Біосинтез ІОК

Методи аналізу індольних ауксинів

Для виділення індольних ауксинів з тканин рослинні об’єкти фіксують рідким азотом і ліофілізують або безпосередньо використовують для екстракції. Екстрагування ауксинів звичайно проводять протягом 2 годин при 0°С кількома порціями підкисленого сірчаного ефіру, вільного від перекисів. Ефір з екстракту відганяється. Водний залишок піддають додатковому очищенню. Ауксини з водного екстракту витягують ефіром і потім концентрують шляхом відгонки ефіру.

Для подальшої очистки використовують метод паперової або тонкошарової хроматографії. Ідентифікацію ІОК і інших індольних сполук на хроматограмі проводять по величині Rf двох – трьох системах розчинників, по кольоровим реакціям і по біопробі.

Елюати з зон хроматограми використовують для біотестів. Простим і надійним біологічним методом виявлення ауксинів є метод прямого росту відрізків колеоптилів вівса, пшениці чи кукурудзи з видаленою верхівкою. Цей метод дозволяє виявити ІОК в межах 10^–7–10^–4 М.

Надійність аналізу ІОК зростає при використанні хімічних тестів: реактивів Сальковського, Ерліха, Прохазки з якими індольні сполуки дають комплекси різного кольору. Так як і деякі інші природні сполуки дають кольорові реакції з цими реактивами,то необхідно застосовувати 2–3 хімічних тести для ідентифікації ауксина.

Біологічні методи дають можливість кількісно виявити вміст ауксинів в рослинних тканинах. Для цієї мети слугують також і хімічні кількісні методи. Для колориметричного методу використовують реактив Сальковського (0.01 М FeCl3 в 35%-ій HClO₄), реактив Ерліха(2 г n-диметиламінобензальдегіду в 100 мл 2,5 н HCl). Однак чутливість цих методів невелика,порядку 3×10^–6–3×10^–4 ІОК. Для виявлення кількості індольних ауксинів колориметричним методом необхідно кілька сот грамів сирої маси тканини.

Амінокислота триптофан звичайно розглядається як попередник ІОК. Триптофан під дією трансамінази може перетворюватися в індоліл-3-піруват. Цей шлях вимагає присутності кетокислот і піридоксальфосфату. Індолілпіруват декарбоксилюється за участю декарбоксилази і тіамінпірофосфату до індоліл-3-ацетальдегіду. Альдегіддегідрогеназа, коферментом якої є НАД, окисляє індоліл-3-ацетальдегід до ІОК.

Інший шлях утворення ІОК включає декарбоксилювання триптофану з утворенням триптаміна. Потім триптамін під дією аміноксидази перетворюється в індолілацетальдегід, який окислюється до ІОК.

Згідно деяким даним, триптамін може утворюватися з індола, а потім перетворюватися в ІОК по вже описаному механізму. Індоліл-3-етанол під дією етанолоксидази швидко перетворюється в індол або ацетальдегід.

Дата добавления: 2014-01-07