с болезнетворными микробами. Микробы по степени опасности заражения ими разделены на группы:

1. Особо опасные - возбудитель чумы

2. Возбудители холеры, бруцеллеза, туляремии, сибирской язвы, сапа, лептоспироза

3. Возбудители брюшного тифа, дизентерии, туберкулеза, дифтерии, коклюша и т. д.

4. Сальмонеллы, протей, эшерихии, стафилококки, стрептококки, возбудители газовой гангрены и т. д.

С материалом, возможно зараженным возбудителями особо опасных инфекций (ООИ) работают в специальных лабораториях с разрешения органов здравоохранения РФ.

Методы микробиологического исследования:

1. Микроскопический

2. Бактериологический (культурный)

3. Серологический

4. Биологический

5. Аллергический

Правила работы с бактериологической петлей

1. Бак.петля состоит из петледержателя и самой бак.петли длинной 6-8 см.

2. В нерабочем состоянии простерилизованная бак.петля располагается в стаканчике (штативе) опираясь на петледержатель

3. Для работы бак.петлю берут за петледержатель, как писчее перо.

4. Стерилизуют бак.петлю в пламени горелки. Для этого собственно петлю под углом 45 градусов вводят в среднюю часть пламени, накаляют докрасна, затем для стерилизации ближнего участка к петле петледержателя, его проводят в пламени 2-3 раза.

5. Совершив необходимую манипуляцию бак.петлей (посев, пересев), её вновь стерилизуют указанным выше способом и возвращают на место, ставя петледержателем вниз.

Правила работы с чашками Петри

1. Чашка Петри предназначена для культивирования микробов на плотной питательной среде.

2. Чашка Петри состоит из крышки большего диаметра и донной части — меньшего диаметра. В донную часть вносится питательная среда

3. Хранятся чашки Петри донной частью вверх

4. При просмотре роста микробов, выросших на чашке Петри, её берут за боковые края крышки средним и указательным пальцами, указательным поддерживают донную часть. Поднимают чашку до уровня глаз, располагая на 15-20 см от глаз, донная часть чашки обращена к лицу. Таким образом, просматривают выросшие колонии в проходящем свете.

Правила работы с пробирками

1. В лабораторных пробирках происходит рост микроорганизмов на плотных или жидких средах.

2. Пробирки должны хорошо закрываться ватно-марлевыми пробками. Часть пробки должна войти в отверстие пробирки, а другая — возвышаться над пробиркой так, чтобы её удобно было захватить левой рукой, зажав между ладонной поверхностью и мизинцем.

3. Пробирки держат в левой руке, располагая между большим и указательным пальцем так, чтобы содержимое пробирки было хорошо видно.

Работа с градуированными и пастеровскими пипетками

1. Данные пипетки в работе используются стерильными, завернутыми в бумагу

2. Градуированную пипетку берут посередине одной рукой. Другой в этом месте надрывают бумагу и стягивают её с пипетки в противоположные стороны. Затем берут пипетку ближе к концу, но не дотрагиваясь до «ротовой» части пипетки и перед работой дополнительно стерилизуют, проведя 2-3 раза в пламени горелки.

3. Пастеровские пипетки и шпатели перед работой извлекают из бумаги, а которой они стерилизовались и дополнительно стерилизуют в пламени горелки.

Работа с предметными стеклами

1. Предметные стекла предназначены для приготовления мазков.

2. Подготовленные стекла хранятся в банке со смесью Никифорова.

3. Перед работой стекло извлекается пинцетом из банки и кладется на спец. мостик в лоточке.

4. Руками предметные стекла берутся только за ребра.

Цели занятия:

Знать:

1. Методики приготовления мазков из патологического материала и микробных культур;

2. Способ фиксации мазков, значение фиксации;

3. Красители, применяемые в микробиологической практике

4. Методики приготовления основных и рабочих растворов красителей

Уметь:

1. Приготовить мазки из микробной культуры с жидкой и плотной питательной среды, вязкого материала, жидкого патологического материала (ликвор, моча), органов и тканей (мазки — отпечатки).

2. Провести фиксацию физическим и химическим способом

3. Приготовить рабочие растворы красителей.

1. Из микробной культуры с жидкой питательной среды и из жидкого патологического материала:

- взять пинцетом подготовленное к работе предметное стекло; маркером обвести контур будущего мазка; закодировать мазок;

- маленькую каплю исследуемого материала или культуры нанести в центр контура мазка стерильной петлей или пастеровской пипеткой и круговыми движениями распределить ровным слоем в контуре. Мазок должен быть равномерно мутным. Мочу и ликвор предварительно центрифугируют и мазки готовят из осадка.

2. Из микробной культуры с плотной питательной средой:

- на середину подготовленного предметного стекла нанести каплю физиологического раствора петлей или пастеровской пипеткой.

- подготовленной петлей взять микробную культуру с плотной средой и внести в каплю жидкости; круговыми движениями равномерно распределить ее; диаметр мазка до 1 см.

3. Из вязкого материала: мокрота, гной:

- материал нанести на предметное стекло к одному из узких краев;

- накрыть сверху другим предметным стеклом;

- стекла прижать друг к другу за ребра;

- свободные концы стекол захватывают большим и указательным пальцами обеих рук и разводят в противоположные стороны так, чтобы при движении оба стекла плотно прилегали друг к другу; получаются два мазка-близнеца.

4. Из органов и тканей:

- поверхность органа прижигают накаленным пинцетом, делают по этому месту разрез и из глубины стерильными ножницами вырезают небольшой кусочек ткани, который помещают между двумя предметными стеклами, поступая далее, как при приготовления мазков из гноя.

- если ткань органа плотная, то из глубины разреза делают соскоб скальпелем, который распределяем тонким слоем по поверхности стекла скальпелем.

Приготовленные мазки высушивают при комнатной температуре, а затем фиксируют. Фиксация применяется с целью:

-прикрепления мазка к стеклу;

-уничтожения культуры в мазке и тем самым обеспечивая безопасность дальнейшей работы;

-лучшего восприятия красителей клетками микробов.

Фиксация бывает физическая и химическая.

1. Физическая фиксация: взять предметное стекло с мазком за ребра ближе к концу и медленно провести 3 раза через пламя спиртовки. Для контроля фиксации стекло приложить к тылу кисти. Должны ощущать легкое жжение.

2. Химическая фиксация: используются химические вещества: метиловый или этиловый спирт, смесь Никифорова, ацетон т. д. Мазок погружают в стаканчик с фиксатором или сверху на мазок наносят фиксатор. Время фиксации 5-20 минут. Так чаще фиксируют мазки из патологического материала.

Зафиксированный мазок называется препаратом.

Дата добавления: 2013-12-13