Клаусса

КОЛИЧЕСТВЕННЫЙ АНАЛИЗ ФИБРИНОГЕНА ПО МЕТОДУ

Количественное определение фибриногена является базисным тестом исследования гемостаза. Тест проводится при гиперфибриногенемиях, связанных с тяжестью воспалительных, иммуных, деструктивных процессов, с риском развития гипервискозного синдрома, артериальных тромбозов и инфарктов органов. Снижение концентрации фибриногена наблюдается при остром ДВС-синдроме, при лечении фибринолитиками, при врожденных гипо- и дисфибриногенемиях.

Фактор I свертывания крови - фибриноген (Mw-340 000 D) - является гликопро-теином и находится в растворенном состоянии в плазме крови и в тканях всех позвоночных животных. Образование фибрина и его стабилизация представляют собой финальный этап формирования тромба, при котором растворимый фибриноген превращается в нерастворимый фибрин под действием тромбина и фактора XIII.

Молекула фибриногена состоит из 6 полипептидных цепей: Аа2 Bb2 g2, связанных 29 дисульфидными связями. Образование из растворимого фибриногена нерастворимого полимера фибрина представляет собой высокоорганизованную последовательность взаимодействия целого ряда веществ. Механизмы этого процесса пристально изучаются уже более 40 лет, но до настоящего времени не все известно. Было установлено, что тромбин отщепляет от молекулы фибриногена А и В фибринопептиды, оставшиеся фибрин-мономеры начинают полимеризоваться, образуя сначала димеры, потом тетрамеры, олигомеры и так далее до образования полимера растворимого фибрина. В последней стадии растворимый фибрин стабилизируется ковалентными связями под действием ф. XIII и становится нерастворимым.

Фибриноген синтезируется в печени и имеет много функций: принимает участие как в свертывании крови, так и при агрегации тромбоцитов, определяет вязкость крови и влияет на взаимодействие форменных элементов крови с сосудистой стенкой. Фибриноген - это белок острой фазы, его концентрация увеличивается при острых ситуациях: травме, инфекции, воспалении, операции и т.п.

Концентрация фибриногена возрастает с возрастом, а также при ожирении, у больных атеросклерозом, сахарным диабетом, у курящих, при инфарке миокарда, канцерогенезе, нефрозе.

Возрастание в крови содержания фибриногена приводит к риску возникновения атеросклероза коронарных, мозговых и внемозговых артерий и к увеличению смертности. Все вышесказанное свидетельствует о необходимости точного определения содержания фибриногена в плазме крови. Разработаны различные методы определения фибри­ногена: кинетический, весовой, коагулометрический и др. Весовой метод основан на измерении фибриногена в фибриновом сгустке путем взвешивания последнего на торсионных весах (метод Рутберг). На растворении сгустка и количественном спектрофотометри-ческом определении белка основан метод Белицер и соавт. Следует отметить, что метод Рутберг достаточно прост в исполнении, но дает очень большую ошибку определения, и- результат тестирования напрямую зависит от умения лаборанта. Метод Белицера и соавт. более точен, но сложен и длителен по исполнению.

Метод Клаусса был предложен автором в 1957 г.

Принцип метода основан на особенностях кинетики реакции фибриноген-тромбин, когда исследуемую плазму крови разбавляют в 10 раз с целью снижения влияния ингибиторов тромбина (антитромбина III и др.). В этих условиях при высоких концен­трациях тромбина и низких концентрациях фибриногена время реакции образования сгу­стка зависит только от количества фибриногена.

Метод Клаусса очень прост в исполнении, определяет только активный фибриноген, метод точен и стандартен, широко применяется за рубежом.

Единственный недостаток метода - невозможность работы ручным методом, т.к. образуемый сгусток плохо различим визуально. Однако любые механические или оптико-механические коагулометры позволяют получить точные и воспроизводимые результаты исследования фибриногена по Клауссу. Как показали наши исследования, в плазме доноров содержание фибриногена колеблется от 1,8 до 3,5 г/л. Для работы на оптических коа-гулометрах в инкубационную смесь вносят специально разработанный мелкодисперсный каолин.

Дата добавления: 2014-11-16