Для формирования понятий и способов действий

Опорная карта

Vэтап

IVэтап

III этап

1. Отбирают типичную для выделяемого вида микроорганизмов изолированную колонию, обводя её стеклографом со стороны дна чашки.

2. Из части ее делают мазок, окрашивают и микроскопируют (должны быть однородные клетки).

3. Оставшуюся часть этой колонии пересевают на среду Китта – Тароцци (для выделения и накопления чистой культуры) и инкубируют при температуре 37⁰ С 24 часа.

1. Проверяют однородность чистой культуры, т.е. делают мазок со среды Китта-Тароцци, окрашивают по Граму и микроскопируют.

2. Посев на короткий «пестрый» ряд Гисса в анаэробных условиях.

3. Биопроба и реакция нейтрализации токсина противогангренозными антитоксическими сыворотками (на белых мышах, внутрикожно).

Алгоритм проведения биопробы (реакция нейтрализации на мышах) при диагностике газовой гангрены. Цель постановки данной реакции для определения вида возбудителя.

Для этого исследуемый материал разливают по 0,9 мл в 5 пробирок и в каждую прибавляют по 0,6 мл соответствующих антитоксических сывороток: C.perfringens, C. novyi, C. septicum, C. histolyticum, C.sordellii. В последнюю, 6–ю пробирку вносят изотонический раствор хлорида натрия – контроль.

Смесь токсина с антитоксической сывороткой оставляют при комнатной температуре на 40 мин для нейтрализации токсина. По 0,5 мл из каждой пробирки инъекции вводят подкожно в заднюю лапку с внутренней стороны двум мышам. За животными ведут наблюдение. Гибель животного может наступить в сроки 5-6 часов до 3-4 дней. Мыши, получившие токсин с гомологичной антисывороткой, остаются живыми.

При отрицательном результате биологической пробы опыт повторяют с выделенной чистой культурой по той же схеме.

Учитывая быстрое развитие клинических симптомов газовой гангрены, необходимо быстро дать ориентировочное заключение о виде возбудителя (с целью применения срочной серотерапии). Для этого из исследуемого материала делают мазок – отпечаток, обрабатывают иммунофлюоресцирующей видоспецифической сывороткой и изучают иммунофлуоресцентным методом.

4. Проба на чувствительность к антибиотикам на среде Цейсслера и инкубируют при температуре 37⁰С 8 – 24 часа в анаэробных условиях.

1. Проводят учет ферментативных свойств культуры, тестов идентификации, пробы на чувствительность к антибиотикам.

2. Выдают окончательный ответ: «Выделены Clostridium рerfingens чувствительные к стрептомицину и гентамицину, промежуточные к тетрациклину, устойчивые к пенициллину и эритромицину.

по теме 2.2: «Возбудители раневых анаэробных инфекций».

Дата добавления: 2014-01-04