Методы, основанные на механическом разобщении микробов

Техника посева на жидкие и плотные питательные среды

Работа № 4

Культивирование микробов в лабораторных условиях

Для культивирования бактерий применяют питательные среды. Они могут быть естественными (молоко, морковь, картофель), искусственными (готовят специально). Питательные среды могут быть жидкие и плотные. В зависимости от свойств микробов используют разные среды. Их делят на 4 группы:

1) простые (универсальные) - на них растут только нетребовательные микробы (стафилококки, кишечная палочка). Это МПА И МПБ - мясопептонный агар и бульон.

2) сложные (специальные) - на них растут требовательные микробы (стрептококки, пневмококки). Они готовятся из простых сред путем их обогащения:

- сахарный агар,

- кровяной агар

3) элективные (избирательные) - на них растет только один вид микробов, а другие – нет. Например: 1%щелочная пептонная вода - для холерного вибриона, сахарный агар - для стрептококка, сывороточный агар - для дифтерийной палочки и т.д.

4) дифференциально-диагностические - для отличия одного вида от другого по ферментативной активности (среда Эндо, Гисса).

Требования к питательным средам:

- питательность,

- изотоничность,

- слабощелочная реакция среды (рН 7.2 – 7.4),

- влажность,

- стерильность,

- буферность,

- унифицированность

Метод Дригальского

Берут 3 чашки Петри с МПА, стерильной пипеткой материал помещают на поверхность МПА в чашку № 1

посев шпателем (газоном) посев петлей (штрихом)

Стерильным шпателем материал Чашку Петри с МПА делят на

Тщательно распределяют по 4 сектора. Исследуемый мате-

поверхности агара. Затем, не беря риал стерильной петлей вносят

нового материала и, не обжигая в 1 сектор и делают штрихи,

шпателя, делают посев на 2 и 3 затем такие же линии проводят

чашку МПА. и на других секторах.

На последних секторах вырастают

отдельные колонии.

1 2 3 1 2

изолированные колонии 4 3

4 сектор - изолированные колонии

Снижение концентрации микробов

Колония – видимое невооруженным взглядом скопление микробов на плотной питательной среде, выросшее из одной клетки.

Колония - это потомство микробов, выросших из одной клетки. Т.к. все микробы в колонии выросли из одной клетки, они относятся к одному виду, т.е. в каждой изолированной колонии (отдельно стоящей, не сливающейся с другими колониями) содержится чистая культура.

Метод фильтрации основан на пропускании исследуемого материала через специальные фильтры с определенным диаметром пор и разделение содержащихся микроорганизмов по величине.

Этот метод применяется для очистки вирусов от бактерий, а также при получении фагов и токсинов (в фильтрате - чистый фаг, очищенный токсин).

Методы, основанные на биологических свойствах микроорганизмов

Метод Шукевича

Техника посева. Исследуемый материал засевают в конденсационную воду скошенного агара. При размножении подвижные формы микробов из конденсационной воды дают «ползущий» рост по скошенному агару. Для получения чистой культуры ее отсевают с верхнего края посева.

1) Метод прогревания. Позволяет отделить спорообразующие бациллы от не споровых форм. Прогревают исследуемый материал на водяной бане при 80°С 10-15 мин. Вегетативные формы погибают, а споры сохраняются и при посеве на соответствующую питательную среду прорастают.

2) Бактериостатический метод (метод ингибирования). Основан на избирательном действии некоторых химических веществ и антибиотиков на микроорганизмы. Например, антибиотики позволяют очистить исследуемый вируссодержащий материал от сопутствующей бактериальной флоры. Серная кислота (5% р-р) быстро убивает большинство бактерий, а туберкулезная палочка выживает в этих условиях.

Метод заражения лабораторных животных или растений. Применяют в целях выделения и идентификации патогенных микроорганизмов и отделения их от сапрофитной флоры. Для заражения подбирают наиболее восприимчивые к предполагаемому возбудителю инфекции виды животных или сорта растений.

После появления у зараженных организмов признаков болезни их убивают и производят посев органов и тканей на питательные среды. При выделении в изучении облигатных паразитов этот метод является основным и единственным

Работа № 5

Дата добавления: 2014-12-07