Культивирование.

Ø Мико­бактерии туберкулеза — аэ­робы

Ø оптимальная температура 37°, возможные преде­лы роста 30—42°, рН 6,8— 7,2, пределы реакции среды рН 6,0—8,0.

Ø Человеческий тип микобактерии растет на картофельной среде с 5% глицерина, глицериновом бульоне, яичных средах Пет­рова, Петраньяни, Гельберга, Виноградова, на синтети­ческой среде Сотона, содер­жащей аспарагин, глицерин изменяет цвет.

Ø Свежевыделенные культуры от больных растут дленно (20—30 дней). Микобактерии диссоциируют из R-форм ирулентных) в S-формы (авирулентные).

Ø На плотных питательных средах (картофельно-глицериновая среда Павловского, свер-тая сыворотка, глицериновый агар) появляются колонии микобактерий, морщинистые, суховатые, приподнятые в центре, с неров­ными краями и характерным ароматическим запахом.

Ø Культура на огне трещит ввиду содержания жировосковых веществ

Ø Бычий тип растет на таких же средах, как и человеческий тип, но не нуждается в глицерине. Колонии небольшие, мелкоморщи­нистые в виде суховатого налета. На поверхности жидких сред по­являются отдельные островки, сливающиеся в пленку. В них содер­жатся микобактерии. Палочки короткие, но толще человеческого типа. Эти признаки и свойства характерны для свежих культур, которые растут медленно.

Ø Птичий тип — длинные и тонкие палочки, оптимальная темпе­ратура 40— 42°. Рост наблюдается через 10—12 дней на средах с глицерином. Колонии полушаровидные, гладкие, блестящие, в виде маслянистого налета. На жидких средах — рост диффузный, с рых­лым осадком-на дне.

Микобактерии туберкулеза в чистой культуре: 1 — тип человеческий; 2 — тип бычий; 3 —тип птичий; 4 – мико-бактерии (человеческий тип в мокроте); 5— «зерна муха».— человеческий тип, 6 - рост в глицериновом агаре: а- человеческий тип, б- бычий

Гемолиз вокруг колоний, Рост возбудителей

растущих на агаре с кровью. туберкулеза на плотной

среде (R- форма).

Ферментативные свойства. Микобактерии туберкулеза выраба­тывают желатиназу, дегидрогеназы, расщепляющие аминокислоты, глицерин, спирты, оливковое, касторовое масла и различные угле­воды.

Токсины и ферменты патогенности. Микобактерии туберкулеза не продуцируют экзотоксины. Микобактерии продуцируют лецитиназу, каталазу, пероксидазу и уреазу.

Изучая микобактерии туберкуле­за, Р. Кох (1890) обнаружил вещество, назван-ное «туберкулином». Существуют различные его препараты:

1)- «старый» туберкулин, ко­торый представляет собой 5—6- недельную культуру в глицерино­вом бульоне, стерилизованную текучим паром при 100° в течение 30 минут и профильтрованную через фарфоровые свечи;

2)-« новый» туберкулин Коха — высушенные микобактерии туберкулеза, рас­тертые в 50% -ном растворе, глицерина.

В настоящее время применяют сухой очищенный ту­беркулин М. А. Линниковой, который содержит специфические белки, около 30% полисахаридов. Туберкулин часто применяют для диагностики. С помощью пробы Манту выявляют инфицированность людей микобактериями туберкулеза.

Антигенная структура. Существует серологическое сходство между человеческим и бычьим типами микобактерии. Их антигены вызывают образование агглютининов, преципитинов, опсонинов и комплемент связываю-щих антител в низких концентрациях. Мико­бактерии туберкулеза и туберкулин обладают сенсибилизирующи­ми свойствами для здоровых животных и свойст-вами аллергенов для человека и животных, инфицированных туберкулезом.

Резистентность.

Ø В почве микобактерии сохраняются в течение 2—6 месяцев

Ø в речной воде— 10—-12 месяцев

Ø при кипячении по­гибают через 5 минут

Ø в высохшей мокроте выживают до 8 меся­цев

Ø в молоке — при 60° до 20 минут

Ø в желудочном соке — до 6 ча­сов

Ø 5% раствор фенола при добавлении в одинаковом объеме к мокроте убивает микобактерии туберкулеза в течение 6 часов.

Патогенность для животных. Микобактериями туберкулеза за­ражаются крупный и мелкий рогатый скот, лошади, верблюды, ос­лы, свиньи, собаки, кошки, куры, гуси, утки, индейки, голуби и мыши. Источники инфекции могут находиться и среди диких жи­вотных.

Патогенез. Туберкулез у человека вызывается человеческим, бычьим и птичьим типами бактерий в различных соотношениях:

1)- человеческим — 80—85%

2)- бычьим — 10—17%

3)- птичьим — 0,5—3%

Пути заражения человека микобактериями: пылевой, алиментар­ный, контактно-бытовой и плацентарный. Микобактерии туберку­леза, проникая в организм, вызывают продуктивную тканевую ре­акцию с последующим образованием специфических бугорков в легких или мезентериальных лимфатических узлах. Инфицированность людей микобактериями туберкулеза в возрасте до 30 лет составляет 75—85%, однако они практически здоровы и не опасны для окружающих. В инфицированном организме микобактерии мо­гут находиться в фильтрующихся или L-формах, с измененной структурой," ослабленной вирулентностью и аллергизирующими свойствами. При туберкулезе образуется нестерильный (инфек­ционный) иммунитет, но фаза нестерильного иммунитета может сменяться фазой стерильного. Лабораторная диагностика. Материалом для ис­следования в зависимости от локализации туберкулезного процесса являются: мокрота при туберкулезе легких, спинномозговая жид­кость при туберкулезном менингите, моча при туберкулезе почек. Материал собирают в стерильную посуду по обычной методике: мокроту в баночки, спинномозговую жидкость и другие материалы в пробирки. Для микробиологической диагностики туберкулеза применяют микроскопический, бактериологический, биологический, аллергический и серологический методы

В чашки Петри, выбирают гнойные комочки и переносят их на предметные стекла, затем растирают материал между двумя предметными стеклами, получают два мазка, которые сушат, фиксируют и окра­шивают по Цилю—Нильсену. При наличии микобактерии в мокро­те в препаратах обнаруживаются ярко-красного цвета палочки, в которых иногда находят зернистость. Спинномозговую жидкость помещают в ледник на 18—20 часов. На ее поверхности образуется тонкий слой фибрина в виде пленки, которую переносят на пред­метное стекло. Мочу центрифугируют и делают мазок из осадка, при окраске его обрабатывают серной кислотой, затем исследуют под микроскопом. Если в исследуемом материале мало микобакте­рии туберкулеза, то обнаружить их в мазке не удается. Поэтому применяют метод обогащения (гомогенизации и флотации).

Метод гомогенизации — к 5 мл мокроты добавляют равное ко­личество 1 % едкого натра, закрывают флакон (банку) резиновой пробкой и встряхивают смесь в течение 10—15 минут до полного растворения мокроты. Затем центрифугируют полученную гомоген­ную массу. Жидкую часть сливают, осадок нейтрализуют 2—3 кап­лями 10% раствора соляной кислоты. Из осадка делают мазки и окрашивают по Цилю—Нильсену.

Метод флотации — к гомогенизированной и прогретой при 59° в течение 30 минут мокроте, содержащейся во флаконе, добавляют 1—2 мл ксилола или бензина и встряхивают в течение 10 минут. Затем отстаивают 20 минут при комнатной температуре. При нали­чии микобактерии в исследуемом материале, они адсорбируются на капельках ксилола, которые появляются в виде сливкообразно-го слоя на поверхности. Из этого слоя делают мазки, фиксируют их и окрашивают по Цилю—Нильсену.

Метод люминесцентной м и к р о с к о п и и — ускорен­ный метод диагностики туберкулеза. Препарат окрашивают смесью ауромина в разведении 1: 1000 и родамина — 0,1 г в течение 15 ми­нут. Затем обесцвечивают двукратно по 0,5 минуты 3% солянокис­лым спиртом, смывают водой, докрашивают кислым фуксином, подавляющим свечение элементов тканей и слизи в препарате, вы­сушивают на воздухе и микроскопируют с малым увеличением. Ми­кобактерии светятся золотисто-зеленым цветом в люминесцентном микроскопе.

Бактериологический метод — к 3 мл мокроты добав­ляют 6 мл 6% серной кислоты для освобождения от посторонней флоры. Смесь встряхивают 10 минут, центрифугируют. Жидкость сливают, осадок отмывают от серной кислоты 3 раза стерильным физиологическим раствором. Осадок сеют в 5—6 пробирок путем втирания его на поверхность питательной среды и помещают в тер­мостат в наклонном положении на 3—4 недели. Рост микобактерии появляется в виде отдельных колоний, затем они сливаются и об­разуется бугристый (морщинистый) сплошной налет.

Спинномозговая жидкость, кровь, гной, экссудат не подвергают­ся предварительной обработке. Их сеют пипеткой на избирательную среду. Материал втирают петлей по всей поверхности среды. Во избежание высыхания среды ватные пробки заливают парафином и посевы помещают в термостат при 37° на 6—8 недель. Первые колонии микобактерии с характерными морщинистыми, суховатыми и неровными краями появляются на 15—25 дни после посева. Если в течение шести недель нет роста, то с поверхности среды делают соскоб и микроскопируют на наличие кислотоустойчивых бактерий.. После этого решается вопрос, продолжать исследование или нет.

Цитохимический метод Сущность метода состоит в том, что к суспен­зии микобактерии, приготовленной на щелочном буфере (5 г-хлористого натрия на 100 мл 1% водного раствора барбитурата-натрия), прибавляют несколько капель 1% водного раствора нейт­ральрот. Реакция происходит при комнатной температуре. Виру­лентные микобактерии переводят желтый цвет среды в ярко-крас­ный, а невирулентные — не связывают краску и среда остается! желтой.

Серологический метод. Для диагностики туберкулеза, применяют непрямую реакцию гемагглютинацин Мидлбрука—Дю-бо. Сущность ее состоит в том, что эритроциты барана или челове­ка О-группы, обработанные танином и полисахаридный экстрактом из микобактерии или туберкулином (сенсибили-зированные эритро­циты), смешивают с сывороткой больного в разведении 1:2, 1:4 1:8 и т.д. Сыворотка туберкулезных больных вызывает склеива­ние сенсибилизированных эритроцитов. Диагностическим титром: служит разведение 1: 8 и выше.

Биологический метод. При заражении морских свинок, минимальной инфицирующей дозой микобактерии у них развивает­ся прогрессирующий туберкулезный процесс. Исследуемый мате­риал обрабатывают серной кислотой, освобождают его от сопутст­вующей микрофлоры и промывают физиологическим раствором, затем вводят по 2—3 мл подкожно в область паха здоровым свин­кам, проверенным за двое суток туберкулиновой пробой на наличие спонтанного заражения туберкулезом. Через 10—15 дней у них появляется инфильтрат — воспалительный очаг с гнойным выделением, в котором обнаруживаются микобактерии туберкуле­за. При вскрытии их находят бугорки в различных органах.

Аллергический метод. Пробы ставят сухим туберкули­ном и в стандартном разведении. Этим методом определяют не только инфицированность организма микобактериями туберкулеза, но и отбирают лиц, подлежащих иммунизации вакциной БЦЖ-Аллергический метод осуществляется внутрикожной (Манту) про­бой, при которой на обработанную сгибательную поверхность пред­плечья внутрикожно вводят 0,2 мл разведенного туберкулина 1: 2000. Учет ведут через 48 часов. Положительная реакция — обра­зуются инфильтрат и папула в диаметре более 5 мм. Отрицатель­ная — местная реакция отсутствует.

Лечение больных туберкулезом проводится комплексно: анти­бактериальные, и химиотерапевтические средства (стрептомицин, этоксид, этионамид, рифамицин, флорнамицин, канамицин, ПАСК, фтивазид, тубазид, изониазид, салюзид, ларусан и др.); климати­ческое (курортное) и хирургическое лечение, лечебное питание, шубатолечение (верблюжье молоко), кумысолечение; десенсибили­зация организма туберкулином и эльпимедом (препарат получен из лошадиной сыворотки, содержит насыщенные жирные кислоты, восстанавливает нормальную реактивность организма).

Специфическая профи­лактика туберкулеза проводится методом внутрикожной вакцина­ции и ревакцинацией. Вакцина БЦЖ состоит из живых туберку­лезных микобактерии (вакцинного — аттенуированного штамма БЦЖ), высушенных в замороженном состоянии под вакуумом. В 1 мг вакцины — 2 млн. живых микробов. Вакцину применяют для первичной вакцинации новорожденных и ревакцинации детей и взрослых. Перед ревакцинацией ставят пробу с туберкулином. При положительной реакции ревакцинация не проводится

Ал матинский медицинский колледж

«Цикл общих профессиональных дисциплин»

№ 10 – Лекция – методическая разработка к

теоретическому занятию

по предмету «Микробиология и вирусология»

Тема: Возбудители анаэробной инфекции

0302000«Сестринское дело» -30 часов (15)-107-II-

семестр II- полугодие. Дневное отделение

Подготовила:КүмісбаеваЖ.Н.

Утверждено,обсуждено,разобрано

на циклов собраний

«----» ---------- 2011 г

Протокол № --------

Зав.ЦМК

Карбаева М.С.---------

Алматы – 2011 г

Лекция 10 Модуль 1

Тема: Возбудители анаэробной инфекции

План лекций:

1. Основные представители: клостридии газовой гангрены, столбняка, ботулизма. Морфологические особенности возбудителей и диагностика забо-левания. Диагностические, профилактические и лечебные препараты.

2. Неспорообразующие анаэробные бактерии (неклостридиальные). Ха-рактеристика и лабораторная диагностика. Диагностические, профилактичес-кие и лечебные препараты.

Студент должен знать:

· основных представителей возбудителей:к лостридии газовой гангрены, столбняка, ботулизма и их морфологические, культуральные свойства. Факторы патогенности

· Неспорообразующие анаэробные бактерии (неклостридиальные). Харак-теристика и лабораторная диагностика. Диагностические, профилакти-ческие и лечебные препараты.

Дата добавления: 2013-12-13