Лактатдегидрогеназа

Выражение результатов определения активности ферментов

Требования к материалу при определении ферментов

Колориметрические методы - измерение (ФЭК) интенсивности окраски вещества, образующегося при взаимодействии субстрата или продукта действия фермента со специфическими реактивами, добавленными в пробу, как правило, после остановки ферментативной реакции.

Спектрофотометрические методы – основаны на изменении светопоглощения в ультрафиолетовом спектре при переходе вещества из окисленной формы в восстановленную. Определение активности ферментов, основанное на разнице спектров поглощения окисленной и восстановленной форм НАД и НАДФ, получило название оптического теста Варбурга.

Ø Кровь натощак или не ранее, чем через 4 ч. после приема пищи.

Ø Только негемолизированная сыворотка

Ø Быстро отделять сыворотку от сгустка крови (не позже 2 ч. с момента взятия крови).

Ø Хранение сыворотки при комнатной температуре для большинства ферментов не более 6—8 ч., при 4°С — около одной недели, а в замороженном состоянии — в течение одного месяца. Исключение: ЛДГ (активность в течение первых трех дней лучше сохраняется при комнатной температуре)

Ø Избегать повторных замораживаний и оттаиваний → денатурация белка, потеря ферментативной активности.

Ø Если определение проводится в замороженной сыворотке, оттаивание сыворотки должно производиться на водяной бане при температуре 37°С.

Ø Сыворотка лучше, чем плазма. Если в качестве материала используется плазма - учитывать, что многие антикоагулянты могут ингибировать ферментативную активность. ЛДГ и амилаза теряет активность в "оксалатной" плазме, альдолазы – при использовании фторидов,. Фториды нельзя использовать при определении альдолазной активности. Оксалат и цитрат ингибируют амилазную активность и т.д.

Ø Интерференция лекарств - салицилаты повышают активность аминотрансфераз, сульфаниламиды подавляют активность карбоангидразы, препараты опия могут увеличивать активность амилазы и т.д.

Единица активности (Е) фермента - количество фермента, которое катализирует превращение 1 мкмоль субстрата (или образование 1 мкмоль продукта реакции) за 1 мин при заданных условиях. При этом необходимо указывать температуру, при которой проводилась ферментативная реакция. Активность ферментов в сыворотке или плазме крови следует выражать в единицах на 1 л.

Возможно выражение результата в каталах (долях катала) на литр (1 мкат = 60 ЕД).

\

Дата добавления: 2014-01-07