Методика определения осмотической устойчивости эритроцитов

Для работы необходим ы: штатив с 18 пробирками, растворы хлорида натрия убывающей концентрации 0,9%, 0,85%, 0,8% и т.д. до 0,1% раствора), пробирка с дистиллированной водой, пробирка с цитратной кровью, взятой не более чем за 3часа до опыта, две пипетки. Объект исследования – человек.

Проведение работы: Пробирки последовательно нумеруют и ставят в штатив. Пипеткой наливают в каждую пробирку по 3 мл раствора хлорида натрия в убывающей концентрации, а в последнюю -3 мл дистиллированной воды. Затем второй пипеткой в каждую пробирку добавляют по двек капли цитратной крови. Через 5 мин смотрят результаты – наличие или отсутствие гемолиза.

Оформление результатов и их оценка: при полном гемолизе жидкость в пробирке прозрачна и ярко окрашена. При частичном гемолизе раствор окрашен слабее, и в нижней части пробирки жидкость мутная. При отсутствии гемолиза жидкость окрашена слабо, мутная, за исключением верхнего ободка. На основании этого определяют (в процентной концентрации хлорида натрия) минимальную устойчивость эритроцитов по появлению признаков гемолиза и максимальную – по возникновению полного гемолиза. В норме колебания устойчивости эритроцитов лежат в пределах 0,48-0,44% (минимум) и 0,34-0,32% (максимум).

Методика определения среднего содержания гемоголобина в одном эритроците (СГЭ).

Для работы необходим ы: полученные ранее показатели уровня гемоглобина и количества эритроцитов образца анализа крови. Объект исследования – человек.

Проведение работы: Зная количество эритроцитов в 1л и уровень гемоглобина в г/л образца крови, вычисляют среднее содержание гемоглобина в эритроците (СГЭ), используя формулу: СГЭ = уровень гемоглобина (г/л) / количество миллионов эритроцитов в 1 л. Например, если уровень гемоглобина 12г % (120г/л), эритроцитов - 4000000, то СГЭ =120/4=30пг.

Оформление результатов и их оценка: записать рассчитанный показатель среднего содержания гемоглобина и выразить его в пикограммах. Сравнить с нормальной величиной. В норме СГЭ равно 26-36 пг (нормохромные эритроциты). Снижение или повышение этого показателя присуще различным типам анемий.

ТЕСТОВЫЕ ЗАДАНИЯ ДЛЯ САМОКОНТРОЛЯ УРОВНЯ знаний:

1. Отрицательный заряд эритроцитов обусловлен

A. белками мембран эритроцитов

B. сиаловой кислотой мембран эритроцитов

C. спектрином и анкерином

D. натрий- калий зависимой АТФ-азой

E. карбоангидразой

2. Перечисленные факторы обуславливают величину СОЭ, за исключением

A. количества лейкоцитов

B. количества альбуминов

C. количества глобулинов

D. количества фибриногена

E. количества эритроцитов

3. Как оценить сдвиг кривой Прайс-Джонса влево?

A. сфероцитоз

B. макроцитоз

C. микроцитоз

D. пойкилоцитоз

E. анизоцитоз

4. Количество эритроцитов у новорожденного около...:

A. 4.0 Т/л

B. 5.0 Т/л

C. 3.7 Т/л

D. 4.5 Т/л

E. 5.9 Т/л

5. Укажите состояния организма, характеризующиеся выходом эритроцитов из депо, за исключением:

A. сон

B. боль

C. физическая нагрузка

D. гипоксия

E. кровопотеря

6. Минимальный гемолиз эритроцитов происходит в растворе:

A. 0.52-0.48% Na CI

B. 0.46-0.42% NaCI

C. 0.40-0.36% NaCI

D. 0.34-0.32% NaCI

E. 0.30-0.28% NaCI

7. Максимальный гемолиз эритроцитов происходит в растворе:

A. 0.52-0.48% NaCI

B. 0.46-0.42% NaCI

C. 0.40-0.36% NaCI

D. 0.34-0.32% NaCI

E. 0.30-0.28% NаС1

8. СОЭ является мерой следующего физико-химического свойства крови:

A. устойчивости коллоидного раствора

B. суспензионных свойств крови

C. объема клеточной части крови

D. вязкости крови

E. объема плазмы крови

9. Эритроциты выполняют следующие функции, за исключением:

A. эритропоэтическую

B. иммунологическую

C. гомеостатическую

D. гемостатические

E. трофическую

10. В условиях хронического эксперимента у животного пережали почечную артерию. Через 3 дня определили содержание эритроцитов в его крови. Как можно оценить полученный результат?

A. нормальное содержание эритроцитов

B. относительный эритроцитоз

C. абсолютный эритроцитоз

D. абсолютная эритропения

E. относительная эритропения

Ответы: 1-B. 2-A. 3-C. 4-E. 5-A. 6-B. 7-D. 8-B. 9-E. 10-C.

ТЕСТОВЫЕ ЗАДАНИЯ ДЛЯ САМОКОНТРОЛЯ УРОВНЯ знаний по программе «Крок»:

1. У кролика ежедневно для исследования брали 15 мл крови. Через 10 дней после забора крови определили содержание эритроцитов (Э) и гемоглобина (Нв). Как можно оценить количество Э и Нв в крови у кролика?

A. количество Э увеличено, Нв увеличено

B. количество Э увеличено, Нв не изменилось

C. количество Э не изменилось, Нв не изменилось

D. количество Э уменьшено, Нв уменьшено

E. количество Э уменьшено, Нв не изменилось

2. У спортсмена-альпиниста перед тренировочными сборами в горах в крови содержалось 4.5 Т/л эритроцитов. Как изменится количество эритроцитов через 2 недели пребывания на высоте 2000 метров над уровнем моря?

A. физиологическая форма

B. абсолютный эритроцитоз

C. относительный эритроцитоз

D. абсолютная эритропения

E. относительная эритропения

3. Больной с протезом клапана аорты поступил в клинику для дополнительного обследования в связи с признаками гемолитической анемии? Какой вид гемолиза имеет место у больного?

A. иммунный

B. осмотический

C. механический

D. термический

E. биологический

4. Секреция эритропоэтинов обусловлена …

A. концентрацией андрогенов в крови

B. концентрацией катехоламинов в крови

C. уровнем оксигенации почек

D. концентрацией эстрогенов в крови

E. концентрацией глюкокортикоидов в крови

5. Как оценить сдвиг кривой Прайс-Джонса вправо

A. сфероцитоз

B. макроцитоз

C. микроцитоз

D. пойкилоцитоз

E. анизоцитоз

6. Какое физиологическое свойство обеспечивает форма эритроцита в виде двояковогнутого диска?

A. осмотическую стойкость

B. пластичность мембраны

C. антигенную дифференциацию крови

D. облегчение диффузии газов через мембрану

E. транспорт глюкозы и гепарина.

7. У пациента количество эритроцитов составляет 5,7 млн в мл. Что можно предположить исходя из этого результата если известно, что он здоров?

A. Пациент - взрослый мужчина

B. Пациент - шахтер

C. Пациент – житель высокогорья

D. Пациент – беременная женщина

E. Пациент – взрослая женщина

8. Какой фактор способствует внутрисосудистому гемолизу эритроцитов?

A. Увеличение липидов в крови

B. Замедление кровотечения

C. «Молодой» возраст эритроцитов

D. Увеличение липидов в плазме

E. Старение эритроцитов

9. У мужчины, который находится в стационаре анализ крови обнаружил большое содержание эритроцитов, которые имеют ядро. Какое состояние может привести к появлению большого количества ядерних эритроцитов?

A. Холера

B. Ожог

C. Дизентерия

D. Острая кровопотеря

E. Гиперхромная лихорадка

10. У человека количество эритроцитов уменьшилось до 2 миллионов в 1 мл. Это сопровождается одышкой, обмороком, шумом в ушах. Наиболее вероятная причина …

A. Гипоксия

B. Нарушение дыхательной функции крови

C. Уменьшение количества гемоглобина

D. Недостаточная кислородная емкость

E. Все ответы правильне.

Ответы: 1-A. 2-B. 3-C. 4-C. 5-B. 6-D. 7-C. 8-E. 9-D. 10-E.

Ситуационные задачи:

1. При подсчете клеток в 5 больших квадратах камеры Горяева оказалось 580 эритроцитов. Рассчитайте, сколько их содержится в 1 л кроки, если кровь набиралась в смеситель до метки 0,5?

2. В 1 мм³ крови содержится 6 млн эритроцитов. Рассчитайте, сколько всего их в циркулирующей крови, если 20 % всей крови находится в депо? Массу тела принять за 80 кг.

3. При измерении диаметра эритроцитов артериальной и венозной крови оказалось, что он неодинаков. Нормальное ли это явление, и можете ли вы указать, какие эритроциты взяты из артерии, какие - из вены?

4. У животного во время проведения эксперимента произошло изменение генов, приведшее к нарушению структуры гемоголобина. При этом произошло изменение генов, приведшее к нарушению структуры гемоголобина, при этом появилдись признаки гипоксии (увеличение ЧСС и частоты дыхания). По данным анализа крови отмечено снижение содержания гемоглобина в эритроцитах. Через 2 недели в крови отмечено увеличение количества эритроцитов, нормализовалась ЧСС и частота дыхания (признаки гипоксии постепенно исчезли). Объясните: 1. Нарушение какой функции крови произошло в эксперименте, чем это было вызвано? 2. Какие компенсаторные реакции привели к снижению проявлений гипоксии в организме, в чем онипроявились? 3. Какие показатели крови зависят от уровня содержания гемоглобина?

5. При помещении в раствор поваренной соли эритроциты приобрели шарообразный вид. Какова приблизительная концен­трация солей в этом растворе? Как называется этот процесс?

6. Постройте кривые осмотической резистентности эритро­цитов по следующим показателям:

Концентрация NaCl	% разрушенных клеток	Концентрация NaCl	% разрушенных клеток
А	0,6		В	0,5
0,5		0,4
0,4		0,35
0,35		0,30

Оцените полученные результаты.

7. Постройте кривую кислотной резистентности эритроци­тов, если в процессе исследования были получены следующие цифры:

За 1 минуту разрушилось	за 2 мин	за 3 мин	за 4 мин	за 5 мин	за 6 мин	за 7 мин	за 8 мин
0 % эритроцитов	1,8%	18,8%	40,4%	24,2%	11%	8,7%	0,5%

Оцените результат. Объясните, соответствуют ли норме параметры эритротраммы?

8. Количество эритроцитов в 1 л крови 5,5 х 10¹², а концентрация Hb - 140 г/л. Рассчитайте цветовой показатель. Укажите, отличается ли он от нормы.

9. Цветовой показатель равен 0,9, концентрация Нв 105 г/л. Рассчитайте, сколько эритроцитов содержится в литре данной крови?

10. Рассчитайте кислородную емкость крови у человека ве­сом 70 кг, если концентрация Нв 150 г/л, цветной показатель равен 1,0, а количество крови 4,5 л?

11. Рассчитайте уровень Нв в крови, если количество эритро­цитов равно 5 млн в 1 мм^3, ЦП = 1, а количество крови 4,5 л?

12. Рассчитайте, как изменится осмотическая и кислотная стойкость эрит­роцитов, если количество ретикулоцитов в крови возрастет в 3 раза?

13. При анализе крови практически здоровой женщины най­дено следующее: СОЭ =35мм/ч, эритроцитов 3,5х10^12/л, белка 60 г/л. Объясните, при каком состоянии у женщины могут быть такие показатели состава крови?

14. При анализе крови оказалось, что число эритроцитов 3 х 10¹²/л, средний их диаметр 8,2 микрона, у некоторых до 12 микро­нов. Шесть месяцев назад больной перенес резекцию желудка. С чем связаны обнаруженные изменения в крови и как они называ­ются?

15. Количество эритроцитов у человека в течение ряда лет колебалось около 4,8 х 10^12/л. После переселения его семьи на но­вое место число эритроцитов в крови возросло до 6,5 х 10^12/л. Объясните, в ка­кую местность переехал человек и сколько времени он там живет? На какой высоте над уровнем моря стоит его жилище?

16. Перед вами два анализа крови одного и того же человека. Объясните, какая между ними разница?

Эритроцитоз	Нв	ОЦК	Гематокрит
А Б	5х10^12/л 5х10^1^2/л	145 г/л	5л	45%
148 г/л	5л	48%

17. Объясните, чем отличается реакция эритрона на гипоксию у нефрэктомированных животных от реакции нормальных собак?

18. У человека натощак найдено в крови 5 х 10¹²/л эритроци­тов. Спустя 30 минут после приема 250 мл теплой воды их стало 4,8 х 10¹²/л. Гематокритный показатель возрос с 45 % до 46 %. Оп­ределите, как и на какую величину (в %) изменился объем эритро­цитов.

19. Человек потерял 20 % крови. Рассчитайте, какое примерно количество эритроцитов должно быть у него через 1 час и через 1 сутки?

20. Человек найден мертвым в своей квартире. При осмотре места происшествия обнаружено, что в комнате плотно закрыты окна, п в печи еще теплые уголья. В связи с этим возникло подоз­рение об отравлении угарным газом. Можно ли с помощью про­стейшею спектрального анализа крови подтвердить или опроверг­нуть это предположение?

21. Можно ли врачу оказывать медицинскую помощь постра­давшему от отравления угарным газом в том же помещении?

22. У студента, принимавшего во время сессии для поднятия трудоспособности фенацетин, появились все признаки кислород­ной недостаточности. Однако клинический анализ крови показал, что число эритроцитов и Нв находятся в пределах нормы, сердце работает нормально, а количество кислорода в воздухе достаточно. О какой причине можно думать и какой анализ крови может по­мочь в установлении причины появления таких симптомов, если известно, что фенацетин - сильный окислитель?

23. Произошло убийство. В квартире подозреваемого на полу обнаружены темно-красные пятна. Как доказать, что это кровь, а не краска?

24. Перед нами два анализа крови. Вычислите цветной показатель у обоих больных и сделайте заключение. А. Эритроцитов 4,5 х 10¹²/л, Нв 148 г/л, Б. Эритроцитов 2,7х10¹²/л, Нв 70,4 г/л.

25. Реципиент получил 1 л нормальной донорской крови. Рассчитайте, на­сколько возросла кислородная емкость его крови?

26. Содержание Нв в крови соответствует норме. Масса ис­пытуемого 80 кг. Рассчитайте, какое количество кислорода может быть связано его кровью.

27. Концентрация Нв 160 г/л. Количество эритроцитов 2,5 х 10¹²/л. Подсчитайте ЦП и дайте оценку всем показателям.

28. Объясните, какая кровь - артериальная или венозная - темнее и почему? Укажите нормальный уровень гемоглобина в крови и охарактеризуйте функции физиологических соединений гемоглобина.

29. В крови животного обнаружен эритроцитоз как результат стеноза почечной артерии. Объясните, чем обусловлены изменения концентрации эритроцитов.

30. Какой из приведенных ниже анализов крови получен до начала физической работы у человека?

	А	В
ОЦК	4,96л	5,0л
Гематокрит	48%	48%
Эритроциты	4,16	4,5
Гемоглобин	125г/л	135 г/л
ЦП	1,0	1,0

31. Вычислите содержание НЬ в одном эритроците, если концентрация гемоглобина 133 г/л, а эритроцитов 4 х 10¹²/л.

ответы к Ситуационным задачам:

1. В больших квадратах содержится 80 маленьких, объем каждого из них 1/4000 мм³. Кровь для подсчета эритроцитов разведена в 100 раз (метка 0,5). Следовательно, в 1 куб мм крови содер­жится (580 х 4000 х 200):80 = 5880000 эритроцитов, а в литре крови - 5,88 х 10¹².

2. Если принять, что в организме 7 % веса тела приходится на кровь, то у человека весом 69 кг ее объем 5,6 л. В условии задачи сказано, что циркулирует 80 %, т. е. 4,5 л. Если в литре крови 6 х 10¹² эритроциов, то в циркулирующей крови данного человека их 27 х 10¹².

3. Эритроциты венозной крови крупнее, так как в процессе газообмена внутри них оказывается относительно больше солей, вслед за которыми в силу законов осмоса поступает в клетку вода.

4. 1. В эксперименте было отмечено нарушение транспортной (дыхательной) функции крови, а именно – нарушение транспорта кислорода к органам и тканям организма. Это было вызвано снижением содержания гемоглобина в эритроцитах крови. 2. При гипоксии в качестве компенсаторных реакций у животного было отмечено увеличение ЧСС и увеличение ЧД. 3. От уровня содержания гемоглобина в крови будет зависеть кислородная емкость крови, также необходимо помнить о буферной функции гемоглобина – участие в регуляции рН крови.

5. Концентрация солей меньше 0,9 %, но больше 0,5 %. От­мечается сферуляция эритроцитов.

6. Нормальное положение точек: начало гемолиза — 0,50 % NaCl, максимум - 0,45 % NaCl, конец гемолиза — 0,35 % NaCl. Следовательно, эритроциты первого образца крови более устойчивы к осмотическому воздействию.

7. Начало гемолиза и положение максимума находятся в пределах нормы, но точка окончания гемолиза сдвинута влево. Это свидетельствует о появлении в крови молодых форм эритроцитов, что может быть при анемии, гипоксии, раздражении костного мозга.

8. ЦП =140х3/550=0,76. Показатель ниже нормы, в норме он составляет 0,85-1,05.

9. Подставив цифры, уазанные в задаче в формулу для определения цветового показателя, находим, что у больного 3,5х10¹²/л крови. Малокровие.

10. Количество крови у данного человека 4,9 л. Гемоглоина в ней 735 г. Учитывая, что 1 г Нв может связать 1,34 мл кислорода, общая кислородная емкость крови - ОКЕК - около 1000 мл, а кислородная емкость 100 мл крови (удельная кислородная емкость - УКЕК) равна 20,4 мл.

11. При данных условиях содержание Нв в крови (исходя из формулы для определения цветного показателя) равно 16,6 г%. В 4,5 л крови при такой концентрации его содержится 750 г.

12. Увеличение числа ретикулоцитов в периферической крови является признаком омоложения ее клеточного состава. Молодые эритроциты более устойчивы к гемолитическим воздействиям. Следовательно, в данном случае произойдет сдвиг кислотной устойчивости вправо, а осмотической - в сторону более гипотонических растворов.

13. Подобные изменения в крови (ускорение СОЭ, снижение числа эритроцитов и гипопротеинемия) могут быть при беременности.

14. Анемия и макроцитоз характерны для В-12-дефицитной анемии. Так как шесть месяцев назад больному была проведена резекция желудка, то анемия вызвана дефицитом внутреннего антианемического фактора Кастла, который вырабатывается слизистой желудка и способствует усвоению витамина В-12.

15. Человек переехал в горы. Так как подъем на каждые 1000м над уровнем моря вызывает увеличение числа эритроцитов на 700000 в мм куб, то человек поднялся на 2,5 км.

16. Различие в анализах касается гематокритного показателя, возрастание которого при неизменном количестве эритроцитов и одинаковом общем объеме крови указывает на увеличение объема каждого эритроцита.

17. Реакция эритрона на гипоксию у нефрэктомированных животных будет менее выраженной, так как стимулятор эритропоэза – эритропоэтин - вырабатывается почками.

18. После питья число эритроцитов составило 90 % исходной величины. Если бы после приема воды объем каждого из них оста­лся бы прежним, то общий их объем должен был уменьшится до 96%, и составить 43,2 % всей крови. Но в действительности об­щий объем эритроцитов стал равен 46 % объема крови. Это значит, что объем эритроцитов увеличился на 6% по сравнению с первоначальным.

19. Через один час концентрация эритроцитов будет почти нормальной, так как в это время объем крови еще не восстановился и разведения эритроцитов плазмой не произошло. Через сутки после кровопотери концентрация эритроцитов станет примерно на 20% меньше обычного, так как общее количество крови восстанавливается в основном за счет жидкости (срочная регуляция объема циркулирующей крови).

20. Можно. Необходимо к пробе крови добавить какой-либо восстановитель. Если в исследуемой крови находится оксигемоглобин, то он перейдет в восстановленную форму Нв и спектр поглощения изменится –вместо двух полос поголщения в желто-зеленой части спектра появится одна широкая. Если спектр не изменится, значит в крови находится карбоксигемоглобин, и, следовательно, человек отравился угарным газом.

21. Можно, но необходимо хорошо проветрить помещение, открыв все окна и двери. Если есть возможность – лучше вынести из отравленного помещения.

22. Прием фенацетина, являющегося сильным окислителем, может вызвать образование в крови стойкого соединения - метгемоглобина, что приводит к кислородному голоданию. Помочь в подтверждении предполагаемого диагноза может спектральный анализ крови. Метгемоглобин имеет дополнительную полосу поглощения в красной части спектра.

23. Доказать, что пятна на полу оставлены кровью, поможет спектроскопия смыва или обнаружение кристаллов солянокислого гемина в соскобе (т.н.реакция Тейхмана).

24. В обоих случаях цветной показатель одинаков и соответствует норме. Гематологические же показатели второго больного свидетельствует о наличии кровопотери (нормохромная анемия).

25. Примерно на 200 мл

26. Около 1000 мл

27. Гиперхромая анемия. ЦП больше 1.

28. Венозная темнее, так как восстановленный гемоглобин имеет темно-коричневый цвет. Артериальная кровь алая из-за алого цвета оксигемоглобина.

29. Повышенным выделением эритропоэтина из гипоксической почки.

30. Анализ А получен до работы. При физической работе из депо было выброшено дополнительное количество крови.

31. Содержание Нв в одном эритроците 33,25 мк/мкг

Дата добавления: 2014-11-28