Тромбиновое время

Определение тромбинового времени является третьим по значимости базисным скрининговым тестом. Тест характеризует конечный этап процесса свертывания - превращение фибриногена в фибрин под действием тромбина, на него влияет концентрация фибриногена в плазме и наличие продуктов деградации фибрина. Удлинение тромбинового времени может быть вызвано молекулярными аномалиями и снижением уровня фибриногена (менее 1,0 г/л), избытком в крови гепарина в результате гепаринотерапии, накоп­лением продуктов деградации фибрина, парапротеинемией, наследственной и приобре­тенной дисфибриногенемией, наличием ингибиторов тромбина и фибриногена.

Для дифференциальной диагностики проводят количественное определение фибриногена, продуктов деградации фибрина, пробу с протаминсульфатом и др., позволяющие уточнить диагноз. Образование сгустка не происходит в терминальной стадии ДВС-синдрома, а также при внутривенном введении большой дозы гепарина..

Ключевым реагентом при проведении теста является реагент тромбин, который должен быть выделен в максимально очищенном виде, и сохранять свою активность при выделении и лиофильном высушивании. При проведении тест используют тромбин с активностью 3 МЕ/мл и 6 МЕ/мл. Для исследования плазмы, не содержащей гепарин, как правило, используют тромбин с активностью 3 МЕ/мл. При работе с гепаринизированной плазмой необходимо использовать тромбин с активностью 6 МЕ/мл.

Следует отметить, что при использовании тромбина с активностью 3 МЕ/мл время свертывания должно лежать в диапазоне 16-21 (±5) сек, а при использовании тромбина с активностью 6 МЕ/мл время свертывания должно находится в более узком диапазоне 9-13 (±2) сек.

Таким образом, принято в первом случае считать патологией отклонение от нормы более, чем на 5 сек, во втором случае - на 2 сек.

Принцип метода определения заключается в том, что при добавлении тромбина к цитратной плазме время образования сгустка фибрина зависит только от количества и активности фибриногена в данной плазме, от активности тромбина и от наличия ингибиторов. Реакция проходит в одну стадию

Рисунок 1. Стадии процесса свертывания крови и последовательность активации факторов

В соответствии с модифицированной теорией свертывания, которая расширила и дополнила каскадную теорию и была представлена в конце 90-х - начале 2000-х годов, деление процесса образования тромба на внешний и внутренний путь не вполне точно отражает существо развивающихся in vivo событий (Hoffman M., Monroe D.M., 2001; Бутенас С, Манн К.Г., 2002", ПапаянЛ.П., 2003). Предложено рассматривать тромбообразование как трехфазную реакцию, которая начинается с повреждения сосудистой стенки и образования комплекса тканевой фактор:ф.УИа и проходит стадии (1) инициации, (2) усиления и распространения и (3) генерации тромбина и фибрина (рис.1). При этом на стадии инициации образуется малое количество тромбина, а на заключительном этапе возникает, так называемый «тромбиновый взрыв» (thrombin burst). Теназный (ф.VШа:ф.IХа) и протромбиназный (ф.Vа:ф.Ха) комплексы «работают» на поверхности активированных тромбоцитов, которые играют важнейшую роль во всей системе свертывания крови.

Образование тромбина является центральным событием процесса свертывания крови. Небольшое количество ф. Ха, образованное выделившимся при травме тканевым фактором и ф. VIIa, приводит к образованию очень небольшого количества тромбина, которое легко разрушается антитромбином III.

Сигнал сразу усиливается, когда тромбин связывается с тромбоцитами. При этом неактивный ф. V преобразуется в активный ф. Va - кофактор, необходимый для образования комплекса ПРОТРОМБИНАЗЫ на активированной мембране тромбоцитов.

Тромбин также высвобождает ф. VIII от связи с фактором Виллебранда и переводит его в ф. VIIIa., который является основным компонентом комплекса ТЕНАЗЫ, кото­рый также располагается на поверхности тромбоцитов.

Ф. Па переводит ф. XI в ХIа, что приводит к активации ф. IX в ф. IХа. И, наконец, именно тромбин активирует тромбоциты и тем завершает образование комплексов ТЕНАЗЫ и ПРОТРОМБИНАЗЫ.

Укрепление этих комплексов на поверхности тромбоцитов быстро приводит к образованию достаточного количества фIIa для поддержания активации тромбоцитов. Тромбоциты активируются как при прилипании к коллагену, так и под действием тромбина.

Таким образом, небольшое количество тромбина, образованное при повреждении тканевых клеток, с помощью реакций обратной связи и в присутствии тромбоцитов существенно возрастает. Затем при образовании мультиферментных комплексов на поверхности активированных тромбоцитов количество тромбина уже многократно увеличивается и распространяется по всему организму. Конечный результат - образование большого количества тромбина и длительная активация тромбоцитов, что приводит к превращению неактивного и растворимого фибриногена плазмы крови в нерастворимый полимер фибрин.

Тромбин - это витамин К зависимая протеиназа с ММ 37 000 D.. Тромбин имеет много функций: он активирует кофакторы V и VIII, активирует ф. XI, способствует активации, агрегации и дезинтеграции тромбоцитов, активирует ф. XIII, и только тромбин превращает растворимый фибриноген плазмы в нерастворимый фибрин.

Тромбин выделяют из плазмы крови с помощью тромбопластина, который превращает неактивный протромбин плазмы в активный фермент тромбин. Затем следуют этапы хроматографической очистки от примесей, которые значительно повышают удельную активность тромбина. Удобно готовить для анализов 2 раствора тромбина: стабилизированный раствор тромбина, который допускается хранить в течение месяца при температуре 2-8°С и рабочий раствор тромбина, который используется в течение 2 ч в день изготовления.

Интерпретация результатов

Удлинение тромбинового времени происходит при:

гипофибриногенемии, связанной с ДВС или наследственной или приобретенной патологией;

повышенной концентрации продуктов деградации фибриногена/фибрина;

присутствии в крови гепарина;

с парапротеинемией;

с наличием в крови ингибиторов тромбина или фибриногена;.

дисфибриногенемии, связанной с заболеванием печени или при наследственной патологии.

Укорочение тромбинового времени свидетельствует о риске тромбозов. Нормальные значения тромбинового времени:

- тромбин с активностью 6 МЕ/мл -9-12 сек

- тромбин с активностью 3 МЕ/мл - 15-20 сек

Дата добавления: 2014-11-16