Анализ полового хроматина X в клетках слизистой полости рта

ПОЛОВОЙ ХРОМАТИН X

Хроматин X - это небольшое тельце, которое интенсивно окрашивается основными красителями и выявляется в интерфазньгх ядрах соматических клеток млекопитающих и человека - непосредственно под ядерной оболочкой.

Хроматин X впервые обнаружили в 1949 г. М. Барр и Ч. Бертрам, в ядрах нейронов кошки, причем, только в клетках самок. В дальнейшем было показано наличие хроматина X и у других млекопитающих, в том числе человека Происхождение и значение полового хроматина X получило свое объяснение позднее, в гипотезе М. Лайон (1961).

Хроматин X может быть определен в любых тканях, однако чаще всего используются эпителиальные клетки слизистой полости рта (тест Барра) и клетки периферической крови. Иногда используются клетки волосяной луковицы. В качестве Х-хроматина учитывается самый большой хромоцентр, прилегающий к ядерной мембране. Анализ результатов основан на установлении числа телец хроматина X, которое коррелирует с количеством Х-хромосом.

Тельце Барра представляет собой одну инактивированную хромосому X и выявляется в интерфазном ядре в виде конденсированного и интенсивно окрашенного тельца. Как правило, оно прилегает к внутренней стороне ядерной мембраны и имеет овальную или треугольную форму. Размер тельца Барра составляет в среднем около 1 микрона (± 0,3). Следует отличать тельце Барра от других хорошо окрашиваемых структур интерфазного ядра, например ядрышка или центрально расположенных хромоцентров.

Тест Барра включает в себя следующие этапы:

- получение биологического материала: стерильным шпателем проводится соскоб с внутренней поверхности щеки (у детей - с поверхности нижней губы) и делается мазок на предметном стекле;

- фиксация: с использованием специального фиксатора, в котором препарат выдерживают от 30 минут до 12 часов;

- дегидратация: последовательный перенос из одного раствора в другой с выдержкой в каждом в течение 5 минут: в спирте 70°, в спирте 50°, в дистиллированной воде I, в дистиллированной воде II;

- гидролиз: в НСl (необязательно);

- окрашивание: красителем CARR (основной фуксин);

- анализ препарата под микроскопом с использованием иммерсионного объектива.

Дата добавления: 2014-01-05