Методи фіксування та забарвлення препаратів

Мікроскопія. Методи фіксування та забарвлення препаратів. Виготовлення парафінових зрізів. Флуоресцентна мікроскопія. Виявлення специфічних молекул в клітинах. Фазово-контрастний і інтерференційний мікроскопи, принципи їхньої дії. Електронний мікроскоп. Обробка дослідного матеріалу. Сканувальний та трансмісійний електронні мікроскопи та галузі їхнього використання. Методи відтінення.

Arabidopsis thaliana - найпоширеніший рослинний об'єкт в біотехнології і генетиці квіткових рослин.

Арабідопсис невеликий квітуча рослина, яке широко використовується в якості модельного організму в біології рослин. Arabidopsis є членом гірчицею (Brassicaceae) сім'ї, яка включає в себе культивованих видів, таких як капуста і редис. Хоча це і не велика агрономічної значення, Arabidopsis пропонує важливі переваги для фундаментальних досліджень в галузі генетики та молекулярної біології:

Приблизно 115 Мбайт Мб генома 125 була послідовність і анотований (Природа, 408:796-815; 2000).

Обширні генетичні та фізичні карти всіх 5 хромосом є.

Життєвий цикл короткий - близько 6 тижнів від сходів до дозрівання насіння

Насінництво є плідним і завод легко культивується в обмеженому просторі.

Трансформація є ефективним використанням Agrobacterium tumefaciens.

Велика кількість мутантних ліній і геномних ресурсів доступні.

А. THALIANA вивчається багатонаціональної науково- дослідницького співтовариства в академічних, урядових та промисловості.

Такі переваги зробили Arabidopsis модельний організм для вивчення клітинної та молекулярної біології квіткових рослин.

Мікроскопія Мікроскопія (рос. микроскопия, англ. microscopy, нім. Mikroskopie f) – сукупність методів застосування мікроскопа і способи виготовлення мікроскопічних препаратів. Розрізняють: оптичну мікроскопію, електронну мікроскопію, багатофотонну мікроскопію, рентгенівську мікроскопію, рентгенівську лазерну мікроскопію.

Фіксація. При фіксації мазок закріплюється на поверхні скла, і тому при подальшому фарбуванні препарату клітини не змиваються. Крім того, убиті мікробні клітини забарвлюються краще, ніж живі. Розрізняють фізичний спосіб фіксації, в основу якого покладена дія високої температури на клітину, і хімічні способи, що передбачають застосування хімічних засобів, що викликають коагуляцію білків цитоплазми.

Фізичний спосіб фіксації: Скло з препаратом беруть пінцетом і плавним рухом проводять 2-3 рази над верхньою частиною полум'я пальника. Весь процес фіксації повинен займати не більше, ніж 2 с. Надійність фіксації перевіряють наступним прийомом: вільну від мазка поверхню скла прикладають до тильної поверхні лівої кисті. При правильній фіксації скло повинне бути гарячим, але не викликати відчуття опіку (70—80 °С).

Хімічний спосіб фіксації: Для фіксації мазків застосовують метиловий спирт, ацетон, суміш Никіфорова (суміш етилового спирту 96% і наркозного ефіру в співвідношенні 1:1), рідина Карнуа (етилового спирту 96% — 60%, хлороформу 30%, крижаної оцетової кислоти 10%). Скло з висушеним мазком занурюють в склянку з фіксуючою речовиною на 10-15 хвилин і потім висушують на повітрі.

Фарбування за Грамом (або метод Грама) — емпірично виведений метод розрізнення бактерій за допомогою фарбування їх певним методом на дві великі групи: Грам-позитивні і Грам-негативні), що розрізняються хімічними та фізичними властивостями їх клітинної стінки. Фарбування за Грамом — одна з найкорисніших фарбувальних процедур у лабораторних дослідженнях в мікробіології. Процедура широко використовується як інструмент для розрізнення Грам-негативних і Грам-позитивних бактерій, що звичайно є першим кроком у визначенні ідентичності специфічного бактерійного зразка.

У медицині фарбування за Грамом виконується при аналізі крові або біопсії, коли підозрюється інфекція. Цей метод набагато швидший, ніж культура, і особливо важливий, коли визначення типу інфекції необхідно для прогнозу та вибору методу лікування. Наприклад, при діагностиці цереброспінальної рідини на менінгіт і рідини суглобів на септичний артрит. При аналізі, наприклад, Коки і спороносні форми бактерій, а також дріжджі — грам-позитивні і забарвлюються в синяво-чорний (темно-синій) колір, більшість інших бактерій — грам-негативні і забарвлюються в червоний колір, ядра клітин еукаріот набувають яскраво-червоного кольору, а цитоплазма — рожевого. Техніка проведення фарбування.

Дата добавления: 2014-11-20