КАТЕГОРИИ: Архитектура-(3434)Астрономия-(809)Биология-(7483)Биотехнологии-(1457)Военное дело-(14632)Высокие технологии-(1363)География-(913)Геология-(1438)Государство-(451)Демография-(1065)Дом-(47672)Журналистика и СМИ-(912)Изобретательство-(14524)Иностранные языки-(4268)Информатика-(17799)Искусство-(1338)История-(13644)Компьютеры-(11121)Косметика-(55)Кулинария-(373)Культура-(8427)Лингвистика-(374)Литература-(1642)Маркетинг-(23702)Математика-(16968)Машиностроение-(1700)Медицина-(12668)Менеджмент-(24684)Механика-(15423)Науковедение-(506)Образование-(11852)Охрана труда-(3308)Педагогика-(5571)Полиграфия-(1312)Политика-(7869)Право-(5454)Приборостроение-(1369)Программирование-(2801)Производство-(97182)Промышленность-(8706)Психология-(18388)Религия-(3217)Связь-(10668)Сельское хозяйство-(299)Социология-(6455)Спорт-(42831)Строительство-(4793)Торговля-(5050)Транспорт-(2929)Туризм-(1568)Физика-(3942)Философия-(17015)Финансы-(26596)Химия-(22929)Экология-(12095)Экономика-(9961)Электроника-(8441)Электротехника-(4623)Энергетика-(12629)Юриспруденция-(1492)Ядерная техника-(1748) |
Додаток ІІІ
Галузь винаходу
Передумова створення винаходу
Однак, метод Letsinger et al. не є практичним, універсальним і не використовується на практиці, оскільки існують наступні недоліки:
(1) конденсаційний вихід на кожній стадії є низьким (приблизно 97%: для синтезу 50-mer або більше довголанцюжного олігонуклеотиду, необхідний вихід щонайменше 99%) і промисловий автоматичний синтезатор ДНК не може використовуватись для цього методу, тому довголанцюжний олігонуклеотид, який містить від 50 до 100 нуклеотидів, зазвичай необхідних для хімічного синтезу ДНК тощо, не може бути синтезованим;
(2) можуть бути використані тільки високореактивні, специфічні нуклеозидфосфороамідити, і тому цей метод має обмежену сферу застосування і не є практичним; та
(3) пиридин гідрохлорид, використовуваний як каталізатор, є нестійкою сполукою з дуже високою вологонепроникністю, й тому працювати з нею важко.
Короткий виклад винаходу
Для вирішення цієї проблеми в даному винаході надається метод хімічного синтезу олігонуклеотиду фосфороамідитним методом, який включає одержання основи незахищеного нуклеозидфосфороамідиту з основи групи незахищеного нуклеозиду шляхом використання імідазол фторсульфонату, представленого наступною хімічною формулою, і спарювання даної основи незахищеного нуклеозидфосфороамідиту в установленому порядку в присутності даного імідазолфторосульфонату для хімічного синтезу олігонуклеотиду, що складається із певної послідовності нуклеотидів.
У кращому втіленні методу згідно з даним винаходом, спарена основа незахищеного нуклеозидфосфороамідиту обробляється розчином бензімідазолфтороформсульфонатом.
Короткий опис креслень
На Фіг. 1 представлено схематичне зображення кожної стадії реакції методом даного винаходу;
На Фіг. 2 схематичне зображення кожної стадії реакції методом даного винаходу, коли проводилось обробляння амонієм;
На Фіг.3 зображено HPLС-профіль фрагментів ДНКDNA, синтезованих методом даного винаходу.
Детальний опис винаходу
Імідазол тріфлат згідно з даним винаходом може одержуватись шляхом змішування імідазолу з фтороформсульфоновою кислотою в пропорції 1:1 в діхлорметані, як показано нижче в прикладі його приготування в Прикладі 1.
Отриманий таким чином імідазоліум тріфлат не поглинає вологу, що також показано в Прикладі 1, і є дуже стійким в звичайних умовах використання, тому він легко обробляється.
У методі хімічного синтезу згідно з даним винаходом основа незахищеного нуклеозидфосфороамідиту одержується з основи незахищеного нуклеотиду з використанням імідазол тріфлату згідно з описаним вище, і ця основа незахищеного нуклеозидфосфороамідиту використовується як одне ціле і кожний нуклеозидфосфороамідит спарюється у встановленому порядку, хімічно синтезуючи таким чином олігонуклеотид, який складається з певної послідовності нуклеотидів.
Основа незахищеного нуклеозидфосфороамідиту готується шляхом реакції основи незахищеного нуклеозидфосфороамідиту з цианоетил-біс-амідитом у присутності імідазол тріфлата як каталізатора, як показано, наприклад, у Прикладі 2 нижче. У цьому випадку реакція відбувається вибірково на гідроокисній групі в сахарній частині нуклеозиду, тому чотири види N - незахищених нуклеозидфосфороамідитів, використаних у синтезі ДНК, а саме, дезоксиаденозин, дезоксимідин, дезоксигуанозин та тимідин фосфороамідит можна отримати кількісно.
Отримані таким чином чотири види N - незахищених нуклеозид фосфороамідититів використовуються як одиниці для синтезу олігонуклеотиду, що складається із бажаної послідовності нуклеотидів, шляхом способу твердофазного синтезу тощо, відомого із рівня техніки. Крім того, ця синтетична реакція може бути також проведена способом у промисловому синтезаторі ДНК згідно з його протоколом.
У способі даного винаходу кожний спарений N – незахищений нуклеозидфосфороамідит піддається після кожного спарювання обробці розчином бензимідазол тріфлату (наприклад етаноловим розчином). Шляхом цієї обробки побічна реакція на аміногрупу в основі групи є повністю інгібованою і, таким чином, синтезується більш бездоганний олігонуклеотид.
Бензимідазол тріфлат можна синтезувати за наступною схемою реакції:
Приклади
Даний винахід описується далі більш детально, а саме з посиланням на Приклади, які, однак, не призначені для обмеження даного винаходу.
Приклад 1: Приготування імідазол тріфлату
Імідазол і фтороформсульфонова кислота були змішані в пропорції 1:1 в діхлорметані і взаємодіяли при 25°С 10 хвилин, як показано нижче на схемі реакції, внаслідок чого було приготовлено імідазол трифлат згідно з даним винаходом.
В результаті аналізу стандартними способами, отриманий імідазол трифлат мав характеристики, наведені в Таблиці 1
Таблиця 1
Приклад 2: приготування основи групи незахищеного нуклеозидфосфороамідиту Імідазолтрифлат, отриманий у Прикладі 1, було використано як каталізатор таким чином, щоб основа групи незахищеного нуклеозиду вступила в реакцію з цианоетил-біс-амідитом, як показано на наступній схемі реакції:
Шляхом цієї реакції були відповідно одержані чотири види N - незахищених нуклеозидфосфороамідититів, наведені в Таблиці 2, а саме, дезоксиаденозин, дезоксимідин, дезоксигуанозин та тимідин фосфороамідит. Як також показано в Таблиці 2, відповідні нуклеозидфосфороамідити були одержані майже кількісно.
Приклад 3: Синтез фрагменту ДНК
60-mer фрагмент ДНК, що містить послідовність нуклеотидів SEQ ID NO:1 було синтезовано шляхом методу твердофазного синтезу з використанням комерційного синтезатора DNA з 4 видів N - незахищених нуклеозидфосфороамідитів, як одиниць, отриманих в Прикладі 2. Цикл реакції був таким, як показано в Таблиці 3.
Таблиця 3
У цій синтетичній реакції кожна стадія (реакція конденсації) витягування ланцюга, наведеного в Таблиці 1, відбувається при майже 100% виході, і частково захищений 60-mer олігонуклеотид фосфат було отримано зазвичай при 100% виході. Цей вихід був дуже високим, враховуючи, що вихід 60-mer олігонуклеотиду, проведений звичайними методами, як правило, становить близько 20-40%. Крім того, як показано на фіг.2, зняття захисних груп і видалення шляхом обробки розчином амонію (25°С, 60 хвилин) призвело до отримання незахищеного 60-mer DNA в кількісному виході. Аналіз отриманої необробленої незахищеної 60-mer ДНК шляхом високопродуктивної рідинної хроматографії в умовах, показаних у таблиці 4, показав, що її чистота становила 95% або більше, як показано на фіг.3.
Таблиця 4
Як детально описано вище, метод синтезування олігонуклеотидів шляхом використання такого імідазолтріфлату має наступні переваги:
(1) вихід конденсації на кожній стадії становить майже 100% і даний метод може також застосовуватись з автоматичним синтезатором просто шляхом зміни програми для синтезу і використаних реагентів. Тому синтез довголанцюжного олігонуклеотиду, що містить від 50 до 100 нуклеотидів, зазвичай необхідних для хімічного синтезу ДНК тощо, є можливим з 1/10 або меншими витратами у порівнянні із звичайними методами; (2) завдяки можливості використання невизначених нуклеотидфосфороамідитів, даний метод має широкий спектр застосування і є практичним; та (3) імідазол тріфлат згідно з даним винаходом, використаний як каталізатор, є стійкою сполукою, яка не абсорбує вологу, тому його дуже легко застосовувати в звичайних умовах.
ПЕРЕЛІК ПОСЛІДОВНОСТЕЙ SEQ ID:1 №:1 ДОВЖИНА: 60 основ ТИП: нуклеїнова кислота СКРУЧЕНІСТЬ: одна ТОПОЛОГІЯ: лінійна МОЛЕКУЛЯРНИЙ ТИП: синтетична ДНК ПОСЛІДОВНІСТЬ:
TATGGGCCTT TTGATAGGAT GCTCACCGAG CAAAACCAAG AACAACCAGG AGATTTTATT 60
Формула винаходу
1. Спосіб хімічного синтезу олігонуклеотидів фосфороамідитним методом, який включає приготування основи незахищеного нуклеозидфосфороамідиту з основи незахищеного нуклеозиду шляхом використання імадазолфтороформсульфонату, представленого наступною хімічною формулою, та спарювання даної основи незахищеної групи нуклеотид фосфороамідиту в установленому порядку в присутності імадазолфтороформсульфонату для хімічного синтезу олігонуклеотиду, що містить певну послідовність нуклеотидів.
Спосіб хімічного синтезу олігонуклеотидів
Використання та функції
клавіатуру, розташовану в двох частинах, перша частина встановлена на другій поверхні другої панелі, а друга частина встановлена на першій панелі, кожна із функціональних частин клавіатури, що має набір клавіш, сумісних з вибраною функцією, коли функціональна клавіатура виставлена для оперативного використання у функціональному положенні і де перша і друга функціональні частини клавіатури розташовані на протилежних сторонах екрана у відкритому положенні.
Перша і друга панелі співвісно перекриваються в закритому положенні і на протилежних сторонах протилежного екрана у відкритому положенні. Функціональна клавіатура включає повнофункціональний набір клавіш QWERTY, розгалужених на першу і другу частини, які розміщені відповідно в першій і другій панелях. Функціональна клавіатура оснащена пультом управління грою з багатьма функціональними клавішами, розділеними між першою і другою панелями. Набір клавіш на поверхнях панелей може бути зміщений стосовно один одного для запобігання перешкод між клавішами в закритому положенні. Прилад може бути мобільним комунікаційним приладом і додатково включати комунікаційну допоміжну клавіатуру, розташовану на першій поверхні другої панелі, допоміжна клавіатура висувається для оперативного використання в закритому положенні. Прилад може додатково включати блок управління для керування орієнтацією зображення на екрані, сумісний з функціональним положенням першої і другої панелей, тобто встановлюватися в один ряд з комунікаційною допоміжною клавіатурою в закритому положенні і з функціональною клавіатурою у відкритому положенні. Зображення на екрані може обертатись на 90° між відкритим і закритим положеннями. Орієнтацію зображення можна змінювати положенням другої панелі. Допоміжна клавіатура комунікаційного приладу може бути заблокована в неробочому режимі у відкритому положенні.
На фіг.1 зображено вид зверху конструктивного виконання комунікаційного приладу згідно з даним винаходом у закритому положенні;
На фіг.2 зображено вид зверху конструктивного виконання комунікаційного приладу згідно з даним винаходом у відкритому положенні;
На фіг.3а зображено вид збоку конструктивного виконання комунікаційного приладу згідно з даним винаходом у закритому положенні;
На фіг.3b схематичне зображення орієнтації дисплею, коли комунікаційний прилад, зображений на фіг.3а, знаходиться у закритому положенні;
На фіг.3с схематичне зображення орієнтації дисплею, коли комунікаційний прилад, зображений на фіг.3а, знаходиться у відкритому положенні;
На фіг.4 зображено блок-схему системи контролю комунікаційного приладу згідно з даним винаходом; та
На фіг.5 зображено вид зверху альтернативного виконання даного винаходу.
У першому положенні, далі закритому положенні, панель 6 обертається і накладається на панель 5, як показано на фіг.3а. Панель 6, що обертається, має дві плоскі поверхні 7 і 8, які розташовані одна проти одної. Поверхня 7 є внутрішньою поверхнею, коли панель 6 знаходиться в закритому положенні, а поверхня 8 є зовнішньою поверхнею в закритому положенні. У втіленні, що рекомендується, поверхня 8 містить стандартну телефонну клавіатуру 9 для використання під час дії мобільного телефону 1 строго в режимі зв’язку. В закритому положенні прилад діє як стандартний мобільний телефон з дисплеєм 4 екрана 3, який орієнтується співвісно з клавіатурою 9.
Для забезпечення повного функціонування клавіатури в запропонованому втіленні даного винаходу, блок клавіш і кнопок 12, що використовуються для конкретного застосування, розділені надвоє і розташовані на лівій і правій частинах клавіатури 10 і 11 на протилежних сторонах екрана (3) у відкритому положенні. Для полегшення функціонування клавіатури, в ній розроблено функцію запуску великим пальцем обох рук. Це дає можливість зручно тримати невеликий прилад обома руками і управляти вузлами клавіатури 10 і 11 точно і ефективно.
Як наглядно показано на фіг.3, ліва частина клавіатури 10 розміщена на поверхні 7 обертової панелі 6 на протилежній стороні телефонної клавіатури 9. Права частина клавіатури 11 сконструйована на верхній поверхні 13 панелі 5. Задня кришка змонтована на поверхні 14 панелі 5. Для забезпечення щільного зчеплення панелей 5 і 6 у закритому положенні, частини блоку клавіатури 12 на протилежних поверхнях 7 і 13 панелі зміщені стосовно одна одної для запобігання перешкод у закритому положенні.
Для функціонування блоку 12 клавіатури, панель 6 обертається приблизно на 180° у відкритому положенні для створення плоского блоку, що має правий і лівий вузли клавіатури, розділені екраном 3, як показано на фіг.2. Утримуючи будь-якою рукою ліву й праву сторони вузлів, витягнутою в такий спосіб клавіатурою можна зручно управляти за допомогою великих пальців рук. У відкритому положенні зовнішня поверхня 8 панелі 6 спрямована убік від користувача.
Дисплей 4 екрана 3 орієнтується в двох положеннях, залежно від способу використання. У закритому положенні дисплей 4 орієнтується співвісно з допоміжною клавіатурою 9, тоді як у відкритому положенні дисплей 4 орієнтується з функціональним ключовим блоком 12. Як показано на фіг.3 b і 3 с, орієнтація дисплея змінюється на 90° між режимом мобільного телефону, в якому панель 6 знаходиться у закритому положенні, та повнофункціональним режимом, коли панель 6 знаходиться у відкритому положенні. Це досягається за допомогою індикатора положення панелі 15, який подає сигнал контрольному блоку 16 коли панель 6 знаходиться у відкритому положенні. Контрольний блок 16 може бути мікропроцесором, драйвером дисплея або іншим засобом апаратного або програмного забезпечення. Він може управлятись автоматично або ручним натиском користувача на кнопку. Контрольний блок 16 надасть сигнал контрольному блоку дисплея 17 про зміну, в разі потреби, положення дисплея. Крім того, у відкритому положенні нефункціонуюча допоміжна клавіатура 9 буде заблокована замком 18 допоміжної телефонної клавіатури.
В альтернативному варіанті втілення винаходу, показаному на фіг.5, замість клавіатури надається допоміжна клавіатура управління грою. Клавіатура управління грою містить функціональні кнопки 19 і допоміжну клавіатуру пересування 20, змонтовану відповідно на панелях 5 та 6. Телефонна допоміжна клавіатура, як описано вище, змонтована на зворотній стороні панелі 6. В іншому варіанті прилад може бути розроблений тільки як елемент гри і в ньому буде відсутня можливість зв’язку.
Таким чином проста і компактна клавіатура надається у функціональному поєднанні з мобільним приладом зв’язку. Слід зазначити, що можуть бути використані інші блоки клавіш, наприклад французька AZERTY або німецька QWERTZ(U). Прилад буде також корисним як ігровий прилад з мікропроцесором, що керується програмним забезпеченням або вбудованим програмним забезпеченням. Формула винаходу
основний елемент (2), який має верхню і нижню поверхні (13, 14) відносно використання;
екран (3) розташований на верхній поверхні (13) даного основного елемента для надання користувачу візуального зображення (14) інформації;
першу панель (5), закріплену до верхньої поверхні (13) даного основного елемента;
другу панель (6), змонтовану на основному елементі для осьового обертання на ньому між відкритим і закритим положеннями, дана друга панель (6) має першу і другу поверхні (7, 8); перша поверхня (8) доступна користувачу в закритому положенні, а друга поверхня (7) доступна користувачу у відкритому положенні; та
3. Електронний прилад відповідно до пункту 1 або 2, що характеризується тим, що функціональна клавіатуравключає повнофункціональний блок клавіш QWERTY, розділений на першу і другу частини (10, 11), встановлені відповідно в першій і другій панелях (5, 6).
4. Електронний прилад відповідно до будь-якого попереднього пункту формули, що характеризується тим, що функціональна клавіатура включає пульт управління грою з багатьма функціональними клавішами (19, 20), розподіленими між першою і другою панелями (5, 6).
5. Електронний прилад відповідно до будь-якого попереднього пункту формули, що характеризується тим, що блок клавіш (12) на зазначених поверхнях панелей (5, 6) відгалужений для запобігання перешкод між клавішами в закритому положенні. 6. Електронний прилад відповідно до будь-якого попереднього пункту формули, що характеризується тим, що прилад є мобільним приладом зв’язку і додатково включає допоміжну клавіатуру зв’язку (9), змонтовану на першій поверхні (8) другої панелі (6), допоміжна клавіатура висувається для оперативного використання у закритому положенні.
7. Електронний прилад відповідно до пункту 6,додатково включає контрольний блок (16), який слугує для орієнтування дисплею (4) на екрані (3) сумісно з функціональним положенням першої і другої панелей (5, 6), щоб він був на одному рівні з допоміжною клавіатурою зв’язку (9) у закритому положенні та з функціональною клавіатурою (10, 11) у відкритому положенні.
8. Електронний прилад відповідно до пункту 7, характеризується тим, що дисплей (4) на екрані (3) обертається на 90° між відкритим і закритим положеннями.
9. Електронний прилад відповідно до пункту 7 або 8, що характеризується тим, що орієнтування регулюється положенням другої панелі (6).
10. Електронний прилад відповідно до будь-якого попереднього пункту формули, що характеризується тим, що допоміжна клавіатура приладу зв’язку (9) блокується в недіючому режимі у відкритому положенні.
Реферат
Дата добавления: 2014-11-29; Просмотров: 435; Нарушение авторских прав?; Мы поможем в написании вашей работы! Нам важно ваше мнение! Был ли полезен опубликованный материал? Да | Нет |