Методика подсчета лейкоцитов крови в счетной камере Горяева

ПРОГРАММА ПРАКТИЧЕСКОЙ РАБОТЫ НА ЗАНЯТИИ.

Тема 3. Исследование защитных свойств крови. функции лейкоцитов. Понятие про иммунитет, его виды.

Мотивационная характеристика темы. Знание защитных свойств крови, функций лейкоцитов необходимо для понимания механизмов иммунологических реакций в изменяющихся условиях окружающей среды, обеспечивающих нормальный уровень метаболических процессов в тканях.

Цели занятия: знать – 1) свойства и функции лейкоцитов; 2) физиологические механизмы, лежащие в основе методов исследования количества и функций лейкоцитов.

ВОПРОСЫ ДЛЯ УСТНОГО И ТЕСТОВОГО КОНТРОЛЯ:

1. Лейкоциты, их виды, строение.

2. Функции разных видов лейкоцитов.

3. Количество лейкоцитов в крови, его изменения при разных физиологических состояниях организма.

4. Лейкоцитоз, виды. Отличия физиологического лейкоцитоза от патологического. Лейкопения.

5. Лейкоцитарная формула, ее возможные изменения.

6. Лейкопоэз, регуляция количества лейкоцитов в крови.

7. Иммунитет, его виды и значение.

8. Неспецифический иммунитет, его механизмы.

9. Роль тимуса, лимфатических узлов и селезенки в обеспечении неспецифического и специфического иммунитета.

ВОПРОСЫ ДЛЯ ПИСЬМЕННОГО ОТВЕТА:

1. Нарисуйте строение различных видов лейкоцитов.

2. Опишите структурные и функциональные различия разных видов лейкоцитов

3. Опишите, что такое лейкоцитоз и лейкопения.

4. Опишите различия между физиологическим и патологическим лейкоцитозом

5. Опишите виды иммунитета и укажите роль отдельных форм лейкоцитов в иммунитете.

6. Опишите механизмы специфического и неспецифического иммунитета.

7. Опишите возрастные изменения иммунитета.

1. Определить количество лейкоцитов в литре крови с помощью счетной камеры.

2. Посчитать лейкоцитарную формулу в мазке крови и дать заключение.

Для работы необходим ы: скарификаторы, ватные шарики, спирт, эфир, счетная камера Горяева, смеситель (меланжер) для подсчета лейкоцитов, 5% раствор уксусной кислоты, подкрашенный метиленовым синим, микроскоп. Объект исследования – человек.

Проведение работы: Счетную камеру помещают под микроскопом и рассматривают сетку Горяева вначале при малом, а затем при большом увеличении. Накрывают камеру покровным стеклом, притирая его края к стеклу камеры до появления радужных колец Ньютона. Оставив камеру под микроскопом, прокалывают палец ранее описанным методом. Первую выступившую каплю крови из пальца стирают ватным тампоном. Во вторую каплю погружают кончик смесителя для лейкоцито, держат его вертикально и набирают кровь до отметки 1, следя, чтобы в капилляр не попали пузырьки воздуха. Обтирают конец капилляра фильтровальной бумагой и быстро, пока кровь не свернулась, переносят его в чашку с 5% раствором уксусной кислоты, продолжая держать смеситель вертикально. Набирают раствор до метки 11 (т.е. разводят кровь в 10 раз), после чего смеситель переводят в горизонтальное положение и кладут на стол.

Для подсчета лейкоцитов берут заполненный меланжер, зажимая нижний конец пальцем, снимают резиновую грушу и, зажав оба конца смесителя третьим и первым пальцами, в течение 1 мин перемешивают кровь. При этом эритроциты разрушаются и в поле зрения остаются только лейкоциты, точнее их ядра. Т.к. уксусная кислота подкрашена метиденовым синим, ядра лейкоцитов становятся видны отчетливее. Выпускают из смесителя на вату три капли, а четвертую наносят на среднюю площадку камеры у края покровного стекла. Капиллярными силами капля сама втягивается в покровное стекло и заполняет камеру. Излишек раствора крови стекает в желобок. Если на сетку попал воздух или на боковых площадках оказался излишек раствора, камеру следует промыть дистиллированной водой, высушить и заполнить снова. Заполненную камеру ставят под микроскоп и, если форменные элементы расположены равномерно (что является показателем хорошего перемешивания крови), приступают к подсчету. Подсчитывают число лейкоцитов в 25 больших квадратах (разделенных на 400 маленьких). Подсчет ведут в пределах маленького квадрата по рядам (от верхнего до нижнего). Во избежание двукратного подсчета клеток, лежащих на границе между малыми квадратами, применяют правило Егорова: «к данному квадрату относятся эритроциты, лежащие как внутри квадрата, так и на его левой и верхней границах; эритроциты, лежащие на правой и нижней границах, к данному квадрату не относятся». Подсчитав сумму лейкоцитов в 25 больших квадратах (что составляет 400 маленьких), находят среднее арифметическое число лейкоцитов в одном маленьком квадрате. Зная, что объем пространства камеры над одним маленьким квадратом равен 1/4000 мм³, умножают найденное число на 4000. Получают число лейкоцитов в 1 мм³ разведенной крови. Умножив на величину разведения (10), получают количество лейкоцитов в 1 мм³ цельной крови. Таким образом, формула для вычисления количества лейкоцитов следующая: Х = (Л х 4000 х 10)/400, где х – искомое числолейкоцитов в 1мм³ цельной крови, Л – сумма лейкоцитов в 400 маленьких квадратах, 400 – число маленьких квадратов, в которых произведен подсчет, 10- разбавление крови. Затем полученное число лейкоцитов записывают в пересчете на 1 л крови, т.е. число тысяч лейкоцитов, найденных в 1 мм³, умножают на 10⁹.

Оформление результатов и их оценка: Записать, сколько лейкоцитов содержится в 1 л исследуемой крови. Сравнить полученные результаты с нормой. У взрослых этот показатель составляет 6-8 тыс в 1мм³ или (6,0 - 9,0) х10⁹.

Дата добавления: 2014-11-28